Histologie des Glandes Annexes Digestives (Chapitre 3/3 de l'Histologie du l'...
Thibault Virus A Et E
1. Virus de l'hépatite A et E
Virus et marqueurs diagnostiques
Vincent THIBAULT
Laboratoire de Virologie
Groupe Hospitalier
Pitié-Salpêtrière
Assistance Publique Hôpitaux de Paris
V.Thibault DU_janv.-2010 1
2. Hépatites virales
mode de transmission préférentiel
parentéral féco-oral
B non A, non B A
1965 D 1972
1977
C E
1990 1991
F, G, TTV, autres…
V.Thibault DU_janv.-2010 2
3. Historique VHA
“La Jaunisse”
1745 : Cockayne, hépatites épidémiques
1908 : McDonald, "notion de virus…"
Reproduction de la maladie 1942 :
Volontaires (Voegt, Havens), Paul 1943 ingestion feces/serum
Entité clinique :
17-18ème siècle - 1923 Blumer - 1947 McCallum (VHA "infectious"-VHB "serum")
Visualisation : 1973 (Feinstone)
Développement de la sérologie : épidémiologie
1979 : culture (Provost et Hilleman)
1981... : Clonage, Séquences nucléotidiques
1991… : Vaccination
2006 : Déclaration obligatoire
V.Thibault DU_janv.-2010 3
7. Cycle de multiplication du VHA en culture de cellules
Attachement
Libération Réplication
du génome
Espace +
de Disse -
ire
Traduction
cellula
Synthèse +
de la polyprotéine
-
rane
Memb
P3
Maturation
P2 Réticulum
endoplasmique
P1
Empaquetage
Canalicule
Relargage biliaire
V.Thibault DU_janv.-2010 7
8. VHA : physiopathologie
Absence d'effet cytopathique direct :
cytolyse résultant du processus immun de
défense de l'hôte,
médiation cellulaire
médiation humorale
V.Thibault DU_janv.-2010 8
9. Propriétés Physiques du VHA
Agents Stabilité
Chaleur
Autoclavage (121°C, 20') Inactivation
100°C Inactivation
60°C Stable 1 heure
température ambiante Stable 1 mois (selles, eaux, sols)
Plusieurs jours sur surface sèche
4 h. Sur les mains
4°C Stable plusieurs mois
Congelé Stable des mois ou années
Acide-base pH 1 : stable 5 h.
PH 3-11 : stable au moins 30'
U.V. Inactivation
Chimiques
Chlore, ozone, Inactivation
glutaraldéhyde, iode
Alcool 70° 3' : inactivation partielle
V.Thibault DU_janv.-2010 9
11. Génotypes et
phylogénie
VP1/P2A
Génotypes : >15% variations
Sous types : 7.5% variations
D'après Nainan et al. 2006
Clin. Microb. Rev. ; 19:63-79
IV Nonhuman primate, Philippines
V Nonhuman primate, Kenya
VI Nonhuman primate, Indonesia
Phylogenetic analysis of 3,582 HAV isolates
in the VP1/P2B region (315-bp fragment).
V.Thibault DU_janv.-2010 11
12. Répartition mondiale des génotypes
Génotypes infectant l'homme en noir , les singes en rouge.
Souche PA21 (génotype IIIA), isolée d'un singe Panamanian Owl en vert.
Cristina J, Costa-Mattioli M. Virus Res. 2007 Aug;127(2):151-7.
V.Thibault DU_janv.-2010 12
13. VHA : Paramètres Biologiques
Ac anti-VHA = hépatite A ancienne ou vaccination
IgM anti-VHA = hépatite aiguë A (clinique)
protection contre réinfection
Ag foie IgG
Symptomes
Ictère
VHA Selles
IgM
VHA Sang
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 24
V.Thibault DU_janv.-2010 13
Semaines
14. VHA : Marqueurs disponibles
1- Sang : Marqueurs indirects
IgM Marqueurs indirects (+++)
IgG (ELISA)
Génome viral (RT-PCR) 105 virions/mL sang Salive :
IgG (ELISA)
2- Selles : 109 virions/g selles Génome viral (RT-PCR)
Génome viral (RT-PCR) - épidémiologie
Particules virales IEM - EIA
3- Milieux : Marqueurs directs
Génome viral (RT-PCR) (plus spécialisé)
Particules virales IEM
4- Foie :
Ag viral à la surface des hépatocytes
Génome viral : hybridation, RT-PCR
V.Thibault DU_janv.-2010 14
15. IgM HAV uniquement à bon escient !
1%
11 %
82 %
Faux positifs
Roque Afonso et al. CID 2006:42 -887
Alaska : test "réflexe" si Ig-VHA totales + Ig M HAV
32 % de faux + (Castrodale CID 2005:41;e86)
Vaccination : 8 à 20 % d'IgM VHA + dans les 2 à 3 semaines suivant
l'injection…
NE RECHERCHER L'IgM anti-VHA QU'EN CAS D'HEPATITE AIGUË
V.Thibault DU_janv.-2010 15
16. Marqueurs biochimiques
Diagnostic Transaminases (ALAT, ASAT)
Bilirubine
Phosphatase alcaline
Facteurs de coagulation
Sérologie +++
IgM anti VHA : infection récente
IgG anti VHA : infection passée ou vaccination
IgM et IgG anti VHA
Diagnostic direct (-) [uniquement dans le cadre d'études]
Virémie : techniques sensibles (105 v./mL)
Recherche de virus dans les selles, prolongée, importante
(109v./mL), épidémiologie
Salive :
IgG (ELISA)
V.Thibault DU_janv.-2010 16 Génome viral (RT-PCR)
17. Hépatite A : le vaccin
virus inactivé
AVAXIM 160U suspension injectable seringue préremplie
Virus de l'hépatite A souche GBM cultivée sur cellules diploïdes humaines MRC-
5 , inactivé
HAVRIX 1 440 U Elisa/ml susp inj IM Ad en seringue
HAVRIX 720 U Elisa/0,5 ml susp inj IM Enf/Nour en seringue
Souche HM 175 du virus de l'hépatite A cultivée sur cellules humaines
diploïdes MRC5
Le schéma vaccinal habituel comprend 1 dose suivie d'un rappel (1 dose) 6 à
12 mois plus tard.
La persistance des anticorps anti-VHA après vaccination n'est
actuellement pas connue . Les données disponibles suggèrent la persistance
des anticorps anti-VHA à un niveau protecteur jusqu'à 10 ans (20 ans ?)
après primo-immunisation.
Hepatitis A Vaccine versus Immune Globulin for Post-exposure Prophylaxis
V.Thibault DU_janv.-2010 17
Victor et al. 2007 N Engl J Med 357;17
18. Difficultés diagnostiques
En routine
Adresser prélèvements
au
Centre national de référence du VHA
Pr E Dussaix
Laboratoire de virologie
Hôpital Paul Brousse
12-14 av Paul Vaillant Couturier
94804 Villejuif cedex
Tel : 01 45 59 37 21
http://invs.sante.fr/surveillance/cnr/liste
V.Thibault DU_janv.-2010 18
19. SRAS ?
Hépatite E ? Grippe
V.Thibault DU_janv.-2010 19
20. Historique VHE
Découverte dépendante de la connaissance des virus des hépatites
1955 : Inde, hépatite chez des personnes immunisées contre le
VHA, épidémie particulière. "NANBH"
Entité clinique 1980 - similitude avec l’hépatite A :
Inde : prévalence de l’hépatite A importante
Epidémie : autre virus des hépatites, contamination par l’eau
1983 : reproduction de l’hépatite non A-non B chez un volontaire
immunisé contre VHA (Balayan)
Hépatite à J36
J28-45, visualisation de particules virales > VHA (27-30nm)
Reproduction de l’infection chez le singe (cynomolgus)
Hépatite "non A - non B" à transmission entérique (ENANB)
1990 : Reyes et al. clonage et séquençage "VHE"
1991 : Tam et al. VHE
2000 : Panda et al. cDNA infectieux
V.Thibault DU_janv.-2010 20
22. VHE Virus non enveloppé
Sphérique (SRV)
Famille : Hepeviridae Surface irrégulière
Genre : Hepevirus Capside 27-34 nm
Symétrie icosaédrique
ARN simple brin
hélice droite
polarité +
7,5kb
poly-A extrémité 3’
Stabilité
Au laboratoire : instable(-70 à +8°C)
Décongélation/congélation
Tractus GI : stable (pH)
V.Thibault DU_janv.-2010 22
23. Organisation génomique
Non structurales Structurales
7 200 nt ARN polarité +
3’NC
5’ NC 28 5109 7124
Poly-A
ORF3
MeT Y Pro P X Hel RdRp ORF2
Génotypes 1-3
Protéines
DIAGNOSTIC
immunogènes
Hétérogénéité génétique
Au moins 4 groupes majeurs (<20% hétérogénéité ORF2) subdivisés
en 24 sous groupes dont homologues animaux :
Epitopes majeurs : parties C-ter de l’ORF3 et ORF2
Protection croisée entre différentes souches : un seul sérotype
Développement de tests sérologiques (performances équivalentes entre
les différents types ?)
Vaccin : ORF 2 recombinante
V.Thibault DU_janv.-2010 23
24. Hétérogénéité génétique
Au moins 4 groupes majeurs (<20% hétérogénéité ORF2) subdivisés en 24 sous
groupes dont homologues animaux :
I- Birmanie et certaines souches africaines et asiatiques
II- Mexique et certaines souches du Niger
III- Amérique, Italie, NZ, Autriche, Grèce, Argentine (+ souches porcines)
IV- Chine, Taiwan et Japon (plus sévère que III ?)
Epitopes majeurs : parties C-ter de l’ORF3 et ORF2
Connaissances limitées sur l’immunité contre les Ag natifs
Parties structurales variables
Grande homologie des parties non structurales
Protection croisée entre différentes souches : un seul sérotype
Développement de tests sérologiques (performances équivalentes entre
les différents types ?)
Vaccin : ORF 2 recombinante
V.Thibault DU_janv.-2010 24
25. NL (porc)
301 nt 5' end of ORF2 sequences from 275 HEV strains,
3c Taiwan (porc)
Génotype < 20% hétérogénéité ORF2
Japon 3b 3d 3e France, UK, Japon,
+ porc Espagne + porc
Espagne, UK, Grèce,
NL, Japon + porc
3f
4e
Inde (porc)
3 4a
US, Japon,
Corée, NL + porc
4 Chine, Taiwan
3a
1 2
Chine, Inde, 4b
1c
Nepal, Russie Chine, Taiwan
Japon, Vietnam
Chine, Pakistan, 1b
Bengladesh 4c
Inde, Népal, Birmanie, 1a
Japon, Espagne 1d
4d
Algérie, Namibie, 1e Chine (porc)
D'après Lu et al. Rev. Med. Afrique C.
Virol. 2006;16:5-36 Mexico, Nigeria 0.05
Maroc, Algérie
V.Thibault DU_janv.-2010 25
26. Similarités des
souches humaines et
animales
Borgen et al. BMC Infectious Diseases
2008, 8:61
Genetic relatedness between HEV
strains from human and non-human
sources and from various countries.
Minimal spanning trees of 81 sequences
of 148 nucleotides HEV RNA showing
genetic distances between genotype 3
HEV
strains from humans and animals.
Dutch cases are marked with ID
numbers inside the colored circles.
V.Thibault DU_janv.-2010 26
27. Similarités des souches humaines et animales
Bilic et al. Journal of General Virology
(2009), 90, 863–873
humaines aviaires
Unrooted phylogenetic tree of four avian HEV
and nine mammalian HEV isolates, based on
the complete genome region
V.Thibault DU_janv.-2010 27
28. Similarités des souches humaines et animales
Zhao et al. Journal of Medical Virology
81:1371–1379 (2009)
Phylogenetic tree of based on
full-length sequences HEV
genotypes 1, 2, 3, 4, and
avian HEV and the new
genotype from rabbits.
V.Thibault DU_janv.-2010 28
30. Culture et Modèles animaux
• Culture
Difficile
Culture primaire d’hépatocytes de macaques (cynomolgus)
Cellules PLC/PRF/5 hépatocarcinome (Tanaka et al. J. Gen Virol. 2007)
Cellule embryonnaire
• Modèles animaux
Primates : reproduction de la pathologie humaine
Volontaires...
VHE du porc, du poulet
Présence d’Ac chez poulet, porc, rat, souris, mouton...
V.Thibault DU_janv.-2010 30
31. VHE : Paramètres Biologiques
Titre peu élevé
protection contre réinfection ?
IgG
Symptomes
Ictère
VHE Selles
IgM
VHE Sang
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 200
V.Thibault DU_janv.-2010 31
Jours
32. HEV – virémie- selle
transmission
serum
salive
Concentré de plaquettes à J0
Transfusé à un homme de
64 ans traité pour Lymphome
non-Hodgkinien par GM IgG
autologue
IgM
Matsubayashi K, et al. Transfusion.
2008 Jul;48(7):1368-75.
V.Thibault DU_janv.-2010 32
33. Immunodépression, hépatite chronique et
stratégie diagnostique
Dans le cadre d'une investigation chez un patient immuno déprimé,
La détection du génome viral (RT-PCR) sera privilégiée !
(ceci s'applique pour de nombreux diagnostics viraux - PCR)
Kamar et al. American Journal of Transplantation 2008; 8: 1744–1748
V.Thibault DU_janv.-2010 33
34. Stratégie Diagnostique
Marqueurs non biologiques
circonstances de la maladie (voyage, autres causes, épidémie)
A adapter en fonction de la zone géographique ? (Sud versus Nord ?)
clinique : hépatite “classique”, absence de chronicité (chez
l'immunocompétent ! )
Absence de marqueurs biologiques : diagnostic d'exclusion
Absence des marqueurs des virus des autres hépatites (A, B, C, D)
Notions sérologiques pour d’autres virus (EBV, CMV, herpès)
Marqueurs sérologiques spécifiques
IgM anti-HEV
IgG anti-HEV (+++)
RT-PCR : détection du génome viral (sang, selles)
V.Thibault DU_janv.-2010 34
35. Spécificité et Sensibilité des ELISAs
Epidémie Indonésie,
82 symptomatiques; 174 asymptomatiques; 496 contrôles
Comparaison de 5 tests sérologiques
Référence = RT-PCR
Concordance IgM : 81%
Concordance IgG : 85%
Myint et al. JCM, 2006, p. 1581–1583
V.Thibault DU_janv.-2010 35
37. Stratégie Diagnostique
Se donner les moyens de faire le diagnostic
Diagnostic Indirect Diagnostic Direct
Recherche de l'immunité antivirale Recherche du génome sur
IgM anti VHE prélèvements sang et selles
IgG anti VHE
Diagnostic IgG IgM RT-PCR
Certain ++ ++ +
Probable - ou + - +
Douteux +++ - -
Immunité ancienne + - -
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38. VHE et vaccination
20 µg d'antigène rHEV (capside exprimée
dans baculovirus) dans 0.5 ml de PBS sur
0.5 mg d'hydroxyde d'aluminium.
3 injections
Moyenne géométrique du taux
d'anticorps anti-VHE
Efficacité : 95,5% après 3 doses
Risque cumulé d'un premier épisode
d'hépatite E
Shrestha,et al 2007 N Engl J Med 356;9
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39. Adresser les prélèvements
au
Centre national de référence du VHE
Dr E Nicand
Laboratoire de biologie
HIA Val de Grâce
Tel : 01 40 51 40 00
http://invs.sante.fr/surveillance/cnr/liste
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