Laboratorio no. 5 pruebas bioquímicas

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Laboratorio no. 5 pruebas bioquímicas

  1. 1. PRUEBAS BIOQUÍMICAS<br />Dra. Natalia Izurieta Cergneux<br />PRÁCTICA No. 5 – LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA Y MICOLOGÍA<br />
  2. 2. PRUEBAS BIOQUÍMICAS<br />La identificación definitiva de una especie requiere de pruebas bioquímicas. <br />Permiten conocer las actividades metabólicas y enzimáticas de los microorganismos.<br />
  3. 3. PRUEBAS BIOQUÍMICAS<br />Identificar los productos finales de los procesos metabólicos <br />Se debe conocer:<br /> 1.- Cambios que se producen<br /> 2.- Reacciones químicas que ocurren<br /> 3.- Enzimas que intervienen<br /> 4.- Productos intermedios<br /> 5.- Secuencias de las reacciones bioquímicas<br />
  4. 4. PRUEBAS BIOQUÍMICAS<br />Los microorganismos se cultivan en medios S/D <br />SS + SD PB<br />Las pruebas bioquímicas disponibles para la identificación de microorganismos de la familia Enterobacteriaceae son:<br /> 1.- Pruebas IMVIC <br /> 2.- Prueba de TSI <br /> 3.- Prueba de Ureasa<br /> 4.- Movilidad<br />
  5. 5. PRUEBAS IMVIC<br />Incluyen un grupo de cuatro pruebas usadas para diferenciar a los microorganismos entéricos (Familia Enterobacteriaceae) <br />Las pruebas son:<br />INDOL<br /> ROJO DE METILO<br />VOGES – PROSKAUER<br />CITRATO. <br />
  6. 6. PRUEBA DE INDOL<br />FUNDAMENTO:<br /> TRIPTOFANASA<br />H2O + TRIPTOFANO INDOL + AC. PIRUVICO + NH3<br />PROTOCOLO: Se inocula en caldo triptosa e incuba a 35 - 37°C durante 24 horas. <br />Luego de este período, se añaden 5 gotas del reactivo de Kovacs.<br />INTERPRETACIÓN:<br />NEGATIVO<br />POSITIVO<br />POSITIVO<br />NEGATIVO<br />
  7. 7. PRUEBA DE CITRATO<br />CITRATO<br />PIRUVATO<br />Na2CO3<br />CO2 + Na + H2O<br />AgarCitratado de Simmons<br />Ph ALCALINO<br />AZUL DE <br />BROMOTIMOL<br />PRUEBA +<br />COLOR AZUL<br />
  8. 8. PRUEBA DE CITRATO<br />PROTOCOLO<br /> 1.- Se inocula el agar de superficie inclinada con una sola estría en la superficie. <br /> 2.- Se incuba a 35 - 37°C durante 24 horas y se realiza la lectura de la prueba.<br />
  9. 9. PRUEBA DE CITRATO<br />INTERPRETACIÓN:<br /> Es positiva cuando se observa crecimiento a lo largo de la estría, y este se acompaña o no de un viraje del indicador de verde a azul. El cambio de color del medio a azul indica una reacción positiva.<br />POSITIVO<br />NEGATIVO<br />
  10. 10. PRUEBA DE ROJO DE METILO Y VOGES PROSKAUER<br />
  11. 11. PRUEBA DE ROJO DE METILO<br />FUNDAMENTO:<br />FERMENTACIÓN ÁCIDO MIXTA<br />GLUCOSA<br />ÁCIDOS LÁCTICO, ACÉTICO Y SUCCÍNICO<br />pH ÁCIDO<br />+<br />CO2, H2 y ETANOL<br />5 GOTAS ROJO DE METILO<br />COLOR ROJO<br />POSITIVO<br />NEGATIVO<br />
  12. 12. PRUEBA DE ROJO DE METILO<br />PROTOCOLO: (caldo MRVP) 1.- Se Inocula el medio con un cultivo puro joven. <br /> 2.- Se incuba a 35 – 37°C durante 48 horas. <br /> 3.- Luego de terminado el tiempo de incubación se añaden 5 gotas del reactivo de Rojo de Metilo (no agitar).<br />INTERPRETACIÓN:<br />SIN INOCULAR<br />NEGATIVO<br />POSITIVO<br />
  13. 13. PRUEBA DE VOGES PROSKAUER<br />FUNDAMENTO:<br />FERMENTACIÓN BUTILENGLICÓLICA<br />GLUCOSA<br />ACETIL-METIL-CARBINOL<br />(ACETOÍNA)<br />REACTIVO DE BARRETT<br />KOH 40%<br />2-3 BUTANODIOL, ETANOL, H2 y CO2<br />POSITIVO<br />NEGATIVO<br />
  14. 14. PRUEBA TSI (TRIPLE SUGAR IRON)<br />Medio S/D<br /> Permite evidenciar: <br />Capacidad de producción de ácido y gas a partir de glucosa, sacarosa y lactosa en un único medio.<br />Permite la identificación de la producción de SH2. <br />
  15. 15. PRUEBA TSI <br />Esta prueba tiene como objetivo diferenciar entre:<br />
  16. 16. PRUEBA TSI<br />FUNDAMENTO:<br />El extracto de carne y peptona aportan los nutrientes para el desarrollo bacteriano. <br />La lactosa, sacarosa y glucosa son los HC fermentables. <br />El rojo de fenol es el indicador de pH.<br />Por la fermentación de los azúcares, se producen ácidos que se detectan por el indicador de pH.<br />
  17. 17. PRUEBA TSI<br />PROTOCOLO:<br /> 1.- Se inocula los tubos de TSI con punta. <br /> 2.- Se introduce la punta hasta 3 a 5 mm del fondo del tubo. <br /> 3.- Luego de retirar el asadel fondo, se estría el pico con un movimiento en zigzag, de un lado al otro. <br /> 4.- Se incuba a 35 - 37°C durante 24 horas.<br />INOCULACION CON PUNTA<br />ESTRIACION EN ZIGZAG<br />
  18. 18. PRUEBA TSI<br />INTERPRETACIÓN:<br />Se debe considerar los cambios de color en el pico y el fondo del tubo y la formación de burbujas. <br />Cuando el medio es ácido (A) este se torna de color amarillo y cuando es alcalino (ALK) permanece de color rojo. <br />
  19. 19. PRUEBA TSI<br />El medio contiene 0.1% de glucosa y 1% de lactosa y sacarosa respectivamente. <br />Si el microorganismo sólo fermenta la glucosa, el ácido producido en el fondo acidifica el medio en esa zona y se torna de color amarillo.<br />Cuando el microorganismo fermenta la lactosa y la sacarosa, el ácido producido es suficiente como para virar el color del medio a amarillo. <br />El medio permanece rojo cuando no se produce fermentación de ninguno de los azúcares. <br />
  20. 20. PRUEBA TSI<br />Si hay formación de gas durante el proceso de fermentación, en el fondo del medio se observan burbujas o la ruptura del agar. <br />Si las bacteria son productoras de SH2 este se evidencia como un precipitado negro en el fondo del tubo. <br />
  21. 21.
  22. 22. PRUEBA DE LA UREASA<br />FUNDAMENTO:<br />UREASA<br />UREA<br />2 MOLÉCULAS DE NH4<br />pH ALCALINO<br />RESULTADOS<br />ROJO DE FENOL<br />+<br />-<br />COLOR FUCSIA<br />
  23. 23. PRUEBA DE LA UREASA<br />PROTOCOLO:<br />1.- Se siembra el microorganismo en estudio en caldo urea o agar úrea de Cristensen.<br /> 2.- Se incuba a 35 - 37° C durante 24 horas.<br />INTERPRETACIÓN:<br />NEGATIVO<br />POSITIVO<br />POSITIVO<br />NEGATIVO<br />Agar Úrea de Cristensen<br />

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