Curso de cultivo celular BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro

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Curso de cultivo celular BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro

  1. 1. Curso de cultivo celular Curso de cultivoBIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES invitro Dr. Juan Carlos Munévar Niño
  2. 2. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES.LA CELULA Las células son altamente complejas y organizadas. Átomos moléculas polímeros biológicos Complejos subcelulares organelos células Cada célula tiene una apariencia compleja: localización yforma de los organelos y cada organelo tiene unacomposición consistente y similar de macromoléculas. Ej. Células epiteliales intestinales. Cultivos celulares: células HELA Las células poseen un programa genético y los mecanismos para utilizarlo. Las células se reproducen por división, proceso en el cual unacélula madre da origen a dos células hijas Juan Carlos Munévar N
  3. 3. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES. LA CELULA Las células adquieren y utilizan energía. En los animales la glucosa se encuentra empacada. En los humanos la glucosa es liberada por el hígado a la sangrepara distribuirse a las células del cuerpo. ATP Las células efectúan reacciones bioquímicas: necesita energía.Metabolismo Actividades mecánicas: transporte de materiales, ensamble ydesensamble de estructuras. Cambios dinámicos y mecánicos dentro de la célula . Desplazamiento Las células son capaces de responder a estímulos Receptores para hormonas, factores de crecimiento etc.Vías de señalización en respuesta a estímulos: Actividadesmetabólicas, división celular, movimiento celular, apoptosis,envejecimiento. Autorregulación: reparación del DNA, apoptosis, Juan Carlos Munévar N
  4. 4. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES.PROCARIOTAS- EUCARIOTAS SIMILITUDESMembrana plasmática de diseño similarPresencia de ADNMecanismos de trascripción y transducción similaresVías metabólicas compartidas: glicólisis, ciclo de krebsAparatos similares para la conservación de la energía química como ATPPROTEOSOMAS PROCARIOTAS- EUCARIOTAS DIFERENCIAS División de la célula en núcleo y citoplasma, separadas por una envoltura nuclear que contiene un complejo de poros Cromosomas complejos: ADN + proteínas asociadas Complejos organelos membranosos citoplasmáticos: RER, Aparato de Golgi, Lisosomas, endosomas, peroxisomas, glioxisomas Organelos citoplasmáticos especializados en la respiración aerobia Sistema de citoesqueleto: Microfilamentos, filamentos intermedios, microtubulos Flagelos y cilios Endocitosis y fagocitosis Paredes celulares que contiene celulosa Diploidia. Meiosis
  5. 5. Curso de cultivo celularBIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES invitro INTRODUCCION
  6. 6. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro INTRODUCCION¿Validez de la célula cultivada como modelo de la función fisiológica in vivo? Las células no expresan las mismas propiedades in vitro que in vivo. El ambiente celular se modifica: 1. Proliferación celular 2. Interacciones célula – célula, célula – matriz extracelular (M.E.C.) 3. La arquitectura 3D y 50 µm heterogeneidad in vivo 4. El medio nutricional y factores solubles (estímulos) Juan Carlos Munévar N
  7. 7. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro  Se crea un microambiente in vitro que favorece la diseminación, migración, y proliferación de células no especializadas pero no favorece la expresión de funciones diferenciadas.  LA INFLUENCIA DEL MEDIO AMBIENTE EN UN CULTIVO CELULAR DEPENDE DE: 1. La naturaleza del sustrato o fase. 2. La composición fisicoquímica y fisiológica del medio de cultivo. 3. La constitución de la fase gaseosa. 4. La temperatura de incubación.Proveer el ambiente apropiado: adhesión al sustrato, nutrientes, factores solubles y sustrato es fundamental para la expresión de funciones especializadas. Juan Carlos Munévar N
  8. 8. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro La regulación del fenotipo celular en cultivo esta influenciado por:  Interacciones célula – célula  Interacciones célula – M.E.C.  Factores solubles (hormonas,  Afectara: factores de crecimiento, La adhesión celular nutrientes, iones inorgánicos) La proliferación La diferenciación La morfología celular La migración celularProveer el ambiente apropiado: adhesión al sustrato, nutrientes, factores solubles y sustrato es fundamental para la expresión de funciones especializadas. Juan Carlos Munévar N
  9. 9. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitroPercepción y Transducción de señales; Cross-talkLas principales vías de señalización se intercomunican
  10. 10. Curso de cultivo celularBIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES invitro ADHESION CELULAR
  11. 11. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro Membrana plasmática Bicapa fosfolipídica: compartimentos, superficie para reaccionesbioquímicas esenciales. Integridad estructural de la célulaControl del paso de sustancias: permeabilidad selectiva Regula las interacciones entre las célulasReconocimiento por medios de Rc de Ag, células extrañas y alteradas.Interfase entre le citoplasma y el ambiente externo. Sistema de transporte para moléculas específicas Efectúa transducción de señales físicas, químicas, mecánicas enacontecimientos intracelulares. Juan Carlos Munévar N
  12. 12. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitroCOMPOSICION MOLECULAR Y BIOQUÍMICA En la membrana celular existen otras moléculas anfipáticas:glucolípidos y colesterol. Los ácidos grasos insaturados la fluidez de la membrana y el colesterol la disminuye: difusión lateral de proteínas de membrana y movilidad celular. Proteínas Integrales: transmembrana que a menudo forman canales iónicos o sirven como transportadores. Proteínas de membrana multipaso. Receptores de membranaProteína de superficie: periféricas. Ubicadas sobre la caracitoplasmática de la membrana celular, en ocasiones en lasuperficie extracelular. A menudo se relacionan con el sistema desegundos mensajeros o con el citoesqueleto.
  13. 13. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro GLUCOCALIZ Cubierta externa de la membrana celular. Constituida por carbohidratos unidos covalentemente a las proteínas transmembranales y a los fosfolípidos de la cara externa. Protegen contra la interacción con proteínas inapropiadas, lesiones químicas, físicas. Reconocimiento y adhesión entre células. Neutrófilo-Endotelio Cascada de coagulación sanguínea Proceso Inflamatorio Juan Carlos Munévar N
  14. 14. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro ADHESION CELULAR  Las células que provienen de tejidos sólidos crecen en MONOCAPA, después de la disgregación necesitan anclaje para diseminarse sobre el SUSTRATO, antes de comenzar a proliferar. excepto las células transformadas (anclaje independientes)  Las células en cultivo adhieren a 1. Vidrio (carga negativa) 2. Plástico (polistireno) (descarga eléctrica radiación ionizante) La adhesión celular está mediada por receptores de superficiecelular específicos para moléculas de la M.E.C. la diseminación está precedida por la secreción de proteoglicanos y proteínas de la M.E.C. Juan Carlos Munévar N
  15. 15. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitroLa superficie del vidrio o plástico puede condicionarse mediante: Previo crecimiento celular PRINCIPAL REQUISITO Provee una superficie adecuada para la adhesión Para las células semejantes a celular fibroblastos: Adhesión al sustrato Pre - tratamiento del sustrato diseminación Para las células epiteliales: Moléculas de la M.E.C. Correcto contacto célula – célula crecimiento Colágeno,Fibronectina,laminina, gelatinaAl lograr la adhesión al sustrato las células comienzan a crecer y posteriormente proliferan. Juan Carlos Munévar N
  16. 16. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro MOLECULAS DE ADHESION CELULARTIPOS DE PROTEINAS TRANSMEMBRANALES Interacciones célula – célula y célula M.E.C. Moléculas de adhesión celular (CAM’s) (Ca2+ independientes) INTERACCIONES ENTRE Cadherinas CELULAS HOMOLOGAS (Ca2+ dependientes) Proteínas interactivas INTERACCIONES CELULA Integrinas. SUSTRATO (Receptores para M.E.C.) Motivo RGD. Proteoglicanos INTERACCIONES CELULA SUSTRATO (Receptores para factores de crecimiento) Juan Carlos Munévar N
  17. 17. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro MOLECULAS DE ADHESION CELULAR Familia de proteínas que permiten contacto célula- célula o célula-matriz extracelular. Glicoproteínas Grupo COOH unido al citoesqueleto Grupo NH2 especificidad de unión al ligando . Monoméricas (Cadherinas), diméricas, heterodiméricas (integrinas). Uniones homofílicas (Cadherinas), heterofílicas (integrinas) Juan Carlos Munévar N
  18. 18. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro MOLECULAS DE ADHESION CELULAR Funciones: desarrollo tisular, migracióncelular, procesos inflamatorios e inmunológicos.  Selectinas: Lectinas L-selectina: Leucocitos, adhesión al endotelio en procesos inflamatorios. E-selectina: Endotelio, permite la unión de neutrófilos P-selectina: Plaquetas y endotelio. Juan Carlos Munévar N
  19. 19. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro MOLECULAS DE ADHESION CELULAR Súper familia de las Inmunoglobulinas ICAM, VCAM, pueden secretarse y anclarse a la MEC. Integrinas: son GP de membrana, son heterodímeros, uniones covalentes. La unión del ligando-integrina resulta en reorganización del citoesqueleto, migración o división celular, apoptosis. Β1 Integrinas: crecimiento, maduración, migración, proliferación, citotoxicidad y fagocitosis.
  20. 20. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro MOLECULAS DE ADHESION CELULAR Β2 Integrinas: quimiotaxis del fagocito. Adhesión al endotelio. Β3 Integrinas: permiten la unión al MEC, su ligando es colágeno o fibronectina. Proteoglicanos: Interactúan con las proteínas de MEC y factores de crecimiento. Juan Carlos Munévar N
  21. 21. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro UNIONES INTERCELULARES Tight junctions: (Zonula occludens) Fusión de las membranas celulares como “cremallera”. Previenen el movimiento de material entre las células. Adhering junctions: (Zonula / Macula) - Se conserva un espacio de 20 nm entre membranas opuestas - Ocupado por material filamentoso anclados al lado citoplásmico de la unión (Zonula adherens) - Desmosomas, hemidesmosomas (Macula adherens) Gap junctions: Región de unión de 2 membranas opuestas, en donde se conserva un espacio de 3 nm. Permite el paso de iones / moléculas hidrofilicas Las uniones intercelulares se clasifican según su forma y extensión: Zonula (Zonula adherens, zonula occludens) Macula (Macula occludens, macula adherens)
  22. 22. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitroLA DISOCIACION ENZIMATICA DE UN TEJIDO O DE UNA MONOCAPA digiere la M.E.C. dominios extracelulares de proteínas transmembranales 1. LAS CELULAS EPITELIALES Son resistentes a la disociación enzimática Poseen fuertes uniones intercelulares Desmosomas, uniones adherentes, uniones estrechas 2. LAS CELULAS MESENQUIMATOSAS Son fáciles de disociar enzimáticamente Dependen de interacciones con la M.E.C. Colágeno, fibronectina, entactina, laminina, nidogéno, etc.Las células deben volver a sintetizar las proteínas de la M.E.C. antes de adherirse o debe incorporarse un sustrato revestido con M.E.C
  23. 23. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro CITOESQUELETO Las moléculas de adhesión celular están unidas a elementos del citoesqueleto. Red de filamentos proteicos que presenta funciones mecánicas; 1. Mantener la forma celular, 2. Movimiento celular, 3. Desplazamiento intracelular organélos Juan Carlos Munévar N
  24. 24. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro CITOESQUELETO  Sus estructuras principales son:  Microtúbulos  Filamentos intermedios  Microfilamentos Integrinas. SEÑALIZACION Microfilamentos de ACTINA Superficie celular - Núcleo Cadherinas ADHERENS JUNCTIONS Microfilamentos de ACTINA Morfología celular Filamentos intermedios. DESMOSOMAS (Placa intracelular) ¿Estructural / Señalización? Juan Carlos Munévar N
  25. 25. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro MICROTUBULOS Se encuentran dispersos en el citoplasma, o formando estructuras estables como cilios, flagelos o centríolos. Pueden formarse y destruirse según las necesidades de la célula. Tubulina, (a-tubulina y b-tubulina) protofilamento, y cada microtúbulo consta de 13 protofilamentos paralelos que forman un cilindro Juan Carlos Munévar N
  26. 26. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro MICROTUBULOS Brindan rigidez y conservan la forma celular Regulan el movimiento intracelular de organelas y vesículas Contribuyen a formar los compartimentos intracelulares Constituyen el huso mitótico, responsable de organizar el movimiento de los cromosomas durante la división celular Distribuyen el retículo endoplásmico y aparato de Golgi en los lugares apropiados Son los elementos estructurales y generadores del movimiento de cilios y flagelos (MOVIMIENTO CELULAR)
  27. 27. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro FILAMENTOS INTERMEDIOS FUNCIONES:° brindar sostén estructural a la célula.° resistencia tensil.° protección celular contra las presiones y las tensiones. Específicos de líneas celulares. (Marcadores)‫ق‬ Queratina (células epiteliales),‫ق‬ Vimentina (células mesenquimatosas),‫ق‬ Desmina (células musculares)‫ق‬ Filamentos de la lámina nuclear (Refuerzan la membrana nuclear)‫ق‬ Neurofilamentos (ubicados en células nerviosas), etc. Juan Carlos Munévar N
  28. 28. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro MICROFILAMENTOS Filamentos delgados (microfilamentos) Formados por dos cadenas de subunidades globulares, actina G, enrolladas entre sí para formar una proteína filamentosa o actina F. Juan Carlos Munévar N
  29. 29. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro ACTINA Contracción muscular, al asociarse a filamentos de miosina y otras proteínas. Fagocitosis mediante la formación de seudópodos Citocinesis: forman el anillo contráctil que finalmente da lugar a la separación de las células hijas durante la mitosis Refuerzan la membrana plasmática, formando justo por debajo de la misma una densa red de filamentos conocida como cortex celular Juan Carlos Munévar N
  30. 30. Curso de cultivo celularBIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES invitro PROLIFERACION CELULAR
  31. 31. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro CICLO CELULAR ARN, Proteína M itosis, Lamina Cytocinesis H1 Abl Cyc B/A G2 M Cyc D’s G0 CDK1 3-4 h 1 h CDK4,6 G1ADN, SARN, 6-12 h ARN, Proteína 6-8 hProteína p53 Cyc A Cyc E pRb CDK2 CDK2 Juan Carlos Munévar N
  32. 32. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro REGULACION DEL CICLO CELULAR1. fosforilació n CDC Daño al DNA2. Degradació nciclinas Activa p533. C & CDK síntesis4. Inhibició n CDK2CDC CE p21 P pRb pRb Enzimas para E2F Paso de G1 a síntesis DNA S
  33. 33. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro CICLO CELULAR Clasificación de acuerdo a la capacidad de PROLIFERACIÓN 1. CELULAS LABILES. 2. CELULAS ESTABLES. 3. CELULAS PERMANENTES.La capacidad de renovación celular está relacionada con su potencial de diferenciación.
  34. 34. Curso de cultivo celularBIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES invitro DIFERENCIACION CELULAR
  35. 35. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitroDIFERENCIACIÓN CELULAR La expresión de propiedades diferenciadas en cultivo celular a menudo depende de la promoción de la proliferación celular. * Necesario para propagar la línea celular * La expansión de stocks para el laboratorio Condiciones para inducir diferenciación in vitro: * Elevada densidad celular + Promoción de interacciones célula – célula / célula – M.E.C. * Factores de diferenciación.CONDICIONES REQUERIDAS PARA LA DIFERENCIACION 1. Optimizar la proliferación celular 2. Optimizar la diferenciación celular Juan Carlos Munévar N
  36. 36. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro DIFERENCIACIÓN CELULAR Mecanismo por el cuál una célula adquiere un fenotipo específico. La morfología de una célula varia, pero el material genético permanece intacto. Las células madre primordiales o Stem cells definidas como células clonogénicas + capaces de auto-renovarse + de diferenciarse en múltiples líneas celulares según el estímulo recibido Juan Carlos Munévar N
  37. 37. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro CELULAS MADRE Autorenovación ilimitada. Potencial de diferenciación In situ. In vitro. Thomson y col. 1998. Embryonic stem cells lines derived from human blastocysts. SCIENCE. Células vecinas  Las células madre responden a señales externas Factores solubles Stem cells: Scientific progress and future research directions. NIH, 2001
  38. 38. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro CELULAS MADRE TOTIPOTENCIALES: es decir, que pueden dar lugar a todo un individuo PLURIPOTENCIALES: capacidad de una célula para convertirse en todas las posibles líneas celulares. MULTIPOTENCIALES: capacidad de generar células, pero sólo del tipo celular del tejido al que pertenecen o en donde residen Juan Carlos Munévar N
  39. 39. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro STEM CELLS Embrionarias Germinales Embrionarias Adultas Stem cells: Scientific progress and future research directions. NIH, 2001
  40. 40. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro DIFERENCIACIÓN El citoplasma de una célula puede contener moléculas que controlen los genes expresados en el núcleo. Generar señales para la síntesis de diferentes clases de proteínas y factores de transcripción. Proteínas intracelulares Destino celular Auto-renovación Factores de transcripción Expresión individual.
  41. 41. CONTROLES INTERNOS FACTORES DE TRANSCRIPCION RELOJES (+) cul-1 C. elegans Ovario de Drosophila: incs, espectrosoma (espectrinas y ciclina A) (-) CDK inhibidor p27/Kip1 Mamíferos: CSL/tal-1, Tcf/Lef. Act. telomerasa -Factores secretados: TGFß y WntsCONTROLES EXTERNOS -Interacciones célula - célula -Integrinas y matriz extracelular M. Fiona, y col. Out of Eden: Stem cells and their niches. Science 2000 287: (25). 1427-1430
  42. 42. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitroAUTORENOVACION DIFERENCIACIÓN MECANISMO MECANISMO INVARIANTE REGULADO División asimétrica División simétricaCélulas Stem Progenitores Células Stem Progenitores M. Fiona, y col. Out of Eden: Stem cells and their niches. Science 2000 287: (25). 1427-1430
  43. 43. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro IMPLICACIONES CLINICAS
  44. 44. Células madre Clonación: Células madre Células embrionarias embriones fetales y madre producidas por producidos por adultas embrionarias técnica SCNT técnica SCNT Obtener células Producir madre embriones para Obtener células Obtener células genéticamente madre para la implantarlos in madre para la compatibles con un investigación y utero investigación y receptor para la Uso terapia terapia investigación y terapia Células de un Células de blastocisto Cigoto embriones o desarrollado de un enucleado con Aislar células núcleo de una estado de cigoto enucleadoFuente madre de tejidos blastocisto de suplementado con célula somática fetales y adultos del donante fertilización in un núcleo de una vitro célula somática del (SCNT) pcte (SCNT) Células Células Embriones producidas en producidas en Células producidas derivados de un cultivo para cultivo para en cultivo paraResultado cigoto, repoblar un tejido repoblar un tejido repoblar un tejido implantado y enfermo o enfermo o enfermo o lesionado evaluado lesionado lesionado Juan Carlos Munévar N
  45. 45. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro DESDIFERENCIACIONLa incapacidad de las líneas celulares de expresar el fenotipo in vivo de las células de donde derivan:Las células diferenciadas pierden sus propiedades especializadas in vitro. •La continua proliferación Las células indiferenciadas de la selecciona los precursores misma línea originan células indiferenciados. terminales diferenciadas con •En ausencia de un capacidad proliferativa reducida. La ausencia de estímulos microambiente inductor apropiados causan desadaptación. adecuado no se diferencian. Juan Carlos Munévar N
  46. 46. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro DESDIFERENCIACION Desdiferenciación Pérdida irreversible de las propiedades especializadas de la célula Hepatocito pierde enzimas características (aminotransferasas) y no almacena glicógeno ni secreta proteínas séricas. Desadaptación Síntesis de productos específicos o la expresión de funciones especializadas reguladas pueden reinducirse si se crean las condiciones adecuadas. Presencia de una matriz de colágeno induce la tirosina aminotransferasa en hepatocitos El Matrigel estabiliza el fenotipo diferenciado de los hepatocitos. Selección. Establecer las condiciones adecuadas para favorecer la proliferación de un tipo celular específico. Incapacidad de expresar las propiedades de los hepatocitos por crecimiento de fibroblastos o endotelio Juan Carlos Munévar N
  47. 47. Curso de cultivo celularBIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES invitro METABOLISMO ENERGETICO
  48. 48. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro METABOLISMO ENERGETICOLa mayoría de los medios de cultivo contienen 4 a 20 mM de glucosa, utilizado como la principal fuente de carbono para la glicólisis. genera ácido láctico como producto final.  En condiciones normales de cultivo 1. Oxígeno atmosférico 2. Cultivo sumergido  En ausencia de un transportador apropiado (hemoglobina) que mantenga la tensión de O2 Se generan ROS tóxicos para la célula El O2 se conserva a niveles atmosféricos, generando condiciones anaeróbicas y la glicólisis para el metabolismo energético. Juan Carlos Munévar N
  49. 49. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro El ciclo del ácido cítrico permanece activo Los aminoácidos Oxidación de glutamato por la Glutamina; Pueden utilizarse glutaminasa. Entrada en el ciclo de Krebs por como fuente de carbono transaminación a 2- oxoglutarato La desaminación de la glutamina produce amoniaco tóxico para la célula, limitando el crecimiento celular El uso de dipéptidos (glutamil-alanina / glutamil–glicina) Minimiza la producción de amoníaco Es más estable en el medio de cultivo. Juan Carlos Munévar N
  50. 50. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro SENESCENCIA Las células normales tienen un número limitado de mitosis Las líneas celulares derivadas de tejidos normales mueren después de un número limitado de divisiones  Evento determinado genéticamente: SENESCENCIA Determinado por la incapacidad de replicarse las secuencias terminales del ADN en el TELOMERO en cada división celular Acortamiento progresivo del TELOMERO Finalmente la célula no puede dividirse EXCEPCIONES: 1. LAS CELULAS GERMINALES 2. LAS CELULAS MADRE (STEM CELLS) Actividad Telomerasa + 3. LAS CELULAS NEOPLASICAS.
  51. 51. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro Los telómeros representan secuencias repetitivas de ADN que se encuentran en los extremos de los cromosomas. Humanos ATTAGGG Estabilidad a los cromosomas “Antipegajoso"  TELOMERASA Ribonucleoproteína  Función: Síntesis y adición de secuencias teloméricas.
  52. 52. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro SENESCENCIA
  53. 53. Curso de cultivo celularBIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES invitro CONCLUSIONES
  54. 54. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro CONCLUSIONESTrabajar en condiciones estándar (componentes celulares) Células finitas Líneas celulares de proliferación continúa.Capacidad de expresar marcadores de diferenciación celular bajo lainfluencia de condiciones inducidas puede significar: Las células cultivadas son maduras Requieren inducción para sintetizar proteínas especializadas Las Stem cells o células precursoras. Proliferan indefinidamente permaneciendo indiferenciadas hasta aplicar las condiciones inductoras adecuadas para adquirir un fenotipo especifico En un cultivo celular se mantiene un equilibrio entre Células madre multipotentes Condiciones Células precursoras comprometidas pero indiferenciadas. ambientales Células maduras diferenciadas Juan Carlos Munévar N
  55. 55. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro CONCLUSIONES  Subcultivos en serie a bajas densidades celulares Promueven la proliferación celular Restringen la diferenciación celular.  Subcultivos en serie a elevadas densidades celulares, < [suero]° Promueven la diferenciación celular Inhiben la proliferación celular.  La fuente del cultivo determina los componentes celulares presentes: Embrión Células madre y precursoras AUTORENOVACION Tejidos Células lábiles / estables RENOVACION LIMITADA Células precursoras comprometidasLA IDENTIDAD DE LAS CELULAS EN CULTIVO DEPENDE DE: Línea celular in vivo (hepatocitos, epidermis, cartílago) La posición dentro de la línea celular (Stem cell, célula precursora, célula madura) Juan Carlos Munévar N
  56. 56. BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro CONCLUSIONESLAS CELULAS TRANSFORMADAS: (Neoplásicas) Hepatoma (rata) Proliferan in vitro Expresan aspectos de diferenciación. A mayor similitud con células de fenotipo normal Mayor grado de diferenciación inhibirá la proliferación No es probable que las células se transdiferencien Posiblemente cambian de posición en la línea celular. (reversiblemente) EL ÉXITO EN EL MANEJO DE LOS PROTOCOLOS DE CULTIVO CELULAR DEPENDE EN GRAN PARTE DE LA COMPRENSION DE LA BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro. Juan Carlos Munévar N
  57. 57. ¡GRACIAS!BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES invitro Juan Carlos Munévar N

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