Curso de cultivo celular

Curso de cultivo celularCurso de cultivo celularCurso de cultivo celularCurso de cultivo celular
Dr. Juan Carlos Munévar Niño
BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES inin
vitrovitro

LA CELULA
Las células son altamente complejas y organizadas.
Átomos moléculas polímeros biológicos
Complejos subcelulares organelos células
Cada célula tiene una apariencia compleja: localización y
forma de los organelos y cada organelo tiene una
composición consistente y similar de macromoléculas.
Ej. Células epiteliales intestinales.
Cultivos celulares: células HELA
Las células poseen un programa genético y los mecanismos para
utilizarlo.
Las células se reproducen por división, proceso en el cual una
célula madre da origen a dos células hijas
BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES.
Juan Carlos Munévar N

LA CELULA
Las células adquieren y utilizan energía.
En los animales la glucosa se encuentra empacada.
En los humanos la glucosa es liberada por el hígado a la sangre
para distribuirse a las células del cuerpo. ATP
Las células efectúan reacciones bioquímicas: necesita energía.
Metabolismo
Actividades mecánicas: transporte de materiales, ensamble y
desensamble de estructuras.
Cambios dinámicos y mecánicos dentro de la célula . Desplazamiento
Las células son capaces de responder a estímulos
Receptores para hormonas, factores de crecimiento etc.
Vías de señalización en respuesta a estímulos: Actividades
metabólicas, división celular, movimiento celular, apoptosis,
envejecimiento.
Autorregulación: reparación del DNA, apoptosis,

PROCARIOTAS- EUCARIOTAS SIMILITUDESSIMILITUDES
Membrana plasmática de diseño similar
Presencia de ADN
Mecanismos de trascripción y transducción similares
Vías metabólicas compartidas: glicólisis, ciclo de krebs
Aparatos similares para la conservación de la energía química como ATP
PROTEOSOMAS
PROCARIOTAS- EUCARIOTAS DIFERENCIASDIFERENCIAS
División de la célula en núcleo y citoplasma, separadas por una envoltura nuclear que contiene un complejo de
poros
Cromosomas complejos: ADN + proteínas asociadas
Complejos organelos membranosos citoplasmáticos: RER, Aparato de Golgi,
Lisosomas, endosomas, peroxisomas, glioxisomas
Organelos citoplasmáticos especializados en la respiración aerobia
Sistema de citoesqueleto: Microfilamentos, filamentos intermedios, microtubulos
Flagelos y cilios
Endocitosis y fagocitosis
Paredes celulares que contiene celulosa
Diploidia. Meiosis

INTRODUCCION
Curso de cultivo celularCurso de cultivo celular
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BIOLOGIA DE LAS CELULAS ANIMALES in vitro
INTRODUCCION
 ¿Validez de la célula cultivada como modelo de la función
fisiológica in vivo?
 Las células no expresan las
mismas propiedades in vitro que
in vivo.
 El ambiente celular se modifica:
1. Proliferación celular
2. Interacciones célula –
célula, célula – matriz
extracelular (M.E.C.)
3. La arquitectura 3D y
heterogeneidad in vivo
4. El medio nutricional y
factores solubles
(estímulos)(estímulos)
50 µm

 Se crea un microambiente in vitro que favorece la diseminación,
migración, y proliferación de células no especializadas
pero no favorece la expresión de funciones diferenciadas.
 LA INFLUENCIA DEL MEDIO
AMBIENTE EN UN CULTIVO
CELULAR DEPENDE DE:
1. La naturaleza del sustrato o fase.
2. La composición fisicoquímica y
fisiológica del medio de cultivo.
3. La constitución de la fase gaseosa.
4. La temperatura de incubación.
Proveer el ambiente apropiado: adhesión al sustrato, nutrientes, factores solubles y sustrato
es fundamental para la expresión de funciones especializadas.

La regulación del fenotipo celular en cultivo esta influenciado por:
 Interacciones célula – célula
 Interacciones célula – M.E.C.
 Factores solubles (hormonas,
factores de crecimiento,
nutrientes, iones inorgánicos)
Proveer el ambiente apropiado: adhesión al sustrato, nutrientes, factores solubles y sustrato
es fundamental para la expresión de funciones especializadas.
 Afectara:
La adhesión celular
La proliferación
La diferenciación
La morfología celular
La migración celular

Percepción y Transducción de señales; Cross-talk
Las principales vías de señalización se intercomunican

ADHESION CELULAR
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Membrana plasmática
 Bicapa fosfolipídica: compartimentos, superficie para reacciones
bioquímicas esenciales.
 Integridad estructural de la célula
Control del paso de sustancias: permeabilidad selectiva
 Regula las interacciones entre las células
Reconocimiento por medios de Rc de Ag, células extrañas y alteradas.
Interfase entre le citoplasma y el ambiente externo.
 Sistema de transporte para moléculas específicas
 Efectúa transducción de señales físicas, químicas, mecánicas en
acontecimientos intracelulares.

 En la membrana celular existen otras moléculas anfipáticas:
glucolípidos y colesterol.
 Los ácidos grasos insaturados la fluidez de la membrana y el
colesterol la disminuye: difusión lateral de proteínas de
membrana y movilidad celular.
 Proteínas Integrales: transmembrana que a menudo forman canales
iónicos o sirven como transportadores. Proteínas de membrana
multipaso. Receptores de membrana
Proteína de superficie: periféricas. Ubicadas sobre la cara
citoplasmática de la membrana celular, en ocasiones en la
superficie extracelular. A menudo se relacionan con el sistema de
segundos mensajeros o con el citoesqueleto.
COMPOSICION MOLECULAR Y BIOQUÍMICA

GLUCOCALIZ
 Cubierta externa de la membrana celular.
 Constituida por carbohidratos unidos covalentemente a las proteínas
transmembranales y a los fosfolípidos de la cara externa.
 Protegen contra la interacción con proteínas inapropiadas, lesiones
químicas, físicas.
 Reconocimiento y adhesión entre células.
Neutrófilo-Endotelio
Cascada de coagulación sanguínea
Proceso Inflamatorio

 Las células que provienen de tejidos sólidos crecen en MONOCAPA, después de la
disgregación necesitan anclaje para diseminarse sobre el SUSTRATO, antes de
comenzar a proliferar.
excepto las células transformadas (anclaje independientes)
ADHESION CELULAR
 La adhesión celular está mediada por receptores de superficie
celular específicos para moléculas de la M.E.C.
la diseminación está precedida por la secreción de
proteoglicanos y proteínas de la M.E.C.
 Las células en cultivo adhieren a
1. Vidrio
(carga negativa)
2. Plástico (polistireno)
(descarga eléctrica radiación ionizante)

La superficie del vidrio o plástico puede condicionarse mediante:
 Previo crecimiento celular
 Pre - tratamiento del sustrato
Al lograr la adhesión al sustrato las células comienzan a crecer y posteriormente
proliferan.
Provee una superficie
adecuada para la adhesión
celular
Moléculas de la M.E.C.
Colágeno,Fibronectina,laminina,
gelatina
Para las células semejantes a
fibroblastos:
Adhesión al sustrato
diseminación
Para las células epiteliales:
Correcto contacto célula – célula
crecimiento
PRINCIPAL REQUISITO

TIPOS DE PROTEINAS TRANSMEMBRANALES
MOLECULAS DE ADHESION CELULAR
Interacciones célula – célula y célula M.E.C.
 Moléculas de adhesión celular (CAM’s)
(Ca2+ independientes)
 Cadherinas
(Ca2+
dependientes)
 Integrinas.
(Receptores para M.E.C.)
 Proteoglicanos
(Receptores para factores de crecimiento)
INTERACCIONES ENTRE
CELULAS HOMOLOGAS
Proteínas interactivas
INTERACCIONES CELULA
SUSTRATO
Motivo RGD.
INTERACCIONES CELULA SUSTRATO

 Familia de proteínas que permiten contacto célula-
célula o célula-matriz extracelular.
 Glicoproteínas
Grupo COOH unido al citoesqueleto Grupo
NH2 especificidad de unión al ligando .
 MonoméricasMonoméricas (Cadherinas),
 diméricas,diméricas,
 heterodiméricasheterodiméricas (integrinas).
 Uniones homofílicasUniones homofílicas (Cadherinas),
heterofílicasheterofílicas (integrinas)

 Selectinas: Lectinas
L-selectina: Leucocitos, adhesión al
endotelio en procesos inflamatorios.
E-selectina: Endotelio, permite la unión
de neutrófilos
P-selectina: Plaquetas y endotelio.
 Funciones:Funciones: desarrollo tisular, migración
celular, procesos inflamatorios e inmunológicos.

 Súper familia de las Inmunoglobulinas
ICAM, VCAM, pueden secretarse y anclarse
a la MEC.
 Integrinas: son GP de membrana, son
heterodímeros, uniones covalentes.
La unión del ligando-integrina resulta en
reorganización del citoesqueleto,
migración o división celular, apoptosis.
 Β1 Integrinas: crecimiento, maduración,
migración, proliferación, citotoxicidad y
fagocitosis.

 Β2 Integrinas: quimiotaxis del fagocito.
Adhesión al endotelio.
 Β3 Integrinas: permiten la unión al MEC, su
ligando es colágeno o fibronectina.
 Proteoglicanos: Interactúan con las
proteínas de MEC y factores de
crecimiento.

 Tight junctions: (Zonula occludens)
Fusión de las membranas celulares como “cremallera”.
Previenen el movimiento de material entre las células.
 Adhering junctions: (Zonula / Macula)
- Se conserva un espacio de 20 nm entre membranas opuestas
- Ocupado por material filamentoso anclados al lado citoplásmico
de la unión (Zonula adherens)
- Desmosomas, hemidesmosomas (Macula adherens)
 Gap junctions:
Región de unión de 2 membranas opuestas, en donde se conserva un
espacio de 3 nm.
Permite el paso de iones / moléculas hidrofilicas
UNIONES INTERCELULARES
Las uniones intercelulares se clasifican según su forma y extensión:
Zonula (Zonula adherens, zonula occludens)
Macula (Macula occludens, macula adherens)

LA DISOCIACION ENZIMATICA DE UN TEJIDO O DE UNA MONOCAPA
digiere la M.E.C.
dominios extracelulares de proteínas transmembranales
1. LAS CELULAS EPITELIALES
Son resistentes a la disociación enzimática
Poseen fuertes uniones intercelulares
Desmosomas, uniones adherentes, uniones
estrechas
Las células deben volver a sintetizar las proteínas de la M.E.C. antes de adherirse o
debe incorporarse un sustrato revestido con M.E.C
2. LAS CELULAS MESENQUIMATOSAS
Son fáciles de disociar enzimáticamente
Dependen de interacciones con la M.E.C.
Colágeno, fibronectina, entactina,
laminina, nidogéno, etc.

 Las moléculas de adhesión celular están unidas a
elementos del citoesqueleto.
 Red de filamentos proteicosRed de filamentos proteicos que presenta
funciones mecánicas;
1. Mantener la forma celular,
2. Movimiento celular,
3. Desplazamiento intracelular organélos
CITOESQUELETO

 Sus estructuras principales son:
 Microtúbulos
 Filamentos intermedios
 Microfilamentos
CITOESQUELETO
 Integrinas.
Microfilamentos de ACTINA
 Cadherinas
Microfilamentos de ACTINA
Filamentos intermedios.
(Placa intracelular)
ADHERENS JUNCTIONS
Morfología celular
DESMOSOMAS
¿Estructural / Señalización?
SEÑALIZACION
Superficie celular - Núcleo

MICROTUBULOS
 Se encuentran dispersos en el citoplasma,
o formando estructuras estables como
cilios, flagelos o centríolos.
 Pueden formarse y destruirse según las
necesidades de la célula.
 Tubulina, (a-tubulina y b-tubulina)
protofilamento, y cada microtúbulo consta
de 13 protofilamentos paralelos que forman
un cilindro

MICROTUBULOS
 Brindan rigidez y conservan la forma celular
 Regulan el movimiento intracelular de organelas y vesículas
 Contribuyen a formar los compartimentos intracelulares
 Constituyen el huso mitótico, responsable de organizar el
movimiento de los cromosomas durante la división celular
 Distribuyen el retículo endoplásmico y aparato de Golgi en los
lugares apropiados
 Son los elementos estructurales y generadores del movimiento
de cilios y flagelos (MOVIMIENTO CELULAR)

FILAMENTOS INTERMEDIOS
 FUNCIONES:
° brindar sostén estructural a la célula.
° resistencia tensil.
° protección celular contra las presiones y las tensiones.
 Específicos de líneas celulares. (Marcadores)
‫ق‬ Queratina (células epiteliales),
‫ق‬ Vimentina (células mesenquimatosas),
‫ق‬ Desmina (células musculares)
‫ق‬ Filamentos de la lámina nuclear (Refuerzan la membrana
nuclear)
‫ق‬ Neurofilamentos (ubicados en células nerviosas), etc.

MICROFILAMENTOS
 Filamentos delgados
(microfilamentos)
Formados por dos
cadenas de
subunidades
globulares, actina G,
enrolladas entre sí
para formar una
proteína filamentosa
o actina F.

ACTINA
 Contracción muscular, al asociarse a filamentos
de miosina y otras proteínas.
 Fagocitosis mediante la formación de seudópodos
 Citocinesis: forman el anillo contráctil que
finalmente da lugar a la separación de las
células hijas durante la mitosis
 Refuerzan la membrana plasmática, formando
justo por debajo de la misma una densa red de
filamentos conocida como cortex celular

PROLIFERACION CELULAR
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G1
G0
6-8 h
ADN,
ARN,
Proteína
3-4 h
ARN, Proteína
1 h
Mitosis,
Cytocinesis
S
G2 Cyc D’s
CDK4,6
Cyc B/A
CDK1
Cyc A
CDK2
M
Cyc E
CDK2
6-12 h ARN, Proteína
p53
pRb
Lamina
H1
Abl
CICLO CELULAR

pRbpRb
CDK2
CE
E2F
Enzimas para
síntesis DNA
Paso de G1 a
S
Daño al DNA1. fosforilació n CDC
2. Degradació n
ciclinas
3. C & CDK síntesis
4. Inhibició n
CDC
pRbpRb
P
Activa p53
p21
pRb
REGULACION DEL CICLO CELULAR

CICLO CELULAR
La capacidad de renovación celular está relacionada con su potencial de diferenciación.
Clasificación de acuerdo a la capacidad
de PROLIFERACIÓN
1. CELULAS LABILES.
2. CELULAS ESTABLES.
3. CELULAS PERMANENTES.

DIFERENCIACION CELULAR
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DIFERENCIACIÓN CELULAR
 La expresión de propiedades diferenciadas en cultivo celular a
menudo depende de la promoción de la proliferación celular.
* Necesario para propagar la línea celularNecesario para propagar la línea celular
* La expansión de stocks para el laboratorio* La expansión de stocks para el laboratorio
 Condiciones para inducir diferenciación in vitro:
* Elevada densidad celular* Elevada densidad celular
+ Promoción de interacciones célula – célula / célula – M.E.C.+ Promoción de interacciones célula – célula / célula – M.E.C.
* Factores de diferenciación.* Factores de diferenciación.
CONDICIONES REQUERIDAS PARA LA DIFERENCIACION
1. Optimizar la proliferación celular
2. Optimizar la diferenciación celular
CONDICIONES REQUERIDAS PARA LA DIFERENCIACION
1. Optimizar la proliferación celular
2. Optimizar la diferenciación celular

DIFERENCIACIÓN CELULAR
Mecanismo por el cuál una célula adquiere un
fenotipo específico.
La morfología de una célula varia, pero el
material genético permanece intacto.
Las células madre primordiales o Stem cells
definidas como células clonogénicas
+ capaces de auto-renovarse
+ de diferenciarse en múltiples líneas celulares según el
estímulo recibido

Thomson y col. 1998. Embryonic stem cells lines
derived from human blastocysts. SCIENCE.
 Autorenovación ilimitada.
 Potencial de diferenciación
Stem cells: Scientific progress and future research directions. NIH, 2001
In situ. In vitro.
 Las células madre responden a
señales externas
Células vecinas
Factores solubles
CELULAS MADRE

CELULAS MADRE
 TOTIPOTENCIALES: es decir, que pueden
dar lugar a todo un individuo
 PLURIPOTENCIALES: capacidad de una
célula para convertirse en todas las posibles
líneas celulares.
 MULTIPOTENCIALES: capacidad de generar
células, pero sólo del tipo celular del tejido al
que pertenecen o en donde residen

 Embrionarias
 Germinales
Embrionarias
 Adultas
Stem cells: Scientific progress and future research directions. NIH, 2001
STEM CELLS

DIFERENCIACIÓN
 El citoplasma de una célula puede contener moléculas que
controlen los genes expresados en el núcleo.
 Generar señales para la síntesis de diferentes clases de
proteínas y factores de transcripción.
Proteínas intracelulares
Destino celular Auto-renovación
Factores de transcripción
Expresión individual.

RELOJES
(+) cul-1 C. elegans
(-) CDK inhibidor p27/Kip1
Act. telomerasa
FACTORES DE TRANSCRIPCION
Ovario de Drosophila:Ovario de Drosophila:
incs, espectrosoma (espectrinas y ciclina A)incs, espectrosoma (espectrinas y ciclina A)
Mamíferos: CSL/tal-1, Tcf/Lef.Mamíferos: CSL/tal-1, Tcf/Lef.
CONTROLES EXTERNOSCONTROLES EXTERNOS
-Factores secretados: TGFß y Wnts
-Interacciones célula - célula
-Integrinas y matriz extracelular
CONTROLES INTERNOSCONTROLES INTERNOS
M. Fiona, y col. Out of Eden: Stem cells and their niches. Science 2000 287: (25). 1427-1430

MECANISMO
INVARIANTE
División asimétrica
Células Stem Progenitores
M. Fiona, y col. Out of Eden: Stem cells and their niches. Science 2000 287: (25). 1427-1430
DIFERENCIACIÓNAUTORENOVACION
MECANISMO
REGULADO
Células Stem Progenitores
División simétrica

IMPLICACIONES CLINICAS

Resultado
Obtener células
madre para la
investigación y
terapia
Obtener células
madre para la
investigación y
terapia
Obtener células
madre
genéticamente
compatibles con un
receptor para la
investigación y
terapia
Producir
embriones para
implantarlos in
utero
Aislar células
madre de tejidos
fetales y adultos
Células de
embriones o
estado de
blastocisto de
fertilización in
vitro
Células de un
blastocisto
desarrollado de un
cigoto enucleado
suplementado con
un núcleo de una
célula somática del
pcte (SCNT)
Cigoto
enucleado con
núcleo de una
célula somática
del donante
(SCNT)
Células
producidas en
cultivo para
repoblar un tejido
enfermo o
lesionado
Células
producidas en
cultivo para
repoblar un tejido
enfermo o
lesionado
Células producidas
en cultivo para
repoblar un tejido
enfermo o lesionado
Embriones
derivados de un
cigoto,
implantado y
evaluado
Uso
Fuente
Células madre
fetales y
adultas
Células
madre
embrionarias
Células madre
embrionarias
producidas por
técnica SCNT
Clonación:
embriones
producidos por
técnica SCNT

DESDIFERENCIACION
 La incapacidad de las líneas celulares de expresar el
fenotipo in vivo de las células de donde derivan:
Las células diferenciadas pierden
sus propiedades especializadas
in vitro.
 Las células indiferenciadas de la
misma línea originan células
terminales diferenciadas con
capacidad proliferativa reducida.
 La ausencia de estímulos
apropiados causan desadaptación.
•La continua proliferación
selecciona los precursores
indiferenciados.
•En ausencia de un
microambiente inductor
adecuado no se
diferencian.

DESDIFERENCIACION
 Desdiferenciación
Pérdida irreversible de las propiedades especializadas de la célula
Hepatocito pierde enzimas características (aminotransferasas) y no almacena
glicógeno ni secreta proteínas séricas.
 Desadaptación
Síntesis de productos específicos o la expresión de funciones especializadas
reguladas pueden reinducirse si se crean las condiciones adecuadas.
Presencia de una matriz de colágeno induce la tirosina aminotransferasa en
hepatocitos
El Matrigel estabiliza el fenotipo diferenciado de los hepatocitos.
 Selección.
Establecer las condiciones adecuadas para favorecer la proliferación de un tipo
celular específico.
Incapacidad de expresar las propiedades de los hepatocitos por crecimiento de
fibroblastos o endotelio Juan Carlos Munévar N

METABOLISMO ENERGETICO
vitrovitro

La mayoría de los medios de cultivo contienen 4 a 20 mM de glucosa, utilizado como
la principal fuente de carbono para la glicólisis.
genera ácido láctico como producto final.
METABOLISMO ENERGETICO
 En ausencia de un transportador apropiado (hemoglobina) que
mantenga la tensión de O2
Se generan ROS tóxicos para la célula
 En condiciones normales de cultivo
1. Oxígeno atmosférico
2. Cultivo sumergido
El O2 se conserva a niveles atmosféricos, generando
condiciones anaeróbicas y la glicólisis para el metabolismo
energético.

 El uso de dipéptidos (glutamil-alanina / glutamil–glicina)
Minimiza la producción de amoníaco
Es más estable en el medio de cultivo.
El ciclo del ácido cítrico permanece activo
 Los aminoácidos
Glutamina; Pueden utilizarse
como fuente de carbono
Oxidación de glutamato por la
glutaminasa.
Entrada en el ciclo de Krebs por
transaminación a 2- oxoglutarato
La desaminación de la glutamina produce amoniaco
tóxico para la célula,
limitando el crecimiento celular

 Las células normales tienen un número limitado de mitosis
Las líneas celulares derivadas de tejidos normales mueren después de
un número limitado de divisiones
 Evento determinado genéticamente:
SENESCENCIA
EXCEPCIONES:
1.1. LAS CELULAS GERMINALESLAS CELULAS GERMINALES
2.2. LAS CELULAS MADRE (STEM CELLS)LAS CELULAS MADRE (STEM CELLS)
3.3. LAS CELULAS NEOPLASICAS.LAS CELULAS NEOPLASICAS.
Determinado por la incapacidad de replicarse las secuencias
terminales del ADN en el TELOMERO en cada división celular
Acortamiento progresivo del TELOMERO
Finalmente la célula no puede dividirse
SENESCENCIA
Actividad Telomerasa +

 Los telómeros representan secuencias repetitivas de ADN que se
encuentran en los extremos de los cromosomas.
 Humanos ATTAGGG
 Estabilidad a los cromosomas
 “Antipegajoso"
 TELOMERASA
Ribonucleoproteína
 Función:
Síntesis y adición de secuencias
teloméricas.

SENESCENCIA

CONCLUSIONES
vitrovitro

CONCLUSIONES
Trabajar en condiciones estándar (componentes celulares)(componentes celulares)
Células finitasCélulas finitas
Líneas celulares de proliferación continúa.Líneas celulares de proliferación continúa.
Capacidad de expresar marcadores de diferenciación celular bajo la
influencia de condiciones inducidas puede significar:
Las células cultivadas son maduras
Requieren inducción para sintetizar proteínas especializadas
Las Stem cells o células precursoras.
Proliferan indefinidamente permaneciendo indiferenciadas hasta aplicar
las condiciones inductoras adecuadas para adquirir un fenotipo especifico
 En un cultivo celular se mantiene un equilibrio entre
Células madre multipotentesCélulas madre multipotentes
Células precursoras comprometidas pero indiferenciadas.Células precursoras comprometidas pero indiferenciadas.
Células maduras diferenciadasCélulas maduras diferenciadas
Condiciones
ambientales

CONCLUSIONES
 Subcultivos en serie a bajas densidades celularesSubcultivos en serie a bajas densidades celulares
Promueven la proliferación celularPromueven la proliferación celular
Restringen la diferenciación celular.Restringen la diferenciación celular.
LA IDENTIDAD DE LAS CELULAS EN CULTIVO DEPENDE DE:
Línea celular in vivo
(hepatocitos, epidermis, cartílago)
La posición dentro de la línea celular
(Stem cell, célula precursora, célula madura)
 Subcultivos en serie a elevadas densidades celulares, < [suero]°Subcultivos en serie a elevadas densidades celulares, < [suero]°
Promueven la diferenciación celularPromueven la diferenciación celular
Inhiben la proliferación celular.Inhiben la proliferación celular.
 La fuente del cultivo determina los componentes celulares presentes:
EmbriónEmbrión Células madre y precursoras AUTORENOVACIONCélulas madre y precursoras AUTORENOVACION
TejidosTejidos Células lábiles / establesCélulas lábiles / estables RENOVACION LIMITADARENOVACION LIMITADA
Células precursoras comprometidasCélulas precursoras comprometidas

CONCLUSIONES
LAS CELULAS TRANSFORMADAS: (Neoplásicas)
Hepatoma (rata)
Proliferan in vitro
Expresan aspectos de diferenciación.
 A mayor similitud con células de fenotipo normal
Mayor grado de diferenciación inhibirá la proliferación
 No es probable que las células se transdiferencien
Posiblemente cambian de posición en la línea celular. (reversiblemente)
EL ÉXITO EN EL MANEJO DE LOS PROTOCOLOS DE CULTIVO CELULAREL ÉXITO EN EL MANEJO DE LOS PROTOCOLOS DE CULTIVO CELULAR
DEPENDE EN GRAN PARTE DE LA COMPRENSIONDEPENDE EN GRAN PARTE DE LA COMPRENSION DE LA BIOLOGIA DEDE LA BIOLOGIA DE
LAS CELULAS ANIMALES in vitro.LAS CELULAS ANIMALES in vitro.

¡GRACIAS!¡GRACIAS!
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