Biología Molecular y Celular de la Apoptosis

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Biología Molecular y Celular de la Apoptosis

  1. 1. Universidad El Bosque Facultad de Odontología Postgrado de OrtodonciaBiología Molecular y Celular de la Apoptosis Biología Oral Profesor Juan Carlos Munévar Fernando Falcón Javier Martínez
  2. 2. Tipos de muerte celularNecrosis Apoptosis
  3. 3. Necrosis vs Apoptosis • Grupo de células mueren. • Células individuales mueren. • Destrución del citoesqueleto • Fragmentación celular (Bleb). (cuerpos apoptóticos). • Inflamación. • Hay contracción celular en • Proceso incontrolado pasivo vez de aumento de volumen. (no hay gasto de energía). • Proceso controlado • Hay ruptura de la dependiente de energía. membrana, el contenido • No hay liberación del citoplasmático sale y hay contenido citoplasmático y atracción de células los restos celulares son inflamatorias. rápidamente fagocitadosApoptosis and Necrosis in the Liver: A Tale of Two Deaths? Harmeet Malhi,1 Gregory J. Gores,1,2 and John J. Lemasters3
  4. 4. Necrosis vs Apoptosis
  5. 5. Morfología celular durante la apoptosis • Encogimiento celular y picnosis. • Citoplasma se torna denso y las organelas se encuentran sumamente empaquetadas. • Separación en cuerpos apoptóticos que son posteriormente fagocitados.Apoptosis and Necrosis in the Liver: A Tale of Two Deaths? Harmeet Malhi,1 Gregory J. Gores,1,2 and John J. Lemasters3
  6. 6. Morfologia celular durante la apoptosis
  7. 7. Apoptosis: A Review of Programmed Cell Death Susan Elmore NIEHS, Laboratory of Experimental Pathology, Research TrianglePark, North Carolina 27709, USA
  8. 8. Mecanismos de la apoptosis Vía Intrínseca Vía extrínseca Vía perforinas / granzimas A y B (células T)Patología Estructural y Funcional. Robbins. Sexta Edición
  9. 9. The biochemistry of apoptosis. NATURE VOL 407 12 OCTOBER 2000
  10. 10. Mecanismos de la apoptosis La apoptosis puede ser desencadenada por varios estímulos Intracelulares Extracelulares •Activación de receptores en la superficie de la célula. •Daños en el ADN causados por defectos en sus mecanismos de reparación. •Tratamiento con drogas citotóxicas o radiación. •Ausencia de señales de supervivencia.Apoptosis: A Review of Programmed Cell Death Susan Elmore NIEHS, Laboratory of Experimental Pathology, Research TrianglePark, North Carolina 27709, USA
  11. 11. Vía Extrínseca • Receptores transmembranales de muerte (superfamilia TNF) con sus dominios de muerte. Ej. : FasL/FasR, TNF-α/TNFR1.Apoptosis and Necrosis in the Liver: A Tale of Two Deaths? Harmeet Malhi,1 Gregory J. Gores,1,2 and John J. Lemasters3
  12. 12. Vía Extrínseca
  13. 13. Receptores de Muerte •Funciones biológicas de los receptores: •Pertenecen a la superfamilia de Receptores TNF : • TNFR1 (tumor necrosis factor receptor 1) • Fas/CD95/APO-1 (Apoptosis Antigen 1) • TRAIL/DR-4/APO-2 y TRAIL-R2/DR-5 (TNF Related Apoptosis Inducing Ligand Receptor)Apoptosis and Necrosis in the Liver: A Tale of Two Deaths? Harmeet Malhi,1 Gregory J. Gores,1,2 and John J. Lemasters3
  14. 14. Receptores de Muerte La transducción de la señal apoptótica depende de la presencia de una porción citoplasmática denominada Dominio de Muerte (Death Domain) También se pueden encontrar moleculas adaptadoras como FADD (Fas Associated Death Domain) o TRADD (TNF Receptor Associated Death Domain). Dando origen a la formación de DISC (Death Inducing DISC Signaling Complex).Apoptosis and Necrosis in the Liver: A Tale of Two Deaths? Harmeet Malhi,1 Gregory J. Gores,1,2 and John J. Lemasters3
  15. 15. TNFα y TNFR1 • TNFR1 es una proteína transmembranal con sus dominios receptores expuestos en la sup. celular. • El TNFα es producido por linfocitos T y macrófagos. • La unión de este ligando al receptor (dominio de muerte causa una trimerización y agrupamiento (proteína con región de muerte asociado a Fas) asociado al TNFR) de los dominios de muerte para (factor asociado al TNFR) desencadenar diferentes vías de señalización.Apoptosis and Necrosis in the Liver: A Tale of Two Deaths? Harmeet Malhi,1 Gregory J. Gores,1,2 and John J. Lemasters3
  16. 16. TNFα y TNFR1 TRAF-2 (factor asociado al TNFR)The biochemistry of apoptosis. NATURE VOL 407 12 OCTOBER 2000
  17. 17. Fas y FasL •Fas L es un ligando ubicado en los linfocitos T. • FasL Puede ser un ligando de membrana o soluble. • Causa trimerización de los DD (dominos de muerte) que permite su DD unión con el FADD (dominio de DED muerte asociado a Fas) que también DED contiene un DED (dominio efector de muerte). • El DED recluta a la procaspasa 8 para formar el Complejo de Señalización Inductor de Muerte (DISC).Apoptosis and Necrosis in the Liver: A Tale of Two Deaths? Harmeet Malhi,1 Gregory J. Gores,1,2 and John J. Lemasters3
  18. 18. TRAIL y TRAIL-R Existen 4 tipos de receptores TRAIL-R: • Receptores Inductores de Muerte: 1. TRAIL-R1 (DR4) 2. TRAIL-R2 (DR5) • Receptores Inhibidores de Muerte (Decoy): 1. TRAIL-R3 (DcR1) 2. TRAIL-R4 (DcR2)Apoptosis and Necrosis in the Liver: A Tale of Two Deaths? Harmeet Malhi,1 Gregory J. Gores,1,2 and John J. Lemasters3
  19. 19. Caspasas Su nombre deriva de: Proteasas dependientes de cisteína y específicos de aspartato Su actividad catalítica depende Las caspasas clivan los sustratos de un residuo cisteína crítico específicamente después de un residuo de aspartatoStructure and zymogen activation of caspases. Biophysical Chemistry 101 – 102 (2002) 145–153
  20. 20. Caspasas Las caspasas son sintetizadas como cimógenos inactivos llamados procaspasas, los cuales están constituidos por un prodominio, una subunidad pequeña (aprox. 10 KD) y otra grande (aprox. 20 KD). Al activarse mediante proteólisis forman un heterotetrámero.Structure and zymogen activation of caspases. Biophysical Chemistry 101 – 102 (2002) 145–153
  21. 21. Caspasas Pueden dividirse en: Contienen prodominios largos: Dominios Efectores de Muerte (DED) Caspasas iniciadoras: como procaspasas 8 y 10 Procaspasas 2-8-9-10 Dominios de reclutamiento de caspasas (CARD) Como procaspasas 9 y 2 Caspasas efectoras: Contienen prodominios Procaspasas 3-6-7 cortos Caspasas pro Pro IL-1 inflamatorias 1-4-5 Pro IL-18Structure and zymogen activation of caspases. Biophysical Chemistry 101 – 102 (2002) 145–153
  22. 22. Caspasas Pueden Contener: • Dominios de Reclutamiento y Activación de Caspasas. (CARD) • Dominios Efectores de Muerte Celular (DED)Structure and zymogen activation of caspases. Biophysical Chemistry 101 – 102 (2002) 145–153
  23. 23. Caspasas Las caspasas pueden activarse principalmente por 3 vías: • Clivaje proteolítico por una caspasa corriente arriba (Caspasa 3) • Proximidad inducida (Caspasa 8) • Formación de una holoenzima (Caspasa 9)Structure and zymogen activation of caspases. Biophysical Chemistry 101 – 102 (2002) 145–153
  24. 24. Caspasas Mediante sus prodominios las caspasas iniciadoras son reclutadas y activadas en los Complejos Señalizadores de Inducción de Muerte (DISC), debido a la activación de receptores de muerte o señales internas en la célula. Vía ExtrínsecaStructure and zymogen activation of caspases. Biophysical Chemistry 101 – 102 (2002) 145–153
  25. 25. Caspasas La Caspasa 9 es activada a través de eventos proapoptóticos que ocurren a nivel mitocondrial, mediante la liberación de Citocromo C. (Salvesen, 2002) La oligomerización de la procaspasa 9 en el Apaf-1, son los responsables de la activación de la caspasa 9 (Denault, 2002) Vía IntrínsecaStructure and zymogen activation of caspases. Biophysical Chemistry 101 – 102 (2002) 145–153
  26. 26. Caspasas Las caspasas pueden actuar de dos formas principalmente: • Inactivando o clivando sustratos (Cadenas polipeptídicas simples o estructuras macromoleculares complejas). • Activando sustratos ( Eliminando secciones inhibitorias o reguladoras)The biochemistry of apoptosis. NATURE VOL 407 12 OCTOBER 2000
  27. 27. Caspasas Blancos de las CaspasasThe biochemistry of apoptosis. NATURE VOL 407 12 OCTOBER 2000
  28. 28. Caspasas Una vez activadas las caspasas iniciadoras, son capaces de activar proteolíticamente a las caspasas 3-6-7 que posteriormente pueden clivar proteínas específicas, incluyendo a otras caspasas, lo cual da como resultado la mediación y amplificación de la señal de muerte.The biochemistry of apoptosis. NATURE VOL 407 12 OCTOBER 2000
  29. 29. Vía ExtrínsecaApoptosis: A Review of Programmed Cell Death. Toxicol Pathol. 2007 ; 35(4): 495–516.
  30. 30. Vía Intrínseca Factores desencadenantes de la vía intrínseca Un defectuoso del ciclo celular, Daños del ADN, Desprendimiento de la matriz extracelular, La pérdida de factores de supervivencia celular, Hipoxia Otros tipos graves de estrés celularApoptosis: A Review of Programmed Cell Death. Toxicol Pathol. 2007 ; 35(4): 495–516.
  31. 31. Vía Intrínseca • Estímulos no mediados por receptores de membrana, atacan blancos directamente dentro de la célula y son ejecutados por las mitocondrias. • Estímulos pueden ser: Negativos: Ausencias (factores de Positivos: Presencia de factores crecimiento, hormonas o factores (radiadión, toxinas, hipertermia… tróficos) )Apoptosis: A Review of Programmed Cell Death. Toxicol Pathol. 2007 ; 35(4): 495–516.
  32. 32. Vía Intrínseca• Estos mecanismos producen cambios en la membrana mitocondrial (poros) y se liberan al citosol proteínas pro apoptóticas. • Citocromo c, Smac/DIABLO, y AIFsThe biochemistry of apoptosis. NATURE VOL 407 12 OCTOBER 2000
  33. 33. Vía Intrínseca • Familia de proteínas Bcl-2. • Controlan la permeabilidad de la membrana mitocondrial, puede ser pro o anti apoptótica. • Regulan la liberación de citocromo c por la permeabilidad de la membrana mitocondrial.The biochemistry of apoptosis. NATURE VOL 407 12 OCTOBER 2000
  34. 34. Familia Bcl-2 Su nombre deriva de un gen aislado involucrado en el Linfoma de Células B. Ésta familia de proteínas ha sido dividido en tres grupos, basado en su similitudes estructurales y funcionales. Grupo I Grupo II y III Actividad anti-apoptótica Actividad pro-apoptótica Bcl-2, Bcl-x Bax, Bid, BlkThe biochemistry of apoptosis. NATURE VOL 407 12 OCTOBER 2000
  35. 35. Familia Bcl-2 Son encargadas de regular la apoptosis, ejerciendo su accion sobre la mitocondria Bid Bax y Bak Son encargados de la activación de la vía intrínseca, actuando a nivel de mitocondria y de retículo endoplasmático.The biochemistry of apoptosis. NATURE VOL 407 12 OCTOBER 2000
  36. 36. Familia Bcl-2 Existen varias teorías sobre la acción de la familia Bcl-2: • Formación de un poro para permitir la salida de Citocromo C. • Heterodimerización entre miembros pro y anti apoptóticos. • Regulación de las caspasas a través de moléculas adaptoras. • Interacción con otras proteínas mitocondriales que posiblemente permitan la salida de Citocromo C • Oligomerización para formar un canal poco selectivo.The biochemistry of apoptosis. NATURE VOL 407 12 OCTOBER 2000
  37. 37. Familia Bcl-2 En condiciones normales Bcl-2 o Bcl-xL están ancladas en determinadas membranas intracelulares como la mitocondria, el retículo endoplásmico o la membrana nuclear.The biochemistry of apoptosis. NATURE VOL 407 12 OCTOBER 2000
  38. 38. Vía Intrínseca • Puma y Noxa: Miembros de la familia de las Bcl2 asociados con reacciones pro apoptóticas. • Juegan un papel importante en la apoptosis mediada por p53.The biochemistry of apoptosis. NATURE VOL 407 12 OCTOBER 2000
  39. 39. El citocromo c: Proteína pequeña que guarda relación con la membrana interna de la miticondria. Desencadena la activación de las caspasas.The biochemistry of apoptosis. NATURE VOL 407 12 OCTOBER 2000
  40. 40. El SMAC/DIABLO: (second mithocondrial-derived activator of caspase / direct IAP-associated binding protein with Low PI), bloquea la acción de las proteínas inactivadoras de la apoptosis (IAP)The biochemistry of apoptosis. NATURE VOL 407 12 OCTOBER 2000
  41. 41. IAPs NFKβ • Ademas de regular la respuesta inmune: • Es conocido como un factor de transcripcion antiapoptotico. • A traves de la regulación de miembros de la familia Bcl-2, como Bcl-xl y Bcl-2. • Activa otros genes antiapoptoticos como los IAPs (Inhibitors of Apoptosis Proteins)The biochemistry of apoptosis. NATURE VOL 407 12 OCTOBER 2000
  42. 42. IAPs c-IAP1, c-IAP2, XIAP, Survivina • Poseen 2 funciones principales: 1. Inhibición de la actividad de las caspasas 2. Dirigen a las caspasas hacia su ubiquitinación y degradaciónThe biochemistry of apoptosis. NATURE VOL 407 12 OCTOBER 2000
  43. 43. AIF: Apoptosis inducing factor. Son proteínas pro apoptóticas. En el núcleo producen la fragmentación del ADN en porciones de ~50–300 kb.The biochemistry of apoptosis. NATURE VOL 407 12 OCTOBER 2000
  44. 44. .Apoptosis: A Review of Programmed Cell Death. Toxicol Pathol. 2007 ; 35(4): 495–516
  45. 45. Vía perforinas / granzimas• Linfocitos T citotoxicos CD8+ (NK) destruyen a las células que contienen antígenos paro los cuales han sido sensibilizados.• CD8 pueden activar la vía extrínseca FasL/FasR.• Otra vía es a través de la perforación de la membrana celular e introducción de gránulos citoplasmáticos (granzimas A y B)• La B produce activación de la caspasa 3.Apoptosis: A Review of Programmed Cell Death. Toxicol Pathol. 2007 ; 35(4): 495–516.
  46. 46. Vía perforinas / granzimas La granzima A. • Activa una vía independiente de las caspasas • Destrucción del ADN vía DNAasa NM23-H1LODISH, et al., MOLECULAR CELL BIOLOGY, Fifth Edition
  47. 47. • Factores tróficos: Proteínas relacionadas con actividad anti apoptótica ya que en su ausencia Bad puede promover la apoptosis. Ej.: NGF factor de crecimiento nervioso.LODISH, et al., MOLECULAR CELL BIOLOGY, Fifth Edition
  48. 48. Fosfatidilserina Es un fosfolípido que se encuentra normalmente en el interior de la bicapa lipídica, cuando esta se expresa en el exterior de la misma actúa como un marcador para que sea reconocida por células fagocitarias.Patología Estructural y Funcional. Robbins. Sexta Edición
  49. 49. Detección de apoptosis Anexina V es una proteína recombinante de unión a fosfatidilserina que interactua fuertemente con residuos de fosfatidilserina y puede ser usado para la detección de apoptosis.Apoptosis: A Review of Programmed Cell Death. Toxicol Pathol. 2007 ; 35(4): 495–516.
  50. 50. Apoptosis
  51. 51. Los especialistas son aquellas personas quesaben cada vez más sobre menos, hasta que finalmente saben todo sobre nada y nada sobre todo. Danny Kaye
  52. 52. Gracias…

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