Coccidios

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Coccidios

  1. 1. UNIVERSIDAD DE ORIENTE NÚCLEO BOLÍVAR ESCUELA CIENCIAS DE LA SALUD DEPARTAMENTO DE PARASITOLOGIA Y MICROBIOLOGIA CATEDRA: PARASITOLOGÍA. ENFERMERIA. COCCIDIOS LICENCIADA MÓNICA TAGLIOLA
  2. 2. Infección emergente: Una infección que ha aparecido recientemente en una población “ Su incidencia se ha incrementado en las últimas dos décadas” Infección re-emergente: Una infección que ha existido en el pasado pero su incidencia o distribución geográfica se ha incrementado rapidamente. Factores específicos precipitantes pueden ser identificados
  3. 3. <ul><li>Raramente los patogenos aparecen de novo. </li></ul><ul><li>Los patogenos que causan nuevas enfermedades ya estan presentes en el ambiente, y para entender su emergencia se debe estudiar no solo el agente causal sino los factores climaticos, politicos, economicos y sociales (Wilson, 1994). </li></ul>Las Enfermedades Infecciosas emergentes :
  4. 4. Coccidios Intestinales : Generalidades <ul><li>Las infecciones humanas son causadas por Cryptosporidium parvum , Cyclospora cayetanensis e Isospora belli . </li></ul><ul><li>Transmisión fecal-oral </li></ul><ul><li>Diarrea es la principal manifestación clínica </li></ul><ul><li>Individuos inmunocompetentes e inmunocomprometidos </li></ul><ul><li>Criptosporidiosis produce la más severa y prolongada enfermedad en pacientes con SIDA. </li></ul>
  5. 5. Coccidios Intestinales : Generalidades <ul><li>Ciclospora cayetanensis es importante causa de diarrea en inmunocompetentes. </li></ul><ul><li>Isosporiosis es grave y prolongada en imnocomprometidos aunque se presenta también en inmunocompetentes. </li></ul>
  6. 6. Coccidios. Taxonomia Reino Protista Filo Apicomplexa (Sporozoa) Clase Sporozoa (Sporozoasida) Orden Eucoccidida (Eucoccidiorida) Suborden Eimeriina (Eimeriorina) Família Sarcocystidae Eimeridae Cryptosporidae Cryptosporidium C. parvum (Mamiferos) C. muris Eimeria Isospora Cyclospora Toxoplasma Sarcocystis Neospora Babesia, Theileria
  7. 7. Cryptosporidiosis. <ul><li>Es una infección gastrointestinal (básicamente) causada por protozoarios coccidios pertenecientes al género Cryptosporidium </li></ul><ul><li>Son parásitos obligatorios, pequeños, que afectan las células epiteliales de los vertebrados y pueden causar una diarrea de corta duración en inmunocompetentes y una enfermedad prolongada, parecida al cólera, en inmunosuprimidos (Chacin Bonilla, 1995). </li></ul>
  8. 8. Durante los últimos 30 años, nuestro concepto de cryptosporidiosis ha cambiado desde una enfermedad rara, asintomática, para una importante causa de diarrea en animales y humanos en todo el mundo (Mosier & Oberst, 2000). Cryptosporidiosis .
  9. 9. Cryptosporidium parvum <ul><li>C. parvum no es nuevo: Tyzzer 1907 </li></ul><ul><li>Patógeno de animales  humano (Nime et al., 1976) </li></ul><ul><li>Patógeno emergente  SIDA </li></ul><ul><li>Parásito oportunista (inmunocompetentes también) </li></ul><ul><li>Principal patógeno entérico </li></ul><ul><li>Resistente al cloro </li></ul><ul><li>Ubicuo en muchos animales (mamíferos) </li></ul><ul><li>Asociado a agua (enfermedad hídrica) </li></ul><ul><li>Dos genotipos: I o H: infección humana/zoonotico </li></ul><ul><li>II o C: animales/humanos </li></ul><ul><li>No existe tratamiento paliativo o definitivo </li></ul>
  10. 10. Tasa de infección por C. parvum entre personas inmunocompetentes e infectadas con HIV en áreas industrializadas y en vías de desarrollo. Cryptosporidium parvum
  11. 11. <ul><li>Ciclo monoxenico </li></ul><ul><li>No especificidad de huesped </li></ul><ul><li>Ooquiste sin esporoquiste con 4 esporozoitos </li></ul><ul><li>Microgametos sin flagelos </li></ul><ul><li>Intracelular extracitoplasmático </li></ul><ul><li>Ciclo: fase asexual  sexual </li></ul><ul><li>Ooquistes: 80% pared gruesa (ambiente) </li></ul><ul><ul><ul><ul><li>20% (autoinfección) </li></ul></ul></ul></ul>Cryptosporidium parvum
  12. 12. Variable Cyclospora Cryptosporidium Isopora Tamaño Ooquiste 8-10 4-6 20-30 x 10-19 No. esporoquistes 2 Ninguno 2 No. esporozoitos 2 4 4 ZNm Variable Si Si Autofluorescencia Verde-Azul Brillante Variable
  13. 14. Transmisión 1) Directa: persona a persona. Los ooquistes son infectantes al ser expulsados 2) A través del agua: con 30 ooquistes puede ocurrir la infección (URBANA) 3) Zoonotica: ambos genotipos están presentes en animales (RURAL)
  14. 15. Crytosporidium parvum A. Quiste. Soluc. Salina B. Quiste. ZNm A B
  15. 16. Diagnóstico A. Diagnostico parasitológico Demostración de ooquistes en heces Visualización de ooquistes/otros estadios en secreciones y biopsia intestinal 1. Métodos de concentración 2. Coloraciones (ZNm, Safranina, quimioluminescentes 3. Histología B. Detección de Antígenos en Heces Kit comerciales (IFI, IFD, ELISA) Métodos directos
  16. 17. C. Diagnostico Inmunológico IFI Ac monoclonales y policlonales ELISA Inmunoblot (Wester Blot) D. Electroforesis E. Biologia molecular: PCR Métodos indirectos
  17. 18. Al fresco. Gránulos negros en los ooquistes Contraste de fase. Flotacion de Sheather. Ooquistes refractiles. C. parvum El método de flotación de Sheather solo es usado con heces frescas
  18. 19. Kinyoun. Ooquistes de Rojo intenso con granulos negros caracteristicos. Kinyoun. Ooquistes de Rojo intenso con granulos negros caracteristicos. Diferciar de las levaduras. C. parvum Varias modificaciones de la coloración ZN ( acid-fast) pueden ser usadas. La coloración de los ooquistes varia según la modificación usada de rosado a rojo intenso.
  19. 20. Cyclospora cayetanensis <ul><li>Protozoario coccidio de reciente descripción </li></ul><ul><li>Enteropatógeneo emergente </li></ul><ul><li>Se Busca, se encuentra </li></ul><ul><li>No transmisión persona a persona </li></ul><ul><li>Distribución estacional (meses mas calientes) </li></ul><ul><li>Transmisión: alimentos y agua </li></ul><ul><li>Diarrea, enfermedad biliar en SIDA </li></ul><ul><li>Por resolver: supervivencia ambiental ( alimentos , vegetales ), potencial zoonotico, transmisión a humanos, epidemiología. </li></ul>
  20. 21. Cylospora cayetanensis Taxonomía Reino Protista SubFilo Apicomplexa Subclase: Cossidiasina Orden Eucoccidiorida Familia Eimeriidae Género Cyclospora
  21. 22. Ciclo vital de C. cayetanensis
  22. 23. Identificación de ooquistes en especimenes fecales por microscopia de luz Otros métodos bajo investigación A. Microscopia Guías básicas 1) Muestras de heces multiples (al menos 3) 2) Usar métodos de concentración (Formol eter) 3) Técnica diagnostica de elección: Disponibilidad de equipos y reactivos Experiencia Tiempo y costo PUNTOS CLAVE PARA EL DIAGNOSTICO LABORATORIAL DE Cyclospora
  23. 24. PRUEBAS DIAGNOSTICAS PARA Cyclospora 1) Montaje el fresco a) Microscopia de campo brillante (Contraste diferencial por interferencia) Esferas refractiles Otros objetos con aspecto similar No permanente b) Fluorescencia bajo LUV Autofluorescencia verde (330-335 nm) Otros objetos con aspecto similar No permanente Microscopio de fluorescencia Contraste de fase: fácil
  24. 25. PRUEBAS DIAGNOSTICAS PARA Cyclospora 2) Coloración Acido-alcohol resistente modificada de Kinyoun Color rojo sobre un fondo verde azulado Pueden tener tonos variables (algunos no coloreados) Pueden no ser perfectamente redondos (colapsados o distorcionados) Gránulos y/o tener una pared característica Permanente Artefactos (errores diagnósticos) 3) Coloración con Safranina Se colorean uniformemente de rojo a naranja Requiere calentamiento (equipo adicional, p.e. microonda) 1997: Safranina modificada con calentamiento en microonda (Visvesvara et al.)
  25. 26. PRUEBAS DIAGNOSTICAS PARA Cyclospora 4) Otros Métodos: Coloración tricromica Los ooquistes pueden ser detectados pero no confirmados por este método Pueden aparecer no coloreados Cuando por Tricromico se sospecha, usar las colroaciones anteriores para confirmar Identificación histológica en biopsias intestinales No rutina Varias observaciones B. Ensayo de Esporulación C. Métodos Moleculares
  26. 27. DIFERENCIACI ÓN ENTRE OOQUISTES DE Cyclospora y Cryptosporidium
  27. 29. Yodo de D’antoni Lugol C. cayetanensis
  28. 30. Solución Salina Al fresco (heces recién emitidas: masa morular granular en su interior dejando un espacio libre entre esta y la cubierta externa .
  29. 31. Contraste de fase. Glóbulos refractiles dentro del ooquiste Contraste de fase. 2 esporoquistes. Esporozoitos no visibles C. cayetanensis
  30. 32. Kinyoun. C. cayetanensis
  31. 33. Kinyoun + Hematoxilina. Rojos sobre fondo gris. Epifluorescencia ultravioleta C. cayetanensis
  32. 34. Kinyoun. C. parvun + C. cayetanensis Kinyoun. C. parvun + C. cayetanensis C. cayetanensis
  33. 35. Isospora belli <ul><li>Pacientes con SIDA/ normales </li></ul><ul><li>Parasita enterocitos </li></ul><ul><li>Alli ocurre ciclo sexual y asexual </li></ul><ul><li>Ooquistes elíptico no esporulados en las heces. Polos finos y doble pared lisa. </li></ul><ul><li>Transmisión: agua y alimentos mas frecuente tropico y en paises subdesarrollados. </li></ul>
  34. 36. <ul><li>Demostración de ooquistes alargados típicos (20-33  m x 10-19  m) NO esporulados en las heces. </li></ul><ul><li>Examen directo o concentración (flotación o sedimentación). </li></ul><ul><li>En ZNm (acid-fast) el esporoblasto dentro del ooquiste se colorea de rojo </li></ul><ul><li>PUNTOS CLAVE PARA EL DIAGNOSTICO LABORATORIAL DE I. belli </li></ul>Al fresco. Heces recientes: Ooquiste con 1 esporoblasto Después de varias horas a temperatura ambiente. Ooquiste con 2 esporoquistes. Ooquistes esporulados no son vistos en heces frescas
  35. 37. Kinyoun. Kinyoun. Post-tratamiento I. belli
  36. 38. Material preservado en formalina. Epifluorescencia I. belli
  37. 39. Variable Cyclospora Cryptosporidium Isopora Tamaño Ooquiste 8-10 4-6 20-30 x 10-19 No. esporoquistes 2 Ninguno 2 No. esporozoitos 2 4 4 ZNm Variable Si Si Autofluorescencia Verde-Azul Brillante Variable
  38. 40. ACIDO-ALCOHOL MODIFICADA (Kinyoun) C. parvum C. cayetanensis I. belli SAFRANINA

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