Rosa de bengala
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Rosa de bengala Rosa de bengala Document Transcript

  • ES 1 CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD DE LOS COMPONENTES UNA VEZ ABIERTOS: COMPONENTE Todos los componentes ROSE BENGAL ESTABILIDAD Fecha indicada en envase a 2 - 8ºC ESTABILIDAD Y USO DE LOS REACTIVOS: RB001: Prueba rápida para la detección de anticuerpos aglutinantes antiBrucella en suero humano. 125 tests. INTRODUCCIÓN: La brucelosis es una zoonosis de distribución mundial producida por distintas especies del género Brucella que representa un problema de salud pública en muchos países. La brucelosis humana tiene una gran variedad de manifestaciones clínicas, lo cual dificulta su diagnosis. Las pruebas más empleadas en el diagnóstico serológico de la brucelosis son la prueba de Rosa de Bengala, la aglutinación, el test de Coombs y las pruebas de ELISA. La prueba de Rosa de Bengala se utiliza en el diagnóstico de la brucelosis como prueba de criba por su rapidez, sencillez y sensibilidad, aunque debe ser confirmada con otras pruebas bacteriológicas y serológicas (BRUCELLACAPT® y ELISA). FUNDAMENTO DEL MÉTODO: Método en tarjeta que detecta anticuerpos aglutinantes empleando células de Brucella inactivadas, teñidas con Rosa de Bengala y resuspendidas en un tampón ácido. El pH ácido de la suspensión impide la aglutinación inespecífica de las bacterias, contribuyendo así a la especificidad de la prueba. En la reacción intervienen anticuerpos aglutinantes de las clases IgG, IgM e IgA. CARACTERÍSTICAS: Todos los reactivos vienen listos para su uso. La suspensión bacteriana está coloreada como ayuda a la interpretación de los resultados. No se precisa dilución previa de la muestra. El antígeno se suministra en gotero para facilitar su dispensación. Los resultados se obtienen de forma inmediata. CONTENIDO DEL KIT: 1 VIRCELL ROSE BENGAL SUSPENSION: 5 ml de una suspensión ácida de Brucella inactivada y teñida con Rosa de Bengala, con fenol. 2 VIRCELL ROSE BENGAL POSITIVE CONTROL: 1 ml de suero control positivo, con fenol. 3 VIRCELL ROSE BENGAL NEGATIVE CONTROL: 1 ml de suero control negativo, con fenol. Conservar entre 2 y 8ºC y comprobar la fecha de caducidad. Material necesario contenido en el kit: Tarjetas de reacción. Varillas mezcladoras. Material necesario no contenido en el kit: Pipeta de precisión para dispensar 40 µl. Agitador rotatorio (100 r.p.m.) opcional. Usar todos los reactivos en condiciones asépticas para evitar contaminaciones microbianas. Utilizar sólo la cantidad de suspensión bacteriana necesaria para la realización de la prueba. No devolver al vial el exceso sobrante. VIRCELL, S.L. no se responsabiliza de la inadecuada utilización de los reactivos contenidos en el kit. RECOMENDACIONES Y PRECAUCIONES: 1. Este producto es sólo para diagnóstico in vitro y está destinado al uso por personal sanitario cualificado. 2. Usar sólo componenetes del kit. No mezclar los componentes de diferentes kits o fabricantes. 3. Utilizar puntas de pipeta diferentes y limpias para cada muestra. Utilizar sólo material limpio y preferentemente desechable. 4. No utilizar en caso de deterioro del envase. 5. No pipetear con la boca. 6. Los controles de este equipo contienen material de origen animal y humano. Aunque los sueros control del equipo son sometidos a controles de ausencia de HBsAg anticuerpos frente a VIH y Hepatitis C, es necesario manejar los controles y muestras del paciente como potencialmente patógenos. La suspensión bacteriana contiene antígeno de Brucella abortus inactivado, no obstante, debe manejarse con precaución. Ningún método actual puede asegurar por completo la ausencia de éstos u otros agentes infecciosos. Todo el material debe ser manipulado y desechado como potencialmente infeccioso. Observe la regulación local en materia de residuos clínicos. 7. Por contener fenol (concentración <1%) evitar el contacto de la suspensión bacteriana con la piel, ojos y mucosas. 8. El kit contiene elementos de vidrio que en caso de rotura podrían provocar lesiones físicas. Manipular con precaución 9. Use únicamente los protocolos descritos en este prospecto. Si el tiempo de incubación empleado en la prueba no es el especificado, los resultados pueden ser erróneos. 10. No dejar los reactivos a temperatura ambiente más tiempo del absolutamente necesario. 11. Es necesario agitar la suspensión bacteriana 1 inmediatamente antes de su uso. TOMA DE MUESTRA: La sangre debe extraerse en condiciones asépticas mediante técnicas de venipuntura por personal experimentado. Se recomienda el uso de técnicas estériles o asépticas para evitar la contaminación de la muestra. Los sueros deben mantenerse refrigerados entre 2 y 8ºC si se van a procesar dentro de los 7 días siguientes a la toma, pero si el procesamiento se va a prolongar deben congelarse a -20ºC, evitando las congelaciones y descongelaciones innecesarias. No utilizar sueros hiperlipémicos, hemolizados o contaminados. Los sueros que presenten partículas pueden ser clarificados por centrifugación. No inactivar los sueros antes de realizar el ensayo. PROCEDIMIENTO DEL ENSAYO: CONSERVACIÓN: Conservar entre 2 y 8ºC. No utilizar los componentes del kit después de la fecha de caducidad. Los kits son estables hasta el final del mes indicado en la fecha de caducidad, siempre que los componentes se mantengan cerrados y conservados entre 2 y 8ºC. 1.-Dejar que los reactivos y las muestras alcancen la temperatura ambiente. 2.-Homogeneizar la suspensión antigénica 1 mediante agitación suave. 3.-Depositar 40 µl de la muestra a analizar en uno de los círculos individualizados de la tarjeta. Depositar 40 µl de cada uno de los controles 2 y 3 en otros dos círculos de la tarjeta. 4.-Añadir a cada círculo, próximo a la muestra a analizar, una gota de la suspensión antigénica 1 teñida con Rosa de Bengala. 5.-Mezclar las dos gotas con ayuda de una varilla mezcladora de forma que se cubra toda la superficie del círculo. 6.-Agitar la tarjeta manualmente o con ayuda de un agitador rotatorio (100 r.p.m.) durante 4 minutos. Al cabo de este tiempo observar la presencia o no de aglutinación. PRODUCTO PARA DIAGNÓSTICO IN VITRO Fabricante: VIRCELL, S.L. Pza. Dominguez Ortiz 1. Polígono Industrial Dos de Octubre.18320 Santa Fe *GRANADA* SPAIN* Tel.+34.958.441264* Fax+34.958.510712 http://www.vircell.com
  • ES 2 CONTROL DE CALIDAD INTERNO: REACCIÓN CRUZADA E INTERFERENCIAS: Cada lote se somete a Control de Calidad Interno antes de su liberación asegurando el cumplimiento del protocolo de validación por el usuario mediante especificaciones más estrictas. Los resultados de control final de cada lote están disponibles. La correlación del material de control se asegura mediante ensayos paralelos frente a paneles de sueros de referencia internamente validados Se ensayaron 16 muestras caracterizadas positivas frente a miembros del grupo sindrómico (Salmonella typhi O, Salmonella typhi H, citomegalovirus, Toxoplasma, virus de Epstein-Barr). Se realizó un ensayo a 3 muestras caracterizadas positivas frente a anticuerpos antinucleares. Las muestras ensayadas dieron resultados negativos, demostrando la reacción específica del ensayo sin reacción cruzada o interferencias ocasionadas por los agentes descritos. PROTOCOLO DE VALIDACIÓN POR EL USUARIO: SÍMBOLOS UTILIZADOS EN EL PRODUCTO: Cada ensayo debe utilizar control positivo y negativo. Su utilización permite la validación de la prueba y el equipo. El control positivo deberá dar una aglutinación clara. El control negativo deberá dar ausencia de aglutinación. Producto para el diagnóstico in vitro Fecha de caducidad 8ºC INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS: Conservar entre 2-8ºC 2ºC La presencia de aglutinación implica reacción positiva e indica la existencia de anticuerpos frente a Brucella. La ausencia de aglutinación implica reacción negativa e indica la ausencia de anticuerpos aglutinantes frente a Brucella.  x Contiene suficiente para <X> pruebas Lote LIMITACIONES DEL MÉTODO: Referencia (catálogo) 1.-Este método está diseñado para ser utilizado con suero humano. 2.-El uso de este kit requiere la cuidadosa lectura y comprensión del folleto de instrucciones. Es necesario seguir estrictamente el protocolo para obtener resultados fiables, en particular el correcto pipeteo de muestras y reactivos y tiempos de incubación. 3.-Los resultados de las muestras deben ser valorados junto con la sintomatología clínica y otros procedimientos diagnósticos. El diagnóstico definitivo debe realizarse mediante técnicas de aislamiento. 4.-El test no indica el lugar de la infección. No pretende sustituir al aislamiento. 5.-La ausencia de un nivel detectable de anticuerpos no excluye la posibilidad de infección. 6.-Pueden obtenerse resultados falsos positivos en: (i) sujetos sanos que viven en zonas endémicas y que han estado en contacto con Brucella; (ii) sujetos que han pasado la enfermedad y que en el momento de realizar la prueba están libres de signos y síntomas de la enfermedad; (iii) personas que han sufrido infecciones por bacterias que comparten con Brucella epítopos comunes a nivel del lipopolisacárido. 7.-En pacientes con brucelosis localizadas pueden encontrarse resultados falsos negativos debido a la ausencia de anticuerpos aglutinantes, en estos casos habrá que emplear una técnica serológica, como el BRUCELLACAPT®, que permita la detección de anticuerpos totales (aglutinantes y no aglutinantes). PRESTACIONES SENSIBILIDAD Y ESPECIFICIDAD: Se ensayaron 147 muestras de suero con ROSE BENGAL frente a un equipo de Rosa de Bengala de otra casa comercial, obteniendo una sensibilidad del 99% y una especificidad del 97,6%. PRECISIÓN INTRAENSAYO: Se probaron 3 sueros, 2 positivos y 1 negativo, en ensayo de titulación, pipeteados individualmente en grupos de 5 en un único ensayo realizado por el mismo operador en condiciones de trabajo idénticas. En ningún caso se observaron oscilaciones superiores a 1 título. PRECISIÓN INTERENSAYO: Consultar instrucciones de uso BIBLIOGRAFÍA: 1. Altwegg, M. and E. Bohl. 1985. Evaluation of a rapid, reliable, and inexpensive screening test for the serological diagnosis of human brucellosis. Zentralbl Bakteriol Mikrobiol Hyg [A] 260:65-70. 2. Baum, M., O. Zamir, R. Bergman-Rios, E. Katz, Z. Beider, A. Cohen, and M. Banai. 1995. Comparative evaluation of microagglutination test and serum agglutination test as supplementary diagnostic methods for brucellosis. J Clin Microbiol 33:2166-70. 3. Blasco, J. M., B. Garin-Bastuji, C. M. Marin, G. Gerbier, J. Fanlo, M. P. Jimenez de Bagues, and C. Cau. 1994. Efficacy of different Rose Bengal and complement fixation antigens for the diagnosis of Brucella melitensis infection in sheep and goats. Vet Rec 134:415-20. 4. Cernyseva, M. I., E. N. Knjazeva, and L. S. Egorova. 1977. Study of the plate agglutination test with rose bengal antigen for the diagnosis of human brucellosis. Bull World Health Organ 55:669-74. 5. Diaz, R., E. Maravi-Poma, G. Delgado, and A. Rivero. 1978. Rose Bengal plate agglutination and counterimmunoelectrophoresis tests on spinal fluid in the diagnosis of Brucella meningitis. J Clin Microbiol 7:236-7. 6. Gomez, M. C., C. Rosa, P. Geijo, and M. A. Escribano. 1999. [Comparative study of the Brucellacapt test versus the Coombs test for Brucella]. Enferm Infecc Microbiol Clin 17:283-5. 7. Gonzalez-Gay, M. A., C. Garcia-Porrua, D. Ibanez, and M. J. GarciaPais. 1999. Osteoarticular complications of brucellosis in an Atlantic area of Spain. J Rheumatol 26:141-5. 8. Lucero, N. E. and J. E. Bolpe. 1998. Buffered plate antigen test as a screening test for diagnosis of human brucellosis. J Clin Microbiol 36:1425-7. 9. Oomen, L. J. and S. Waghela. 1974. The rose bengal plate test in human brucellosis. Trop Geogr Med 26:300-2. 10. Potasman, I., L. Even, M. Banai, E. Cohen, D. Angel, and M. Jaffe. 1991. Brucellosis: an unusual diagnosis for a seronegative patient with abscesses, osteomyelitis, and ulcerative colitis. Rev Infect Dis 13:1039-42. 11. Sanchez-Sousa, A., C. Torres, M. G. Campello, C. Garcia, F. Parras, E. Cercenado, and F. Baquero. 1990. Serological diagnosis of neurobrucellosis. J Clin Pathol 43:79-81. Se probaron 3 sueros, 2 positivos y 1 negativo, en ensayo de titulación pipeteados individualmente en 5 condiciones diferentes en las que variaron el operador o el día de realización. En ningún caso se observaron oscilaciones superiores a 1 título. Para cualquier aclaración o consulta, contactar con: technicalservice@vircell.com REVISADO: Octubre-05 PRODUCTO PARA DIAGNÓSTICO IN VITRO Fabricante: VIRCELL, S.L. Pza. Dominguez Ortiz 1. Polígono Industrial Dos de Octubre.18320 Santa Fe *GRANADA* SPAIN* Tel.+34.958.441264* Fax+34.958.510712 http://www.vircell.com