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Ley de Lambert-Beer (Espectrofotometría)

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Resumen rápido sobre los fundamentos de la espectrofotometría de absorción, y de la ley de Lambert-Beer, y su aplicación. (Esta presentación no es de mi autoría, pero la publico para su uso)

Resumen rápido sobre los fundamentos de la espectrofotometría de absorción, y de la ley de Lambert-Beer, y su aplicación. (Esta presentación no es de mi autoría, pero la publico para su uso)

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  • 1. Análisis espectrofotométricos
  • 2. 1. Características de una onda electromagnética La radiación electromagnética es una onda, caracterizada por sus propiedades: Longitud de onda λ Frecuencia ν Amplitud A 09/25/13 Free Template from www.brainybetty.com 2
  • 3. 2. Ley de Lambert y Beer La cantidad de luz absorbida depende de: El tipo de sustancia por la que atraviesa la luz La distancia que recorre la luz La concentración de la sustancia 09/25/13 Free Template from www.brainybetty.com 3
  • 4. 2. Ley de Lambert y Beer Transmitancia ó % transmitancia % T = (I/Io) ×100 Absorbancia: se relaciona con la Transmitancia por medio de la ecuación: A = -log T = -log(I/Io) = log(Io/I) A = ε C d donde: ε : Coeficiente de absortividad C: Concentración de la sustancia en análisis d: distancia que recorre la luz 09/25/13 Free Template from www.brainybetty.com 4
  • 5. 3. Espectro electromagnético 09/25/13 Free Template from www.brainybetty.com 5
  • 6. 4. Efectos de la radiación UV y visible sobre las moléculas La radiación UV y visible al actuar sobre las moléculas puede producir excitaciones electrónicas sobre determinados grupos funcionales, que en el caso de la luz visible se llaman grupos cromóforos, porque son responsables del color. 09/25/13 Free Template from www.brainybetty.com 6
  • 7. Grupos cromóforos: son grupos funcionales responsables de la absorción de la radiación Principalmente son: Metales de transición Dobles y triples enlaces C-C, sistemas aromáticos, grupo carbonilo, imino -C=N, nitro y enlaces C-Y donde Y es un átomo con pares libres. 09/25/13 Free Template from www.brainybetty.com 7 Grupo hemo de la hemoglobina Minerales
  • 8. 09/25/13 Free Template from www.brainybetty.com 8 Grupos auxocromos: son grupos sustituyentes del cromóforo y alteran la λmax. Son auxocromos los halógenos, grupos metilo, grupos hidroxi, alcohoxi, amino. Efecto de los grupos auxocromos sobre los cromóforos: • Desplazamiento batocrómico.- La absorción del cromóforo se desplaza hacia mayores longitudes de onda •Desplazamiento hipsocrómico.- La absorción del cromóforo se desplaza hacia menores longitudes de onda •Efecto hipsocrómico.- la banda presenta mayor intensidad •Efecto hipocrómico.- la banda presenta menor intensidad
  • 9. Grupos cromóforos: • Grupos orgánicos con dobles enlaces conjugados • Grupos orgánicos con estructuras aromáticas 09/25/13 Free Template from www.brainybetty.com 9 Β-caroteno Antocianos
  • 10. • Absorbe una parte de la energía del espectro visible la sustancia aparece del color complementario
  • 11. 5. Espectro visible Un colorante puede absorber la luz visible y el color que aparece es el color que se refleja. Por eso un colorante que absorbe la luz roja, aparecerá de color azul. 09/25/13 Free Template from www.brainybetty.com 11
  • 12. Espectrofotómetro 09/25/13 Free Template from www.brainybetty.com 12
  • 13. Espectrofotómetro 09/25/13 Free Template from www.brainybetty.com 13
  • 14. 7. Cuantificación de sustancias con ayuda de la espectrofotometría Se debe realizar primero el espectro característico de la sustancia, para encontrar la longitud de máxima aborbancia (λ). 09/25/13 Free Template from www.brainybetty.com 14
  • 15. 7. Cuantificación de sustancias con ayuda de la espectrofotometría Una vez determinada λmax se procede a trabajar a esta longitud de onda para construir la curva de calibración de la sustancia, preparando diferentes concentraciones de la misma. 09/25/13 Free Template from www.brainybetty.com 15
  • 16. 7. Cuantificación de sustancias con ayuda de la espectrofotometría 09/25/13 Free Template from www.brainybetty.com 16 Curva de calibración k = ε×d
  • 17. 8. Estructura de algunos colorantes 09/25/13 Free Template from www.brainybetty.com 17 Azul de metileno Anaranjado de metilo
  • 18. 8. Estructura de algunos colorantes 09/25/13 Free Template from www.brainybetty.com 18 Rojo de metilo Rojo congo
  • 19. 09/25/13 Free Template from www.brainybetty.com 19 ¿PREGUNTAS?