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Albo. aceites esenciales Albo. aceites esenciales Presentation Transcript

  • “Evaluación de aceites esenciales para el control de ascosferosis en colmenas de abejas melíferas” Albo G.Producción Animal I. Facultad de Ciencias Agrarias y Forestales. UNLP. La Plata, ARGENTINA. albo.graciela@yahoo.com.ar
  • La cría yesificada esuna micosis invasiva delas abejas melíferas (A.mellifera, L.), queafecta el estadío larval.El agente causal es elhongo Ascosphaeraapis (Maassen exClaussen) Olive &Spiltoir (1955).
  • Síntomas de la enfermedad
  • Estructuras reproductivas de A. apis AscoscistosEsporocistos Ascospor as
  • Importancia de la enfermedad Argentina 1º-2º exportador mundial de mielMenor eficiencia Reduce la producción polinizadora de miel Cría Yesificada Rara vez mata 12 % de infección no una colmena se detecta. Control80 % colmenas Las esporas infectanApic. migratoria larvas sanas Esporas Buscar alternativas de manejo integrado
  • OBJETIVOEvaluar y comparar la actividad in vitro de las esencias de Laurus nobilis, Calamintha officinalis y Lippia alba sobre Ascosphaera apis, y sus potenciales efectos tóxicos en los estadíos adulto y larval de Apis mellifera L.
  • • Laurel (Laurus nobilis L., Fam. Lauraceae).• Calaminta (Calamintha officinalis Moench., Fam. Lamiaceae).• Salvia morada (Lippia alba Mill., Fam. Verbenaceae).
  • 1.- PRUEBAS DE SENSIBILIDAD in vitro Método de difusión en agar Medio de cultivo: MY20 Incubación: 28 ºC Concentraciones de las esencias: 50, 100, 200, 400, 800 y 1600 ppm Mediciones del crecimiento del hongo: 24, 48 y 72 h
  • Selección de los Siembra Preparación del Inóculo: aislamientos. alícuotas de 7 mm diámetroMedición del Incubación a 28 °C Siembra del inóculocrecimiento del hongo en medio de cultivoa 24, 48 y 72 h + esencia + disolvente PG 2,5 %
  • Sensibilidad in vitro de L. nobilis 39,36 Crecimiento de A. apis (mm) 38,79 28,54 29,43 72 horas 21,64 48 horas 25,71 24,00 24 horas 16,86 17,29 15,29 7,07 13,71 12,36 7,40 8,79 8,61 8,50 7,00 50 100 200 400 800 1600 Concentraciones de la esencia (ppm)Figuras 1: Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) de la esencia de L. nobilis frente a A. apis
  • Sensibilidad in vitro de L. alba 37,64 Crecimiento de A. apis (mm) 31,36 31,00 27,57 72 horas 48 horas 22,71 24 horas 20,57 17,64 14,57 7,45 7,00 7,20 7,00 11,07 10,71 9,00 7,75 7,00 7,00 50 100 200 400 800 1600 Concentraciones de la esencia (ppm)Figura 2: Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) de la esencia de L. alba frente a A. apis
  • Sensibilidad in vitro de C. officinalis 36,43 36,57 Crecimiento de A. apis (mm) 27,00 72 horas 24,57 48 horas 22,07 22,36 24 horas 13,39 7,07 7,00 10,86 8,86 7,00 11,79 11,64 7,96 7,25 7,00 7,00 50 100 200 400 800 1600 Concentraciones de la esencia (ppm)Figura 3: Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) dela esencia de C. officinalis frente a A. apis
  • RESULTADOS• El perfil de sensibilidad de los aislamientos estudiados no mostró diferencias significativas.CMI a las 72 h de contacto del hongo con las esencias: L. nobilis: 1600 ppm C. officinalis: 800 ppm L. alba: 800 ppm
  • DOSIS LETAL MEDIA (DL50) DE LAS ESENCIAS EN ABEJA ADULTA Dosis: Esencias: 0.25, 0.50, 1, 2, 4, y 8 μg de p.a./abeja; dimetoato: 0,02; 0,04; 0,08; 0,16; 0,32 y 0,64 µg p.a./abeja Controles: tóxico: dimetoato; atóxico: sacarosa al 50 %. Midió la mortalidad de abejas adultas a las 24, 48 y 72 h. La DL50 se calculó con el Programa PROBIT.
  • DL50 de las esencias en abeja adulta  24 h 48 h 72 h L. nobilis 257,67 264,66 261,87 C.officinalis 520.611,30 119.231,55 35.760,16 L. alba 26.192,48 41.659,38 18.640,24 Dimetoato 0,327 0,231 0,202Referencias: >100 µg p.a./abeja: virtualmente no tóxica; entre 10 y 100 µg p.a./abeja:levemente tóxico; entre 1 y 10 p.a./abeja : moderadamente tóxico; < 1 µg p.a./abeja:altamente tóxico.Todas las esencias en estudio fueron “VIRTUALMENTE NOTOXICAS”.L. nobilis presentá niveles mayores de DL50 y podría resultar tóxico adosis mayores.
  • Composición del Candy:37,5 g Azúcar impalpable12,5 g Glucosa-Dosis de las esencias:800 mg de L. alba y C. officinalis1600 mg de L. nobilisSe realizan 4 inspeccionessemanales al día 0, 7, 14 y 21 deevaluación 180 celdas con cría abierta
  • ENSAYO DE TOXICIDAD LARVAL in vivo• Se encontraron diferencias altamente significativas entre tratamientos (p = 000,16)• El Test de Tukey diferenció dos grupos, por un lado la esencia de C. officinalis y Testigo con 13 y 7 % de mortalidad, respectivamente. Por el otro, L. nobilis y L. alba con 21 y 31 % de mortalidad respectivamente.
  • Tabla 2. Resultado del Test de Tukey.Existen diferencias altamentesignificativas entre tratamientos ( ≤ 0,001) C. L. officinali  Testigo L. alba nobilis s         Testigo 0 36,5 15,4 7,6L. alba -36,5 0 -21,1 -28,9L. nobilis -15,4 21,1 0 -7,8C. officinali -7,6 28,9 7,8 0 s
  • Toxicidad larval a campo C. Officinalis resultó la única esencia L. alba; ATOXICA 31,03% L. nobilis; para larvas L. alba 40,00% 22,36% L. nobilis 30,00% C. officinalis; C. officinalisPorcentaje de 12,60% Testigo; 6,30% mortalidad 20,00% Testigo 10,00% 14 0,00% % % de mortalidad normal Esencias
  • C ONS UMO DE C ANDIE S C ON E S E NC IAS E N C OL ME NAS 60 50 50 45,6 L. nobilis 40 C . citratus 30 L. alba 20 18,5 C . officinalis 12,6 10 9 8,3 7,8 10,8 Tes tigo 7 5,6 2,8 2,1 0 0 0,5 0,2 0 1 2 3 4 5 -10 Ins pe c c io ne s (0, 7, 14 y 21 días )
  • CONCLUSION• La esencia de C. officinalis es promisoria para su uso en el control de A. apis en colonias de A. mellifera, L.• Posee efecto fungistático sobre A. apis, es atóxico para los estadios larval y adulto de la abeja melífera y es consumido por la colonia en su totalidad.• Restaría determinar los componentes principales de la esencia.
  • POTENCIAL ACTIVIDAD INHIBITORIA DE DIFERENTES DISOLVENTES DE LAS ESENCIASDisolventes• Tween 80 1 %• DMSO (Dimetilsulfóxido)• Alcohol 70º• Propilenglicol 2,5 % (PG 2,5 %)• Agua30 aislamientos de A. apis de diferentes orígenes geográficos (Córdoba, Buenos Aires, La Pampa, Neuquén y Chile)
  • Resultados• Se observaron diferencias significativas entre tratamientos (p = 0,03).• No se observaron diferencias significativas con alcohol 70º, PG 2,5 %, agua y Tween 80.• El análisis de LSD mostró que DMSO se diferenció estadísticamente del resto de los disolventes. ConclusiónEl “DMSO” no debería ser usado como disolvente ya que presentainhibición per se. Sin embargo, es el disolvente que disuelve enforma más eficiente a las esencias. Por ello, se deberíanprofundizar los estudios para determinar su posible efectosinérgico con otro disolvente, que permita reducir suconcentración y por lo tanto su efecto inhibidor.
  • Tasa de crecimiento (en mm) con diferentes solventes Tween 80 2,5% ORIGEN CEPAS Alcohol 70º Agua DMSO al 1% PropilenglicolGORINA 42 9,0 9,7 9,3 9,2 8,8GRAL.PAZ 44 9,4 9,5 8,4 9,1 6,9ABRAMO MACHETTI 96 6,6 7,2 6,5 7,2 5,6SAAVEDRA 27 8,9 10,5 9,8 9,0 7,3LABORDE 47 7,1 7,0 7,5 6,9 6,5PUNTA DE INDIO 76 6,6 8,9 7,7 7,5 5,5JACINTO ARAOZ 35 7,4 8,3 7,6 7,5 5,8ALBERTI 95 8,5 7,2 6,7 8,5 6,6LOS HORNOS 79 9,5 9,9 9,1 10,1 7,1CHACRAS CHASM. 46 7,5 6,7 9,2 9,1 7,1GUATRACHE 98 7,3 7,6 8,1 8,2 6,9JUSTINIANO POSSE 39 5,0 7,5 6,7 8,3 4,9HUINGANGO 26 5,6 6,9 8,1 6,9 5,3CHILE 8 6,8 8,5 4,8 7,7 7,1CHILE 14 6,3 8,0 5,0 7,1 5,6CHILE 17 8,6 11,7 9,0 10,7 9,2CHILE 19 7,2 7,1 5,9 6,8 5,3CHILE 20 8,3 8,2 8,3 8,3 6,3LAPRIDA 37 7,6 9,2 9,3 9,8 6,3LAPRIDA 70 6,9 6,7 6,3 7,9 7,1PIGUE 4 9,5 9,3 9,4 5,1 4,1BME. BAVIO 87 6,5 6,9 6,8 8,3 6,0TANDIL 38 5,9 5,4 6,9 5,6 3,7TANDIL 77 7,2 7,2 7,4 7,2 5,925 DE MAYO 25 6,3 6,7 6,7 5,6 3,8RANELAGH 99 6,3 7,5 7,1 10,0 7,2MIRAMAR 97 8,3 8,3 8,6 6,5 4,4MONTE BUEY 75 8,6 9,2 10,1 7,1 4,5PIGUÉ 52 6,8 8,5 9,3 6,9 4,5LABORDE 41 7,2 7,5 7,0 5,5 4,0 MAX 9,5 11,7 10,1 10,7 9,2 MIN 5,0 5,4 4,8 5,1 3,7
  • Sensibilidad in vitro de los diluyentes Diluyente CMI DMSO 150 ppm Alcohol 70º 250 ppm Tween 80 500 ppm Agua 500 ppm PG 2,5 % 500 ppm
  • DETERMINAR Y COMPARAR LA ACTIVIDADin vitro DE Cymbopogon citratus FRENTE A A. apis USANDO 5 DILUYENTES.• Concentraciones de C. citratus: 250 y 750 ppm.• Diluyentes: Tween 80, dimetilsulfóxido (DMSO), propilenglicol 2,5%, agua y alcohol 70.• Control de crecimiento (100%): A. apis + agua.
  • RESULTADOS• No se observaron diferencias significativas en la sensibilidad de los aislamientos estudiados.• Cymbopogon citratus inhibió el crecimiento a las 72 h.• Con DMSO y Tween 80, hubo diferencias significativas en ambas concentraciones de la esencia evaluada cuando se los comparó con el control de crecimiento.• Para el PG 2,5% y alcohol 70º las diferencias significativas fueron observadas solo a 750 ppm.
  • Valor de crecimiento de Ascosphaera apis en mm frente a Cymbopagon citratus según el diluyente utilizado Alcohol 70º Tween 80 (1%) Agua 2,5% propilenglicol DMSO 250 PPM 750 PPM 250 PPM C. 750 PPM C. 250 PPM 750 PPM 250 PPM 750 PPM 250 PPM C. 750 PPM C. citratus C. citratus citratus citratus C. citratus C. citratus C. citratus C. citratus citratus C. citratusMAX 6,3 0,0 5,5 0,0 3,5 0,0 4,3 0,0 2,0 0,0MIN 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0MG 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0 0,0