• Like
Kinetika encimov
Upcoming SlideShare
Loading in...5
×

Thanks for flagging this SlideShare!

Oops! An error has occurred.

Kinetika encimov

  • 1,089 views
Published

Kinetika encimov

Kinetika encimov

Published in Education
  • Full Name Full Name Comment goes here.
    Are you sure you want to
    Your message goes here
    Be the first to comment
    Be the first to like this
No Downloads

Views

Total Views
1,089
On SlideShare
0
From Embeds
0
Number of Embeds
0

Actions

Shares
Downloads
4
Comments
0
Likes
0

Embeds 0

No embeds

Report content

Flagged as inappropriate Flag as inappropriate
Flag as inappropriate

Select your reason for flagging this presentation as inappropriate.

Cancel
    No notes for slide

Transcript

  • 1. ENCIMSKA KINETIKA Matej Huš, november 2009
  • 2. POMEN POZNAVANJA
    • nudi vpogled v mehanizem delovanja encima
    • nudi informacije o vlogi encima v celicah in odzivu na spremembe koncentracije metabolitov
    • pomaga razumeti, kako lahko encim kontroliramo
  • 3. PRIDOBIVANJE PODATKOV
    • Iščemo hitrost tvorbe produkta ali izginevanja substrata .
    • Variiramo:
      • koncentracijo substrata
      • pH
      • temperaturo
      • koncentracijo ligandov
  • 4. PRIDOBIVANJE PODATKOV
    • D-glukoza + ATP D-glukoza 6-fosfat + ADP
    • Diskontinuirna metoda
      • Vzorčenje, ustavitev reakcije, meritev koncentracije produkta (kromatografija)
    • Kontinuirna metoda
      • D-glukoza 6-fosfat + NADP + 6-fosfoglukonat + NADPH
      • Merjenje absorpcije NADPH pri 340 nm
      • Sklopljena reakcija ne sme biti počasna
  • 5. PRIDOBIVANJE PODATKOV
    • Čistost vseh kemikalij
    • Brez encimskih kontaminacij
    • Stabilnost encimov
    • Stabilnost pogojev (temperatura, pH)
    • Hitrost reakcije v stacionarnem stanju konstantna in sorazmerna koncentraciji encima
    • Meritev začetne hitrosti reakcije
  • 6. POTEK KATALIZIRANE REAKCIJE
  • 7. POTEK KATALIZIRANE REAKCIJE
  • 8. POTEK KATALIZIRANE REAKCIJE
  • 9. POTEK KATALIZIRANE REAKCIJE
  • 10. REAKCIJE Z ENIM SUBSTRATOM
    • E + S ES E + P
    • 1. obravnava (Henri 1902, Michaelis in Menten 1913) :
      • hitra vzpostavitev ravnotežja
    • 2. obravnava (Briggs in Haldane 1925) :
      • predpostavka stacionarnega stanja
    k 1 k -1 k 2
  • 11. REAKCIJE Z ENIM SUBSTRATOM
  • 12. LINEARIZACIJA PODATKOV
  • 13. DIREKTNI LINEARNI GRAF
  • 14. PORAZDELITEV NAPAK
  • 15. PORAZDELITEV NAPAK
  • 16. PORAZDELITEV NAPAK
  • 17. PARAMETRI
    • k cat katalitična konstanta, pretvorbeno število ( turnover number ) [s -1 ]
    • K m konstanta afinitete [  mol L -1 ]
    • k cat / K m konstanta specifičnosti [M -1 s -1 ]
  • 18. SPECIFIČNOST HEKSOKINAZ
  • 19. IREVERZIBILNA INHIBICIJA
    • Inhibitor permanentno deaktivira encim.
    E + I EI E’ k 1 k -1 k 2
  • 20. REVERZIBILNA INHIBICIJA
    • Kompetitivna inhibicija (competitive inhibition)
    • Nekompetitivna inhibicija (non-competitive inhibition)
    • Akompetitivna inhibicija (uncompetitive inhibition)
  • 21. KOMPETITIVNA INHIBICIJA
    • Inhibitor se veže izključno z E v EI.
  • 22. NEKOMPETITIVNA INHIBICIJA
    • Inhibitor se veže z E ali ES v EI oz. EIS.
  • 23. AKOMPETITIVNA INHIBICIJA
    • Inhibitor se veže izključno z ES v EIS.
  • 24. AKOMPETITIVNA INHIBICIJA
    • Inhibitor se veže izključno z ES v EIS.
  • 25.  
  • 26. INHIBICIJA S SUBSTRATOM
    • Neproduktivna vezava
    • Substratna inhibicija
    • Primer: 6-fosfofruktokinaza
  • 27. ENCIMSKA AKTIVACIJA
  • 28. VPLIV pH NA AKTIVNOST
    • Ena ionizirajoča skupina
    • Dve ionizirajoči skupini
    E + H + EH + Ka
  • 29. VPLIV pH NA AKTIVNOST
    • Ena ionizirajoča skupina
    • Dve ionizirajoči skupini
  • 30. VPLIV T NA AKTIVNOST
    • Pozitivna korelacija (Arrheniusova enačba)
    • Negativna korelacija (denaturacija)
    E E’ K
  • 31. VPLIV T NA AKTIVNOST
  • 32. REAKCIJE Z 2 SUBSTRATOMA
    • Encimska substitucija (ping-pong)
    • Trojni kompleks
      • nastane po urejeni poti
      • nastane po naključju
  • 33. REAKCIJE Z 2 SUBSTRATOMA
    • Encimska substitucija (ping-pong)
    • Trojni kompleks
      • nastane po urejeni poti
      • nastane po naključju
  • 34. REAKCIJE Z 2 SUBSTRATOMA
  • 35. REAKCIJE Z 2 SUBSTRATOMA
  • 36. REAKCIJE Z 2 SUBSTRATOMA
  • 37. MATEMATIČNA OBDELAVA
  • 38. MATEMATIČNA OBDELAVA
    • Trojni kompleks - primarni graf (koncentracijo substrata B držimo konstantno)
  • 39. MATEMATIČNA OBDELAVA
    • Trojni kompleks - sekundarni graf (koncentracijo substrata B držimo konstantno)
  • 40. MATEMATIČNA OBDELAVA
    • Ping-pong mehanizem - primarni graf (koncentracijo substrata B držimo konstantno)
  • 41. MATEMATIČNA OBDELAVA
    • Ping-pong mehanizem - sekundarni graf (koncentracijo substrata B držimo konstantno)
  • 42. PREGLED
  • 43. UREJENI ALI NAKLJUČNI TERCIARNI KOMPLEKS