Kinetika encimov
Upcoming SlideShare
Loading in...5
×
 

Kinetika encimov

on

  • 1,393 views

Kinetika encimov

Kinetika encimov

Statistics

Views

Total Views
1,393
Views on SlideShare
1,393
Embed Views
0

Actions

Likes
0
Downloads
4
Comments
0

0 Embeds 0

No embeds

Accessibility

Categories

Upload Details

Uploaded via as Microsoft PowerPoint

Usage Rights

© All Rights Reserved

Report content

Flagged as inappropriate Flag as inappropriate
Flag as inappropriate

Select your reason for flagging this presentation as inappropriate.

Cancel
  • Full Name Full Name Comment goes here.
    Are you sure you want to
    Your message goes here
    Processing…
Post Comment
Edit your comment

    Kinetika encimov Kinetika encimov Presentation Transcript

    • ENCIMSKA KINETIKA Matej Huš, november 2009
    • POMEN POZNAVANJA
      • nudi vpogled v mehanizem delovanja encima
      • nudi informacije o vlogi encima v celicah in odzivu na spremembe koncentracije metabolitov
      • pomaga razumeti, kako lahko encim kontroliramo
    • PRIDOBIVANJE PODATKOV
      • Iščemo hitrost tvorbe produkta ali izginevanja substrata .
      • Variiramo:
        • koncentracijo substrata
        • pH
        • temperaturo
        • koncentracijo ligandov
    • PRIDOBIVANJE PODATKOV
      • D-glukoza + ATP D-glukoza 6-fosfat + ADP
      • Diskontinuirna metoda
        • Vzorčenje, ustavitev reakcije, meritev koncentracije produkta (kromatografija)
      • Kontinuirna metoda
        • D-glukoza 6-fosfat + NADP + 6-fosfoglukonat + NADPH
        • Merjenje absorpcije NADPH pri 340 nm
        • Sklopljena reakcija ne sme biti počasna
    • PRIDOBIVANJE PODATKOV
      • Čistost vseh kemikalij
      • Brez encimskih kontaminacij
      • Stabilnost encimov
      • Stabilnost pogojev (temperatura, pH)
      • Hitrost reakcije v stacionarnem stanju konstantna in sorazmerna koncentraciji encima
      • Meritev začetne hitrosti reakcije
    • POTEK KATALIZIRANE REAKCIJE
    • POTEK KATALIZIRANE REAKCIJE
    • POTEK KATALIZIRANE REAKCIJE
    • POTEK KATALIZIRANE REAKCIJE
    • REAKCIJE Z ENIM SUBSTRATOM
      • E + S ES E + P
      • 1. obravnava (Henri 1902, Michaelis in Menten 1913) :
        • hitra vzpostavitev ravnotežja
      • 2. obravnava (Briggs in Haldane 1925) :
        • predpostavka stacionarnega stanja
      k 1 k -1 k 2
    • REAKCIJE Z ENIM SUBSTRATOM
    • LINEARIZACIJA PODATKOV
    • DIREKTNI LINEARNI GRAF
    • PORAZDELITEV NAPAK
    • PORAZDELITEV NAPAK
    • PORAZDELITEV NAPAK
    • PARAMETRI
      • k cat katalitična konstanta, pretvorbeno število ( turnover number ) [s -1 ]
      • K m konstanta afinitete [  mol L -1 ]
      • k cat / K m konstanta specifičnosti [M -1 s -1 ]
    • SPECIFIČNOST HEKSOKINAZ
    • IREVERZIBILNA INHIBICIJA
      • Inhibitor permanentno deaktivira encim.
      E + I EI E’ k 1 k -1 k 2
    • REVERZIBILNA INHIBICIJA
      • Kompetitivna inhibicija (competitive inhibition)
      • Nekompetitivna inhibicija (non-competitive inhibition)
      • Akompetitivna inhibicija (uncompetitive inhibition)
    • KOMPETITIVNA INHIBICIJA
      • Inhibitor se veže izključno z E v EI.
    • NEKOMPETITIVNA INHIBICIJA
      • Inhibitor se veže z E ali ES v EI oz. EIS.
    • AKOMPETITIVNA INHIBICIJA
      • Inhibitor se veže izključno z ES v EIS.
    • AKOMPETITIVNA INHIBICIJA
      • Inhibitor se veže izključno z ES v EIS.
    •  
    • INHIBICIJA S SUBSTRATOM
      • Neproduktivna vezava
      • Substratna inhibicija
      • Primer: 6-fosfofruktokinaza
    • ENCIMSKA AKTIVACIJA
    • VPLIV pH NA AKTIVNOST
      • Ena ionizirajoča skupina
      • Dve ionizirajoči skupini
      E + H + EH + Ka
    • VPLIV pH NA AKTIVNOST
      • Ena ionizirajoča skupina
      • Dve ionizirajoči skupini
    • VPLIV T NA AKTIVNOST
      • Pozitivna korelacija (Arrheniusova enačba)
      • Negativna korelacija (denaturacija)
      E E’ K
    • VPLIV T NA AKTIVNOST
    • REAKCIJE Z 2 SUBSTRATOMA
      • Encimska substitucija (ping-pong)
      • Trojni kompleks
        • nastane po urejeni poti
        • nastane po naključju
    • REAKCIJE Z 2 SUBSTRATOMA
      • Encimska substitucija (ping-pong)
      • Trojni kompleks
        • nastane po urejeni poti
        • nastane po naključju
    • REAKCIJE Z 2 SUBSTRATOMA
    • REAKCIJE Z 2 SUBSTRATOMA
    • REAKCIJE Z 2 SUBSTRATOMA
    • MATEMATIČNA OBDELAVA
    • MATEMATIČNA OBDELAVA
      • Trojni kompleks - primarni graf (koncentracijo substrata B držimo konstantno)
    • MATEMATIČNA OBDELAVA
      • Trojni kompleks - sekundarni graf (koncentracijo substrata B držimo konstantno)
    • MATEMATIČNA OBDELAVA
      • Ping-pong mehanizem - primarni graf (koncentracijo substrata B držimo konstantno)
    • MATEMATIČNA OBDELAVA
      • Ping-pong mehanizem - sekundarni graf (koncentracijo substrata B držimo konstantno)
    • PREGLED
    • UREJENI ALI NAKLJUČNI TERCIARNI KOMPLEKS