Praktikum 2 07

2,761 views

Published on

Published in: Technology, Travel
0 Comments
0 Likes
Statistics
Notes
  • Be the first to comment

  • Be the first to like this

No Downloads
Views
Total views
2,761
On SlideShare
0
From Embeds
0
Number of Embeds
45
Actions
Shares
0
Downloads
19
Comments
0
Likes
0
Embeds 0
No embeds

No notes for slide

Praktikum 2 07

  1. 1. Praktikum 2 Buněčný cyklus Mitóza
  2. 2. Referát Konfokální mikroskopie
  3. 3. Konfokální mikroskop
  4. 4. Test <ul><li>6 minut </li></ul><ul><li>Uveďte své jméno, kruh a verzi </li></ul><ul><li>Nepište nic do zadání! </li></ul><ul><li>1 i více správných odpovědí, v případě nejasností lze doplnit krátký komentář. </li></ul><ul><li>Poslední otázka je zaměřena na krátkou odpověď. </li></ul>
  5. 5. Skripta – str.13 – 3.3 Úkol 2: Změny koncentrace DNA během buněčného cyklu <ul><li>Graf dokumentuje početní distribuci buněk kostní dřeně ve vztahu ke koncentraci jaderné DNA. </li></ul><ul><li>Buňky byly obarveny fluorescenčním barvivem, které se váže na DNA, a s využitím průtokové cytometrie ( FACS ) rozděleny podle své koncentrace DNA. </li></ul>
  6. 6. Úkol 2: zadání <ul><li>Vysvětlete, proč se ve vzorku vyskytují buňky o různé koncentraci DNA. </li></ul><ul><li>Objasněte, proč není početní rozdělení buněk rovnoměrné a proč má křivka dva vrcholy. </li></ul><ul><li>Lze z grafu vyčíst relativní dobu trvání jednotlivých fází buněčného cyklu ? </li></ul>
  7. 7. Buněčný cyklus interfáze M
  8. 8. Buněčný cyklus interfáze G1 G2 S M
  9. 9. Buněčný cyklus syntéza DNA S G 2 G 1 M
  10. 10. G 0 - fáze
  11. 11. Kontrolní body buněčného cyklu
  12. 12. Skripta – str.13 – 3.3 Úkol 2 – zadání <ul><li>Vysvětlete, proč se ve vzorku vyskytují buňky o různé koncentraci DNA. </li></ul><ul><li>Objasněte, proč je početní rozdělení buněk nerovnoměrné a proč má křivka dva vrcholy. </li></ul><ul><li>Lze z grafu vyčíst relativní dobu trvání jednotlivých fází buněčného cyklu ? </li></ul>
  13. 13. Úkol 2 – řešení S 0 počet buněk Relativní koncentrace DNA na buňku 1x 2x G1 G2 + M x x
  14. 14. Úkol 2 - závěr <ul><li>Vycházíme z předpokladu, že kostní dřeň obsahuje buňky, které se nacházejí v různých fázích buněčného cyklu, nikoli však ve fázi G0. </li></ul><ul><li>Vrchol A – buňky v G1 fázi – mají poloviční koncentraci oproti buňkám v G2 a M fázi – vrchol B. </li></ul><ul><li>Oblast mezi dvěma vrcholy – buňky v S fázi (mají rozdílnou koncentraci DNA, proto nevytvářejí nápadný vrchol). </li></ul>S 0 počet buněk G1 G2 + M Relativní koncentrace DNA na buňku 1x 2x
  15. 15. Ukázky vyšetření „DNA-ploidie“
  16. 16. Aneuploidie u Barrettova jícnu Barrettův jícen - prekanceróza
  17. 17. Aneuploidie v Barrettově jícnu Aneuploidní buňky
  18. 18. Jiný výsledek – linie nádorových buněk Zvýšený podíl buněk v S-fázi svědčí o intenzivní proliferaci
  19. 19. Mitóza <ul><li>Jaderné dělení </li></ul><ul><ul><li>Profáze </li></ul></ul><ul><ul><li>(Prometafáze) </li></ul></ul><ul><ul><li>Metafáze </li></ul></ul><ul><ul><li>Anafáze </li></ul></ul><ul><ul><li>Telofáze </li></ul></ul><ul><li>Buněčné dělení </li></ul><ul><ul><li>cytokineze </li></ul></ul>
  20. 20. Str. 14 – 3.5 Úkol 3: Pozorování fází mitózy v buňkách kořínků cibule <ul><li>Preparáty byly připraveny z vrcholů kořínků cibule kuchyňské ( Allium cepa ). </li></ul><ul><li>Kořínky byly po fixaci ve směsi ethanol – kyselina octová (3 : 1) přeneseny na krátkou dobu do roztoku kyseliny chlorovodíkové o koncentraci 1 mol.dm -3 (ohřátého na 60ºC) a pak na 30 – 90 minut do Schiffova reagens (roztok fuchsinu odbarvený oxidem siřičitým). </li></ul><ul><li>Struktury obsahující DNA se vyloučeným fuchsinem zbarvily fialově. </li></ul>
  21. 21. Princip Feulgenovy nukleární reakce. <ul><li>Kyselou hydrolýzou DNA dochází k odštěpení bází </li></ul><ul><li>Volné aldehydické skupiny deoxyribózy oxidují redukovaný fuchsin na původní fialovou formu. </li></ul>
  22. 22. Pozorování fází mitózy v buňkách kořínků cibule <ul><li>Prohlédněte pod mikroskopem roztlakový preparát kořínků cibule barvený Feulgenovou reakcí a najděte v něm dělící se buňky. </li></ul><ul><li>K vyhledání buněk použijte objektiv o zvětšení 5-10x, k pozorování mitózy je nevhodnější objektiv 40x – 45x. Najděte a podle předložených fotografií určete jednotlivé fáze mitózy. </li></ul>
  23. 23. Mitóza v koříncích cibule
  24. 24. Pozorování fází mitózy v buňkách kořínků cibule <ul><li>Spočítejte cca 20-30 dělících se buněk a stanovte tzv. mitotický diferenciál , tj. zastoupení buněk v jednotlivých fázích mitózy (tj. v profázi, metafázi, anafázi a telofázi). Podíly buněk v jednotlivých fázích zapište do tabulky. </li></ul><ul><li>Po vyplnění tabulky srovnejte údaje a zjistěte, zda jsou počty buněk v jednotlivých fázích přibližně stejné anebo buňky v určité fázi popř. fázích převažují. Vysvětlete své výsledky. </li></ul>
  25. 25. Mitotický diferenciál 12 4 6 3 Telofáze Anafáze Metafáze Profáze Celkový počet Průběžný počet Fáze mitózy
  26. 26. Str. 11 – 2.7 Úkol 4: Pozorování metafázních chromozomů z buněk kostní dřeně myši <ul><li>Pro získání preparátů byly čerstvě usmrceným myším odpreparovány femury a z nich výplachem získána kostní dřeň. Ta byla přenesena do hypotonického roztoku a dále zpracována stejně jako buňky periferní krve (viz předchozí praktika). </li></ul><ul><li>Skla s chromozomy byla obarvena roztokem Giemsa-Romanowski. </li></ul>
  27. 27. Pozorování chromozomů z buněk kostní dřeně myši <ul><li>Pozorujte chromozomy kostní dřeně myši na trvalém preparátu. K vyhledání buněk použijte objektiv o zvětšení 5-10x, k pozorování chromozomů nejlépe objektiv 40 – 45x. </li></ul><ul><li>Obraz v mikroskopu srovnejte s přiloženou fotografií (zobrazuje chromozomy při zvětšení cca 1000x). </li></ul><ul><li>Spočítejte, kolik chromozomů obsahuje somatická buňka myši. Použijte fotografii nebo spočtěte chromozomy přímo v zorném poli mikroskopu. </li></ul><ul><li>Určete, který typ (popř. které typy) chromozomů je přítomen (popř. jsou přítomny) v buňkách myši </li></ul>
  28. 28. Myší chromozomy
  29. 29. Výsledky úkolů
  30. 30. Úkol 3 - mitóza <ul><li>Mitotický diferenciál </li></ul><ul><ul><li>Buňky v různých fázích mitózy mají rozdílné zastoupení. </li></ul></ul><ul><ul><li>Nejvíce buněk lze nalézt v profázi – tato fáze trvá nejdéle. </li></ul></ul>
  31. 31. Mitóza u nádorových buněk Porucha regulace buněčného cyklu vede ke vzniku nádorových buněk. Ty se zpravidla vyznačují vysokou mitotickou aktivitou, která může mít za následek poruchy rozchodu (nondisjunkce) chromozomů.
  32. 32. Chromozomy myši telocentrické chromozomy
  33. 33. Myší chromozomy 10 10 11 9 celkem 40 chromozomů
  34. 34. Karyotyp myši - samice
  35. 35. Význam studia myších chromozomů – testování mutagenity (genotoxicity)
  36. 36. Laboratorním myším byla aplikována látka s předpokládanými mutagenními účinky. Na každém obrázku jsou chromozomy z jedné myší somatické buňky. Zjistěte a popište chromozomové aberace, které lze na nich pozorovat. tetraploidie zlom
  37. 37. Příští praktika <ul><li>Praktická cvičení – kapitola 4: Meióza, gametogeneze – str. 16 – 19 </li></ul><ul><li>Klinická cytogenetika I. – kapitola 6 – str. 38 – 43 </li></ul><ul><li>Referát: Etické otázky asistované reprodukce </li></ul><ul><li>Test – mikroskopy, buněčný cyklus, mitóza, základní poznatky o struktuře DNA a její replikaci </li></ul>
  38. 38. Na shledanou!
  39. 39. Fluorescence Activated Cell Sorter <ul><li>přístroj, jenž měří koncentraci DNA v každé buňce podle intenzity fluorescence – tzv. průtoková cytometrie </li></ul><ul><li>Tento postup se mimo jiné používá také k měření koncentrace DNA v buňkách pacientů s hematologickými malignitami, popř. s nádory prsu, močového měchýře a střeva. </li></ul>zpět k úkolu 1
  40. 40. Profáze zpět
  41. 41. Metafáze zpět
  42. 42. Anafáze zpět
  43. 43. Telofáze zpět
  44. 44. Cytokineze zpět

×