PROSTATE CANCER AND BIOMARKERS
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    PROSTATE CANCER AND BIOMARKERS PROSTATE CANCER AND BIOMARKERS Presentation Transcript

    • Cancer genetics-guided discovery of serum biomarkersignatures for diagnosis and prognosis ofprostate cancer
      Igor Cima et all
      MelissaYepesHernandez
      Mateo Zuluaga Gómez
      Molecular Biology
      Medicine School
      UPB 2011
    • INTRODUCTION
    • INTRODUCTION
      CANCER
      • Itistheuncontrolledgrowth of abnormalcells in thebody
      • Causes
      • Cancer is a disease of abnormal gene function
      http://www.elconfidencial.com/
    • INTRODUCTION
      TUMOR SUPPRESSOR GENES
    • INTRODUCTION
      BIOMARKER
      • It is a substance introduced into an organism as a means to examine organ function or other aspects of health (Medicine)
      • It is a DNA sequence that causes disease or is associated with susceptibility to disease (Genetic)
    • INTRODUCTION
      PROSTATE CANCER
      • The prostate is a gland located in front of the rectum and underneath the urinary bladder.
      • It is found only in men
      • It produces the fluid that protects sperm cells in semen
      http://www.techjackal.net/
    • INTRODUCTION
      PROSTATE CANCER
      • Adenocarcinoma cancer that starts in gland cells
      • Sarcomas
      • Small cell carcinomas
      • Transitional cell carcinomas
      • Prostatic intraepithelial neoplasia (PIN)
      www.noticiassalud.com
    • INTRODUCTION
      PROSTATE CANCER
      • Prostatic intraepithelial neoplasia (PIN)
      It appears at 20 years old like a pre-cancerous condition and then at 50 years old become in an active cancer
      Prostate Adenocarcinoma
    • INTRODUCTION
      STAGES
      Inside the prostate without overgrowth
      The cancer has diffused all over the prostate
      Neighboring tissues
      Metastasis
      STAGE 1
      STAGE 2
      STAGE 3
      STAGE 4
    • INTRODUCTION
      DIAGNOSIS
      • Prostate-specific antigen (PSA) blood test
      Substance made by cells in the prostate gland
      Level 4 ng/ml
      • Digital rectal exam (DRE)
      Bumps or hard areas on the prostate that might be cancer
    • INTRODUCTION
      •  Transrectal ultrasound (TRUS)
      It uses sound waves to make an image of the prostate on a video screen.
      • Acid phosphatase
       It is produced by glandular epithelial cells
      • Prostate biopsy
    • INTRODUCTION
      FORECAST
      • Disease stage
      • The life expectancy
      • EZH2 gene expression
      • Age
      http://www.lavozdelsandinismo.com
    • INTRODUCTION
      FORECAST
      • PSA
      • p53 mutation
      • Black race
      • OncogenesAND
      proto-oncogenes
      http://redconcienciaplanetaria.blogspot.com
    • GENERAL OBJECTIVE
      Identify Cancer genetics-guided of serum biomarker signatures for diagnosis and prognosis of prostate cancer
    • MATERIALES Y MÉTODOS
    • MATERIALES Y MÉTODOS
      • Cepa utilizada 129/BALB/c
      • Los ratones fueron anestesiados
      • Extracción de sangre y almacenamiento a -80°C
      • Tejido prostático congelado y pulverizado para posterior tinción
      RATONES
    • MATERIALES Y MÉTODOS
      • Fueron oxidadas con peryodato de sodio y se conjugó con resina
      • Se agrega tripsina para digerir las glicoproteínas en estado solido
      • Este sirve para cuantificar la PSA
      GLICOPROTEINAS
      profeblog.es
    • MATERIALES Y MÉTODOS
      • Análisis de muestras en un espectrómetro de masas para medir concentraciones
      • Separación cromatografía de los péptidos se realizó en un Agilent 1100 micro sistema HPL
      ESPECTOMETRIA DE MASA
    • MATERIALES Y MÉTODOS
      • Gen prostático con radio mayor a 10 se considera específico para pCA
       
      CUANTIFICACIÓN DEL PÉPTIDO
    • MATERIALES Y MÉTODOS
      • Separación de proteínas celulares por electroforesis en gel según su tamaño (SDS)
      • Transferencia de proteínas a un filtro que se incuban con anticuerpos que reaccionan con la proteína estudiada
      SDS/PAGE y Western Blot
    • MATERIALES Y MÉTODOS
      Inmunofluorescencia/Fluoroinmunoensayo
      • Determinación de proteínas, drogas y hormonas
      • Unión del anticuerpo a molécula de fluorocromo
      • Emiten luz a una longitud de onda mayor de 400 a 700nm.
    • MATERIALES Y MÉTODOS
      Inmunofluorescencia/Fluoroinmunoensayo
      Flurocromos comunes:
      • Isotiocianato de Fluiresceína
      • Rodamina
      didatconsulting.com
    • MATERIALES Y MÉTODOS
      • Desnaturalización del DNA para dar hebras sencillas
      • Hibridar hebra sencilla con un oligonucleótido (Primer)
      • Replicación de la hebra sencilla por DNA polimerasa a partir del oligonucleótido
      PCR
    • MATERIALES Y MÉTODOS
      Pacientes
      • Criterios de inclusión: Pacientes con Pca y BPH(Hiperplasia Prostática Benigna)
      • Criterios de exclusión: Pacientes con Pca avanzado
      mundo.in.rs
    • MATERIALES Y MÉTODOS
      Pacientes
      • Extracción de 8 ml de sangre en tubos coagulantes
      • Inversión 8 veces, centrifugación 4 h después de recogida a 4°C por 10 min
    • MATERIALES Y MÉTODOS
      Pacientes
      • División del suero en 5 partes y almacenamiento a -60°C
      • Extracción de glicoproteína
    • MATERIALES Y MÉTODOS
      • Identificación de un tejido (in situ) por medio de una interacción entre antígeno-anticuerpo, el cual ya ha sido marcado.
      • Por medio de la tinción de la célula se demuestra la presencia y la localización celular de una molécula interés.
      Inmunohistoquimica
    • MATERIALES Y MÉTODOS
      • Identificación de un anticuerpo o antigeno utilizando un antígeno o un anticuerpo absorbido a una superficie solida
      • La reacción Ag-Ac se usa un conjugado anti gamaglobulina humana unido a una enzima
      ELISA
    • MATERIALES Y MÉTODOS
      • La enzima actúa sobre un sustrato coloreando la solución
      • Intensidad de color Cantidad de Ag o Ac
      • Medición de marcadores de la investigación
      ELISA
    • RESULTADOS
    • RESULTADOS
      GLICOPROTEINAS
      Biomarcadores específicos para el cáncer de próstata a través de glicoproteínas
      • Glicoproteínas del tejido prostático
      • Glicoproteínas del suero
    • RESULTADOS
      Inmunotransferencia e Inmunoflorescencia
      • Se determinó que el PTEN tiene un papel importante en la diferenciación y homeostasis de las células madre
      • Al no estar presente no hay quien suprima el tumor
    • RESULTADOS
      Inmunotransferencia e Inmunoflorescencia
      • En ausencia del gen en estudio, las glicoproteínas que generalmente están dentro de la membrana celular de las células prostáticas, se liberan y migran al suero sirviendo como biomarcadores
    • RESULTADOS
      PACIENTES
      • Pacientes 143
      • En un grupo de 70 pacientes se confirma el Pca localizado histológicamente
      • Grupo control BPH
      • Se evalúa el PTEN en FISH
    • RESULTADOS
      ELISA y Cuantificación del Péptido
      • Por medio de estas dos pruebas se buscaba medir la cantidad de proteínas en plasma que estuvieran en relación con el Pca.
      • La concentración media de varias proteínas se midió en el rango de concentración de antígeno prostático específico (PSA)
    • RESULTADOS
      • Los resultados sugieren que la reducción del número de copias del gen PTEN en la próstatael cáncer llevó a una perturbación de proteínas de suero.
      • La pérdida de PTEN está causalmente asociada con el aceleramiento de Pca y la agresividad
    • RESULTADOS
      • Se encontraron 5 proteínas que pueden ser biomarcadores para pacientes:
      • GalNActransferasa 4 (GALNTL4)
      • Fibronectina (FN)
      • Zinc-α-2-glycoproteina(AZGP1)
      • Biglycan (BGN)
      • Proteina de matriz extracelular 1(ECM1)
    • RESULTADOS
      PCR
      • PCR y recuento de leucocitos para evitar variables de confusión
    • Figure 2.c
    • DISCUSSION
    • DISCUSSION
    • DISCUSSION
    • CONCLUSION
      • This study has a great Importance as an academic Exercise, because we used databases, literature in the area of medicine and learn about some Pathologies
      • Molecular biology opens new areas to medical research because of the contributions that develop an approach to the cell as a foundation for life
    • CONCLUSION
      • Logical approaches for diagnosis and treatment require the natural history and biological behavior of the ways in which the disease occurs
      • These studies can make a prognosis in an earlier stage of the disease, reducing the aggressiveness of the disease
    • MAPAS CONCEPTUALES
    • Mateo Zuluaga G
    • MelissaYepes H
    • BIBLIOGRAPHY
      MARTINEZ S, Lina María. Biología molecular. 3 ed. Medellín: UPB. Fac. de Medicina
      AMERICAN CANCER SOCIETY
      http://www.cancer.org/Cancer/ProstateCancer/DetailedGuide/prostate-cancer-new-research
      MEDLINEPLUS http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/001289.htm
      SEMINARIO
      http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21300890
    • GRACIAS