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   FUNDAMENTO
    › La agregometria plaquetaria es una técnica
     utilizada para estimar la cinética de la
     agregación de la plaquetas por medio de
     turbidometria (medición de la turbidez o
     densidad óptica).

    › Es el patrón de referencia para el estudio de
     la función plaquetaria.
   METODO OPTICO CON PLASMA RICO EN
    PLAQUETAS.

   METODO DE IMPEDANCIA CON SANGRE
    COMPLETA.
   ESTA PRUEBA MIDE EN TIEMPO REAL LA
    AGREGACION DE LAS PLAQUETAS EN
    UNA MUESTRA DE PLASMA RICO EN
    PLAQUETAS MEDIANTE ACLARAMIENTO
    OPTICO. PARA SU REALIZACION SE
    REQUIERE UN AGREGOMETRO
    (ESPECTROFOTOMETRO).
 SE      REALIZA   SEPANRANDO     LOS
  ERITROCITOS Y LEUCOCITOS D E EL
  PLASMA Y LAS PLAQUETAS EN UNA
  MUESTRA    DE   SANGRE    COMPLETA,
  MEDIANTE    CENTRIFUGACION     LENTA
  (1000 RPM) DURANTE 15 MINUTOS.
 TAMBIEN SE REQUIERE LA PREPARACION
  DE UNA MUESTRA DE PLASMA POBRE EN
  PLAQUETAS, QUE SE OBTINE POR
  CENTRIFUGACION RAPIDA (3000 RPM).
   ESTA MUESTRA DE DEPOSITA EN UNA
    CUBETA DE INCUBACIONA 37 GRADOS
    CENTRIGRADOS, QUE SE ENCUENTRA
    ENTRE UNA FUENTE DE LUZ Y UNA
    FOTOCELDA      DE MEDICION  QUE
    CALCULA LA DENSIDAD OPTICA O
    TURBIDEZ DEL PRP.
   LA CALIBRACION DE LA TRANSMISION
    DE LA LUZ A TRAVES DE EL PLASMA
    POBRE EN PLAQUETAS O CLARO, SE
    AJUSTA AL 100%; LA TRANSMISION DE LUZ
    A TRAVES DE PLASMA RICO EN
    PLAQUETAS O9 TURBIO ENTONCES SE
    AJUSTA AL 0%.
   DESPUES SE AGREGA UNA DE VARIAS
    SUSTANCIAS   CONOCIDAS     POR   SU
    EFECTO     AGONISTA    SOBRE    LAS
    PLAQUETAS, CON LÑA FINALIDAD DE
    INDUCIR    AGREGACION      DE   LAS
    PLAQUETAS Y SIMULAR IN VITRO LO QUE
    SUCEDE IN VIVO.
 EPINEFRINA
 ADP
 COLAGENA
 ACIDO ARAQUIDONICO
 TROMBINA
 RISTOCETINA (antibiótico que estimula la
  agregación por aumento de la unión de
  FvW a GP Ib)
EN EL TRASCURSO DE ESTE PROCESO LA
LUZ PASA A TRAVES D ELA CUBETA CON
EL PRP Y SE CAPTURA POR EL DETECTOR
O FOTOCELDA EN EL LADO OPUESTO.
CONFORME      LAS    PLAQUETAS    SE
AGREGAN       EN    RESPUESTA    AL
AGONISTA, EL PRP SE ACLARA Y SE
TRANSMITE MAYOR CANTIDAD DE LUZ.
LA TRANSMISION DE LA LUZ SE MIDE EN
TIEMPO REAL Y SE GRAFICA EL
PORCENTAJE DEL ALCARAMIENTO DE LA
MUESTRA.
   LA TRANSMISION DE LA LUZ ES
    DIRECTAMENTE PROPORCIONAL A LA
    AGREGACION PLAQUETARIA.

   ES DECIR, A MAYOR
    AGREGACIONPLAQUETARIA, MAYOR
    TRANSMISION DE LA LUZ Y VICECERSA.
Esquema de la agregación plaquetaria
en plasma rico en plaquetas
 SU GRAFICACION GENERA UNA CURVA DE LA
  AGREGACION PLAQUETARIA EN PORCENTAJE Y
  TIEMPO. SE DEBE ESTUDIAR UN AGONISTA A LA
  VEZ.
 LA   CURVA TIPICA DE LA AGREGACION
  PLAQUETARIA TIENE CINCO FASES DISTINTAS CON
  DOS CURVAS.
1.   INCREMENTO INICIAL DE LA TRANSMISION DE LA LUZ ATRIBUIBLE A
     DILUCION DEL PRP POR EL AGONISTA QUE AÑADE
2.   DISCRETA DISMINUCION DE LA TRANSMISION CONFORME LAS
     PLAQUETAS CAMBIAN FORMA
3.   INGREMENTO AGUDO INICIAL DE LA TRANSMISION CONFORME
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4.   MESETA BREVE O DISMINUCION DE LA AGREGACION
5.   AGREGACION SECUNDARIA QUE SE ESTIMULA POR LA
     SECRECION DE LOS GRANULOS PLAQUETARIOS
   EN LA MAYORIA DE LOS INDIVIDUOS ESTA
    RESPUESTA BIFASICA SE OBSERVA CON
    CONCENTRACIONES      BAJAS  DE   ADP  Y
    EPINEFRINA. LAS CURVAS QUE SE GENERAN
    CON     OTROS   AGONISTAS    (COLAGENA,
    RISTOCETINA) SON TIPICAMNETE UNIMODALES
    CON UNA SOLA CURVA.
 CONSUME TIEMPO
 LABORIOSO Y COMPLEJO
 SE REQUIERE EQUIPO HUMANO BIEN
  ADIESTRADO Y CON EXPERIENCIA EN LA
  TECNICA
 MUESTRA DEBE OBTENERSE POR PUNCION
  VENOSA DIRECTA
 COLECTAR       EN      TUBOS     CON
  ANTICOAGULANTE CITRATO ( PARA
  TIEMPOS DE COAGULACION)
 REALIZAR EN LAS TRES HORAS SIGUIENTES
  A LA RECOLECCIONDE LA MUESTRA
 NO      REALIZAR      EN     MUESTRAS
  HEMOLIZADAS         LIPEMICAS       O
  CONTAMINADAS POR ERITROCITOS.
   EN ESTE METODO SE COLOCA LA
    MUESTRAS DE SANGRE EN UNA CUBETA O
    RECIPIENTE A 37 GRADOS CENTIGRADOS,
    SE COLOCAN DOS ELECTRODOS DE
    PLATINO A DISTANCIA FIJA Y ENTRE LOS
    ELECTRODOS SE APLICA UNA CORRIENTE
    ELECTRICA.
 LA ADICION DE UN AGONISTA ESTIMULA
  LA AGREGACION DE LAS PLAQUETAS EN
  LA SUPERFICIE DE LOS ELECTRODOS LO
  QUE IMPIDE EL FLUJO DE LA CORRIENTE
  ELECTRICA.
 EL AUMENTO EN LA RESISTENCIA AL
  FLUJO DE LECTRICIDAD ES
  PROPORCIONAL A LA AGREGACION .
 ESTE METODO ELIMINA VARIAS DE LAS
  VARIBALES CONFUSAS EN LA
  PREPARACION DEL PRP, YA QUE NO SE
  REQUIERE, ADEMAS DE SER MAS SIMPLE Y
  FACIL DE REALIZAR.
EPINEFRINA              RISTOCETINA             COLAGENA

100                      100%                  100%



50%                      50%                   50%




0%                       0%                     0%


      AC. ARAQUIDONICO            EPINEFRINA          SEROTONINA
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0%
 EN LA PRACTICA CLINICA LA UTILIDAD DE
  ESTOS ESTUDIOS ES MUY AMPLIA; SIN
  EMBARGO LOS RESULTAOS NO SON
  ESPECIFICOS DE ALGUN TRASNTORNO EN
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 ESTA PRUEBA NO SE DEBE UTILIZAR COMO
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Agregometría plaquetaria: método para evaluar la agregación plaquetaria

  • 1.
  • 2. FUNDAMENTO › La agregometria plaquetaria es una técnica utilizada para estimar la cinética de la agregación de la plaquetas por medio de turbidometria (medición de la turbidez o densidad óptica). › Es el patrón de referencia para el estudio de la función plaquetaria.
  • 3. METODO OPTICO CON PLASMA RICO EN PLAQUETAS.  METODO DE IMPEDANCIA CON SANGRE COMPLETA.
  • 4. ESTA PRUEBA MIDE EN TIEMPO REAL LA AGREGACION DE LAS PLAQUETAS EN UNA MUESTRA DE PLASMA RICO EN PLAQUETAS MEDIANTE ACLARAMIENTO OPTICO. PARA SU REALIZACION SE REQUIERE UN AGREGOMETRO (ESPECTROFOTOMETRO).
  • 5.
  • 6.  SE REALIZA SEPANRANDO LOS ERITROCITOS Y LEUCOCITOS D E EL PLASMA Y LAS PLAQUETAS EN UNA MUESTRA DE SANGRE COMPLETA, MEDIANTE CENTRIFUGACION LENTA (1000 RPM) DURANTE 15 MINUTOS.  TAMBIEN SE REQUIERE LA PREPARACION DE UNA MUESTRA DE PLASMA POBRE EN PLAQUETAS, QUE SE OBTINE POR CENTRIFUGACION RAPIDA (3000 RPM).
  • 7. ESTA MUESTRA DE DEPOSITA EN UNA CUBETA DE INCUBACIONA 37 GRADOS CENTRIGRADOS, QUE SE ENCUENTRA ENTRE UNA FUENTE DE LUZ Y UNA FOTOCELDA DE MEDICION QUE CALCULA LA DENSIDAD OPTICA O TURBIDEZ DEL PRP.
  • 8. LA CALIBRACION DE LA TRANSMISION DE LA LUZ A TRAVES DE EL PLASMA POBRE EN PLAQUETAS O CLARO, SE AJUSTA AL 100%; LA TRANSMISION DE LUZ A TRAVES DE PLASMA RICO EN PLAQUETAS O9 TURBIO ENTONCES SE AJUSTA AL 0%.
  • 9. DESPUES SE AGREGA UNA DE VARIAS SUSTANCIAS CONOCIDAS POR SU EFECTO AGONISTA SOBRE LAS PLAQUETAS, CON LÑA FINALIDAD DE INDUCIR AGREGACION DE LAS PLAQUETAS Y SIMULAR IN VITRO LO QUE SUCEDE IN VIVO.
  • 10.  EPINEFRINA  ADP  COLAGENA  ACIDO ARAQUIDONICO  TROMBINA  RISTOCETINA (antibiótico que estimula la agregación por aumento de la unión de FvW a GP Ib)
  • 11. EN EL TRASCURSO DE ESTE PROCESO LA LUZ PASA A TRAVES D ELA CUBETA CON EL PRP Y SE CAPTURA POR EL DETECTOR O FOTOCELDA EN EL LADO OPUESTO. CONFORME LAS PLAQUETAS SE AGREGAN EN RESPUESTA AL AGONISTA, EL PRP SE ACLARA Y SE TRANSMITE MAYOR CANTIDAD DE LUZ. LA TRANSMISION DE LA LUZ SE MIDE EN TIEMPO REAL Y SE GRAFICA EL PORCENTAJE DEL ALCARAMIENTO DE LA MUESTRA.
  • 12. LA TRANSMISION DE LA LUZ ES DIRECTAMENTE PROPORCIONAL A LA AGREGACION PLAQUETARIA.  ES DECIR, A MAYOR AGREGACIONPLAQUETARIA, MAYOR TRANSMISION DE LA LUZ Y VICECERSA.
  • 13. Esquema de la agregación plaquetaria en plasma rico en plaquetas
  • 14.  SU GRAFICACION GENERA UNA CURVA DE LA AGREGACION PLAQUETARIA EN PORCENTAJE Y TIEMPO. SE DEBE ESTUDIAR UN AGONISTA A LA VEZ.  LA CURVA TIPICA DE LA AGREGACION PLAQUETARIA TIENE CINCO FASES DISTINTAS CON DOS CURVAS.
  • 15. 1. INCREMENTO INICIAL DE LA TRANSMISION DE LA LUZ ATRIBUIBLE A DILUCION DEL PRP POR EL AGONISTA QUE AÑADE 2. DISCRETA DISMINUCION DE LA TRANSMISION CONFORME LAS PLAQUETAS CAMBIAN FORMA 3. INGREMENTO AGUDO INICIAL DE LA TRANSMISION CONFORME LAS PLAQUETAS SE AGREGAN(AGREGACION PRIMARIA) 4. MESETA BREVE O DISMINUCION DE LA AGREGACION 5. AGREGACION SECUNDARIA QUE SE ESTIMULA POR LA SECRECION DE LOS GRANULOS PLAQUETARIOS
  • 16. EN LA MAYORIA DE LOS INDIVIDUOS ESTA RESPUESTA BIFASICA SE OBSERVA CON CONCENTRACIONES BAJAS DE ADP Y EPINEFRINA. LAS CURVAS QUE SE GENERAN CON OTROS AGONISTAS (COLAGENA, RISTOCETINA) SON TIPICAMNETE UNIMODALES CON UNA SOLA CURVA.
  • 17.  CONSUME TIEMPO  LABORIOSO Y COMPLEJO  SE REQUIERE EQUIPO HUMANO BIEN ADIESTRADO Y CON EXPERIENCIA EN LA TECNICA
  • 18.  MUESTRA DEBE OBTENERSE POR PUNCION VENOSA DIRECTA  COLECTAR EN TUBOS CON ANTICOAGULANTE CITRATO ( PARA TIEMPOS DE COAGULACION)  REALIZAR EN LAS TRES HORAS SIGUIENTES A LA RECOLECCIONDE LA MUESTRA  NO REALIZAR EN MUESTRAS HEMOLIZADAS LIPEMICAS O CONTAMINADAS POR ERITROCITOS.
  • 19. EN ESTE METODO SE COLOCA LA MUESTRAS DE SANGRE EN UNA CUBETA O RECIPIENTE A 37 GRADOS CENTIGRADOS, SE COLOCAN DOS ELECTRODOS DE PLATINO A DISTANCIA FIJA Y ENTRE LOS ELECTRODOS SE APLICA UNA CORRIENTE ELECTRICA.
  • 20.  LA ADICION DE UN AGONISTA ESTIMULA LA AGREGACION DE LAS PLAQUETAS EN LA SUPERFICIE DE LOS ELECTRODOS LO QUE IMPIDE EL FLUJO DE LA CORRIENTE ELECTRICA.  EL AUMENTO EN LA RESISTENCIA AL FLUJO DE LECTRICIDAD ES PROPORCIONAL A LA AGREGACION .  ESTE METODO ELIMINA VARIAS DE LAS VARIBALES CONFUSAS EN LA PREPARACION DEL PRP, YA QUE NO SE REQUIERE, ADEMAS DE SER MAS SIMPLE Y FACIL DE REALIZAR.
  • 21. EPINEFRINA RISTOCETINA COLAGENA 100 100% 100% 50% 50% 50% 0% 0% 0% AC. ARAQUIDONICO EPINEFRINA SEROTONINA 100 100% 100% 50% 50% 50% 0% 0% 0%
  • 22.  EN LA PRACTICA CLINICA LA UTILIDAD DE ESTOS ESTUDIOS ES MUY AMPLIA; SIN EMBARGO LOS RESULTAOS NO SON ESPECIFICOS DE ALGUN TRASNTORNO EN PARTICULAR.  ESTA PRUEBA NO SE DEBE UTILIZAR COMO ESTUDIO GENERAL, SOLO EN CASOS DE SITUACION DE SOSPEHCA DE UNA SITUACION ESPECIFICA.