El documento describe las técnicas histológicas para obtener cortes de tejido animal para su observación con microscopio óptico. Explica los pasos que incluyen la toma del material, fijación, deshidratación, inclusión, corte, coloración y montaje, detallando los procedimientos de cada etapa para preservar adecuadamente la muestra y obtener cortes de calidad para su análisis microscópico.
1. 1
TÉCNICAS HISTOLÓGICAS
Obtención de corte de tejido
animal para la observación con
microscopio óptico
2. corte histológico Liliana Castañeda
Cátedra de Biología II -FIUNER
2
Pasos
• Toma de material
• Fijación
• Deshidratación
• Inclusión
• Corte
• Coloración
• Montaje
3. corte histológico Liliana Castañeda
Cátedra de Biología II -FIUNER
3
Toma de material
• Animal vivo anestesiado
• Necropsia
– ¿Cómo?
• Corte con bisturí
• Tamaño<1 cm3
– ¿Cuándo?
• Tiempo crítico según tejido
4. corte histológico Liliana Castañeda
Cátedra de Biología II -FIUNER
4
Fijación
• Detener los procesos vitales celulares
• Conservar exactamente todas las partes
constitutivas.
• No hacer aparecer artificialmente otros
detalles en la estructura.
5. corte histológico Liliana Castañeda
Cátedra de Biología II -FIUNER
5
Deshidratación
• Eliminación del agua intra y extracelular
– Deshidratación propiamente dicha con
soluciones alcohólicas de concentración
creciente
– Aclaramiento con solventes de la parafina
6. corte histológico Liliana Castañeda
Cátedra de Biología II -FIUNER
6
Inclusión
• La inclusión consiste en encerrar cada
pieza dentro de un bloque de parafina
pura.
–Distintos tipos de moldes para obtener los tacos
7. corte histológico Liliana Castañeda
Cátedra de Biología II -FIUNER
7
Corte
• Modelado del bloque:
– exposición de superficie de corte
• Sección con el micrótomo
– Corte: regulado de espesor
– Extendido
– Pegado
8. corte histológico Liliana Castañeda
Cátedra de Biología II -FIUNER
8
Coloración
• Desparafinación
• Coloración:
– de rutina
– especiales
9. corte histológico Liliana Castañeda
Cátedra de Biología II -FIUNER
9
Montaje
• Lavado en agua destilada
• Deshidratación o Secado en estufa a 37°C
• Aclaramiento
• Montaje
10. corte histológico Liliana Castañeda
Cátedra de Biología II -FIUNER
10
Importante
• Respetar:
– Secuencias
– Tiempos
– Concentraciones
– Temperaturas
Para obtener un
buen resultado!
Piel-H&E-400x