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Sindrome QT largo

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  • 1. Síndrome del QT prolongado Manuel Gonzalez Luisa Rodriguez Viviana Mojica
  • 2. •Enfermedad familiar caracterizada por una prolongaciòn anormal de la repolarización ventricular. •Alto riesgo de Taquiarritmias ventriculares. •Con base en el patron de transmisiòn se conocen dos síndromes clínicos : ‫ ئ‬Más común: Autosómico Dominante con un fenotipo cardiaco puro (Romano-Ward3) ‫ ئ‬Menos común: Autosómico Recesivo, donde coexisten anormalidades cardiacas y Sordera. (Jervell and Lange- Nielsen4).
  • 3. ‫ ئ‬SCN5A: Codifica un canal de sodio cardiaco (cromosoma 3). ‫ئ‬HERG: Codifica una proteína del canal de K (Ikr). (cromosoma 7). ‫ ئ‬KvLQT1: Codifica la subunidad α de IKs (cromosoma 11). ‫ ئ‬KCNE1:Codifica a minK, una subunidad auxiliar de Iks (cromosoma 21). ‫ئ‬El gen ANKB del cromosoma 4 (LQT 4).
  • 4. Tipos de LQTS Tipo Cromosoma – Locus Gen Proteina Mecanismo alterado LQT1 11 – 11p15.5 KCNQ1 (KVLQT1) Sub α canal K Repolarización LQT2 7 – 7q35-q36 KCNH2 (HERG) Sub α canal K Repolarización LQT3 3 – 3p21-p23 SCN5A Sub α canal Na Repolarización LQT4 4 – 4q25-q27 ANKB Proteina adapatadora Anclaje de los trasportadores de iones LQT5 21 – 21q22.1-p22 KCNE1 Sub β canal K Repolarización LQT6 21 – 21q22.1-p22 KCNE2 Sub β canal K Repolarización BIOLOGICAL RESEARCH FOR NURSING Vol. 5, No. 2, October 2003
  • 5. Frecuencia de presentación
  • 6. Compendium of cardiac channel mutations in 541 consecutive unrelated patients referred for long QT syndrome genetic testing David J. Tester, Melissa L. Will, Carla M. Haglund, Michael J. Ackerman. Heart Rhythm 2005;2:507-517
  • 7. Resultados 541 Pacientes 272 Genotipo (+) 269 Genotipo (-) 243 Una sola mutación 29 Multiples 120 LQT1 93 LQT2 88 KCNQ1 26 LQT3 89 KCNH2 211 Variantes 32 SCN5A 1 KCNE1 1 KCNE2
  • 8. Resultados: mutaciones más frecuentemente observadas No. Exon Nucleotido Variante Localizació No. de ptes n KCNQ1-LQT1 18 3 del 572-576 L191fs/90 S2-S3 7 55 7 1032 G→A SP/A344/G S6 6 -A 71 12 1571 T →G V524G C-terminal 7 75 13 1615 C →T R539W C-terminal 6 KCNH2-LQT2 43 7 1838 C →T T613M Poro 6
  • 9. Genetic Testing in the Long QT Syndrome Development and Validation of an Efficient Approach to Genotyping in Clinical Practice. Napolitano. C, Priori. S, Schwartz. P, Bloise. R, Ronchetti. E, Nastoli. J, Bottelli. G, Cerrone. M, Leonardi. S, JAMA, December 21, 2005—Vol 294, No. 23
  • 10. Resultados 430 1115 Probandos Familiares 310 (72%) 521 594 No Mutaciones Afectados Afectados 296 Una sola 14 (4.5%) 247 Casos mutación Múltiples mutaciones Padres 144 (49%) KCNQ1 88% genotipificados 115 (39%) KCNH2 30 (10%) SCN5A 12 Heterocigotos 29 (12%) 5 (1.7%) KCNE1 Casos esporadicos 2 (0.7%) KCNE2 2 Homocigotos
  • 11. Resultados • Mutaciones identificadas en los probandos Probandos: 325 mutaciones en 235 tipos de 310 probandos mutaciones 138 No reportadas 170 (72%) 12 (5.1%) 208 (64%) Región poro o Cambio de Sin sentido dominio transmembrana 65 KCNH2 nucleotido 11 (4.7%) 90 (28%) C-terminal 56 KCNQ1 33 (14.1%) Inserciones Deleciones 26 (8%) N-terminal 13 SCN5A 3 (1.4%) 6 (2.7%) Duplicaciones 2 KCNE1 Errores splicing 2 KCNE2
  • 12. Resultados • Derivación y validación de las mutaciones prevalentes en LQTS 310 P 31 180 (58%) 25 64 Codones repetitivos 8
  • 13. En rojo las que coinciden en ambos estudios
  • 14. Estrategias para genotipificación en LQTS 
  • 15. Métodos para identificación
  • 16. Mutation detection in long QT syndrome: a comprehensive set of primers and PCR conditions P Syrris, A Murray, N D Carter, W M McKenna and S Jeffery J. Med. Genet. 2001;38;705-710
  • 17. Introduccion • El metodo más comunmente usado para la detección de mutaciones es la PCR-SSCP. • La investigación de todos los genes no ha sido posible porque no se han tipificado todos los sets de primers para algunos genes.
  • 18. Mg 2 + Materiales y metodos • PCR – Red Hot Taq DNA polimerasa • 50 ng de DNA en 25 μl • Concentración final  1 ´ buffer (20 mmol/l (NH4)2SO4, 75 mmol/l Tris-HCl, pH 8.8, at 25°C, 0.01% (v/v) Tween 20, 1.5 mmol/l MgCl2), dNTPs (0.2 mmol/l each), 0.2 μmol/l para cada primer. • 1.25 unidades de Red Hot Taq polimerasa. • Para mejorar la amplificación se variaba la Tº de apareamiento y la [Mg2+] • El programa va a iniciar con: 94°C por 3 minutos (1 ciclo), 94°C por 1 minuto, Variación de Tº (70- 60°C, 70-58°C, 65-53°C, or 60-50°C dependiendo de las propiedades de melting de los primers.) descendiendo 1º por ciclo, 72°C por 1 minuto (35 ciclos), 72°C por 10 minutos (1 ciclo).
  • 19. Materiales y metodos • PCR – HotStarTaq DNA polimerasa • Es un protocolo creado po Qiagen para facilitar la amplificacion de algunos fragmentos que son dificiles de obtener con las modificaciones de Tº. • Este Kit también consta con un Aditivo para la PCR conocido como Sustancia Q que facilita aun mas la obtencion de los fragmentos.
  • 20. KCNQ1
  • 21. HERG
  • 22. SCN5A
  • 23. SCN5A
  • 24. KCNE1 Y KCNE2
  • 25. Alteraciones en la detección de mutaciones
  • 26. Alle lic dro po ut in lo ng QT s yndro me g e ne tic te s ting : A po s s ible me c hanis m unde rlying fals e - ne g ative re s ults Tester D, Cronk L, Carr J, Schulz V, Salisbury B, Judson R,Ackerm an. Heart Rhythm 2006;3:815– 821
  • 27. •ALLELIC DROPOUT Es una amplificación diferencial de un alelo debido a una interrupción en el primer para detección de SNP. Esto como posible mecanismo de falsos negativos como resultados de las pruebas genéticas en LQT, comprende numerosos estudios previos con PCR.
  • 28. Long QT syndrome caused by a large duplication in the KCNH2 (HERG) gene undetectable by current polymerase chain reaction- based exon-scanning methodologies Koopmann T, Alders M, Jongbloed R, Guerrero S, Mannens M, Wild A, Bezzina C. Heart Rhythm 2006;3:52-55
  • 29. Introdcucción • Las metodologías de PCR y detección de exones, no detectan grandes rearreglos cromosomicos. • El estudio analizó una serie de probandos negativos para los métodos convencionales de detección de LQTS. • Se empleo la técnica MLPA (multiplex ligation- dependent probe amplification) que determina el relativo # de copias de un exon. • Duplicación de 3.7Kb en el gen KCNH2 en una filia holandes con LQTS
  • 30. Materiales y métodos • 21 Pacientes • Análisis MLPA: Sondas para exones KCNH2 1-4, 6, 9, 10 y 13 KCNQ1 1-6 y 8-19 • Confirmación y análisis de la gran duplicación de KCNH2 por LA-PCR
  • 31. Resultados

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