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Effect of gliclazide on nucleotide excision repair

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Transcript

  • 1. EFFECT OF GLICLAZIDE ON NUCLEOTIDE EXCISION REPAIR AND NON-HOMOLOGOUS DNA END JOINING IN NORMAL AND CANCER CELLSA. SLIWINSKA
    Maria Fernanda Sánchez Rico
    UPB – Medicina
    2010
  • 2. Introduction
    When NER fails…
    Cancer is caused by the malignant proliferation of abnormal cells.
    Cancerous tissue can destroy the healthy tissues of the body
    NER is one of the DNA repair mechanisms
    It involves 6 steps.
  • 3. Introduction
    efflux of potassium
    Oral anti-diabetic drug
    insulin secretion
  • 4. Introduction
    Failure of NER mechanism
    CANCER
    (-)
    (+)
    GLICLAZIDE
  • 5. General objective
    Show the effect of gliclazide on DNA repair mechanisms in normal and cancer cells.
    ¿
    ?
  • 6. Materiales y Métodos
    Células usadas
    Cultivo de células pancreáticas humanas con carcinoma
    Hombres (18-31 años), no fumadores
  • 7. Materiales y Métodos
    NER:
    Preparación de células: se cultivaron ambos tipos de células en condiciones ideales.
    Preparación de plásmidos y tratamiento con UV: pBR322 (no dañado) ypBluescriptII KS fue tratado con luz UV (240nm)
    10 lesiones
  • 8. Materiales y Métodos
    NER:
    3. NER in vitro: detección de reparación por monitoreo de unión de material radioactivo a los fragmentos reparados.
  • 9. Materiales y Métodos
    PCR-Q: segmento de DNA mediante amplificación enzimática in vitro.
    Usos: análisis huellas genéticas (forense), diagnostico prenatal, variaciones alélicas…
    • Cuantifica el producto de la amplificación del DNA.
  • Materiales y Métodos
    Unión terminal no homologa:
    Preparación de extractos celulares:
  • 10. Materiales y Métodos
    Unión terminal no homologa:
    2. Preparación DNA: digestión de pUC19 con EcoRI
    DNA plasmidico conservado con TE.
  • 11. Materiales y Métodos
    Unión terminal no homologa:
    3. Ensayo de unión terminal: detección por fluorescencia de productos reparados.
  • 12. Resultados
    ANALISIS DE
    NER
    Gris: tratadas
    Negro: no tratadas
  • 13. Resultados
    Blanco: tratada
    Negro: no tratada
    EFICACIA DE REPARACION EN GEN p53
  • 14. Resultados
    EFICACIA DE REPARACION EN GEN p53
    No irradiada
    Gliclazida no irradiada
    Después de irradiación
    Gliclazida después de irradiación
    Irradiada después de 2h incubación
    Irradiada, gliclazida 2h después
    Irradiada después de 4h
    Irradiada, gliclazida 4h después
    Irradiada después de8h
    Irradiada, gliclazida 8h después
    Irradiada después de 24h
    Irradiada, gliclazida después de 24h
  • 15. Resultados
    Gris: tratadas
    Negro: no tratadas
    UNION TERMINAL NO HOMOLOGA
    Control (-)
    Control (+)
    DNA cortado + linfocitos
    DNA cortado + linfocitos + gliclazida
    DNA cortado + PANC1
    DNA cortado + PANC1 + gliclazida
    L: DNA lineal
    D: dímero
    T: trímero
    HM: tetrámero y moléculas de alto peso
  • 16. Discussion
  • 17. Conclusions
    Type 2 diabetes mellitus increases DNA damage and reduces the efficacy of DNA repair mechanisms.
    Gliclazide decreases the risk of cancer in type 2 diabetic patients.
    The effect of gliclazide is only shown on cancer cells.
    Gliclazide has no effect on non homologous end joining repair mechanism.
  • 18. Mapa conceptual
  • 19. THANK YOU!