Metodos de identificacion_bacteriana
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Descripción de los métodos de identificación bacteriana en el laboratorio de microbiología

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Metodos de identificacion_bacteriana Metodos de identificacion_bacteriana Presentation Transcript

  • Métodos de identificación bacteriana María Belén  Huertas Chacón belenhuertas@gmail.com http://paratecnicosdelaboratorio.blogspot.com.es/ 
  •  Identificación bacteriana  • Labor principal laboratorio de microbiología:  o Identificación de los microorganismos implicados en procesos clínicos asociados a infecciones. o Conocer las implicaciones patológicas y la evolución clínica. o Aplicar una terapia antimicrobiana eficaz o  Asignar una especie al aislamiento microbiano.            APLICACIÓN DE TÉCNICAS FENOTÍPICAS María Belén Huetas Chacón 2
  •   Identificación bacteriana• Métodos fenotípicos o "tradicionales"• Métodos moleculares• Métodos basados en proteómica María Belén Huetas Chacón 3
  •  Identificación bacteriana• Características fenotípicas: o Morfología en la tinción de Gram o Cto. en los distintos medios de cultivo o Cto.  en diferentes atmósferas o Oxidasa o Catalasa  María Belén Huetas Chacón 4
  •  Identificación bacteriana • Identificación del género o Características del cultivo  Atmósfera de incubación o Pruebas primarias  Tinción de Gram  Morfología colonias  Catalasa  Oxidasa  Oxidación-fermentación  Fermentación de la glucosa  Producción de esporas María Belén Huetas Chacón 5
  •  Identificación bacteriana   • Conclusión: (Identificación de la especie) Estas pruebas deben ser suficientes paraidentificar labacteria  causante  de   la  infección,pero  si con esta batería de pruebas noidentificaramos la bacteria siempre podríamosrecurrir a los sistemas comerciales. María Belén Huetas Chacón 6
  • Identificación fenotípica• Característias microscópicas• Características macroscópicas• Cultivo• Pruebas bioquímicas• Pruebas basadas en la resistencia a ciertas substancias• Sistemas comerciales María Belén Huetas Chacón 7
  • Identificación fenotípica• Característias microscópicas o Examen en fresco o Tinciones• Características macroscópicas o Morfología o Hemólisis• Cultivo o Medios de cultivo o Requisitos de crecimiento  Atmósfera  Temperatura  Nutrición María Belén Huetas Chacón 8
  • Identificación fenotípica• Pruebas bioquímicas o Pruebas con lectura inmediata o Pruebas rápidas (con lecturas en menos de 6 horas) o Pruebas lentas (con lectura de 18 a 48 horas)• Pruebas basadas en la resistencia a ciertas substancias o Optoquina o Bacitracina o Solubiliad en bilis• Sistemas comerciales o Sistemas manuales o Sistemas automáticos María Belén Huetas Chacón 9
  • Identificación fenotípica• Característias microscópicas o El estudio microscópico en fresco y tras tinción revela la forma y manerade agruparse, la estructura de las celulas y su tamaño. o La tinción es el primer paso (el único algunas veces) para la identificación bacteriana. Las tinciones más utilizadas son:  Azul de Metileno  Gram La  tinción  de  Gram  es  la  tinción  más importante, yen algunas ocasiones (LCR) la Primera y/o única herramientapara un diagnóstico María Belén Huetas Chacón 10
  • Identificación fenotípica• Características macroscópicas o La morfología   de   las  colonias:  Fundamental  para  la identificación preliminar así como la diferenciación   de microorganismos (colonias de cultivo fresco, medios  no selectivos y preferiblemente aislamiento de la bacteria en cultivo puro)  Tamaño  Forma  Textura  Color   María Belén Huetas Chacón 11
  • Identificación fenotípica oHemólisis:Agunas bacterias producen hemolisínas que causan la lisis de los hematíes en medios que contienen sangre  Beta. Zona clara alrededor de la colonia  Alfa. Halo verdoso alrededor de la colonia María Belén Huetas Chacón 12
  • Identificación fenotípica  • Cultivo C o Medios  de  cultivo:   En los medios de cultivo las bacterias  se multiplican pero se necesita esperar entre 18 y 24 horas. Para ello las bacterias necesitan una fuente de energía, una fuente de carbono, una fuente de nitrógeno, algunas sales, oligoelementos y agua.  Líquidos. Las substancias nutritivas se encuentran disueltas. E. crecimieneto sueleser mayor  Sólidos. Consisten en una base de agar. Permite disponer de las colonias bacterianas             Capacidad  para  permitir  crecimiento  bacterias                        María Belén Huetas Chacón 13
  • Identificación fenotípica  Medios básicos. Ricos en nutrientes que permiten que permiten el crecimiento de la mayoría de las bacterias Medios de enriquecimiento. Están desarrollados para recuperar   bacterias exigentes (requisitos nutricionales.  Suelen ser medios líquidos Medios selectivos. Fomentan el cto. de algunas bacterias e impoden el de otras María Belén Huetas Chacón 14
  • Identificación fenotípica  Medios diferenciales. Se   utilizan   para   poner  de manifiesto     características     distintivas   de   las colonias.   Distinguen  entre   los   distintos   grupos bacterianos casi siempre por el color de las colonias Medios cromogénicos. Incorporan substancias cromogénicas para detectar distintas enzimas producidas por los microorganismos. Cuando la bacteria produce la enzima hidroliza el sustrato liberando el compuesto cromogénico que adquiere un color intenso dando color a la colonia. María Belén Huetas Chacón 15
  • Identificación fenotípica o Requisitos de crecimiento  Atmósfera:  Aerobias estrictas: crecen sólo en presencia de oxígeno.  Anaerobias estrictas: Crecen sólo en ausencia de oxígeno.  Facultativas: Crecen tanto en aerobiosis como en anaerobiosis.  Microaerófilas: crecen mejor en una atmósfera reducida de oxígeno.  Capnofílicas: requieren CO2 adicional para crecer. María Belén Huetas Chacón 16
  • Identificación fenotípica  Temperatura.  Psicrofílicas: Pueden crecer a bajas temperaturas entre 2 - 5ºC (óptima 10 - 30ºC)  Mesofílicas: Requieren   para   su  crecimiento temperatura entre  10 - 45ºC (Tª óptima entre   30 - 40ºC)  Termofílicas:  Crecen   muy   poco  a  37ºC  (Tª óptima enre 50 - 60ºC)La mayoría de las bacterias son MESOFÍLICAS María Belén Huetas Chacón 17
  • Identificación fenotípica  Nutrición  Capacidad para crecer en medios ordinarios  Capacidad para crecer en medios con adición de sangre, suero o glucosa  Necesidad de factores específicos:  Factor X (hemina)  Factor V (NAD)            Haemophilus spp María Belén Huetas Chacón 18
  • Identificación fenotípica • Pruebas bioquímicas Las pruebas bioquímicas nos permiten determinar las características metabólicas de las bacterias o Pruebas de lectura inmediata o Pruebas de lectura rápida (menos de 6 horas) o Pruebas de lectura lenta (entre 18 y 48 horas) María Belén Huetas Chacón 19
  • Identificación fenotípica o Pruebas de lectura inmediata:  Catalasa: Diferenciar Microccocacceae (positivo) de Streptococcus spp y Enterococcus spp (negativo)   Oxidasa: Determinar la presencia de la enzima oxidasa.  Neisserias: Oxidasa positiva   Pseudomonas (Oxidasa positiva) de otras enterobacterias oxidasa negativa María Belén Huetas Chacón 20
  • Identificación fenotípica o Pruebas de lecturas rápidas: Lectura de los resultados en menos de 6 horas.  Hidrólisis del hipurato: Para la identificación de  Campylobacter jejuni, Listeria monocitogenes, Gardneella vaginalis, y      Streptococcus agalactiae   ONPG (Beta-galactosidasa): Con ella demostramos la   presencia   de  la  enzima  Beta - galactosidasa. Todas  las  bacterias  fermentadoras  lentas  de la lactosa son Beta-galactosidasa positivas. María Belén Huetas Chacón 21
  • Identificación fenotípica  PYR: Identificación de  Streptococcus pyogenes  y Enterococcus spp. También   en  la   diferenciación Staphylococcus lugdunensis de otros estafilococos coagulasa negativos. LAP: Identificación de cocos grampositivos catalasa negativa Ureasas: Diferenciar Proteus (positiva)  de  otras enterobacterias.  También   se    utiliza    para   la diferenciación entre Physobacter phenylpyruvicus y Moraxella spp Helicobacter pylori y Brucella spp que también hidrolizan la urea. María Belén Huetas Chacón 22
  • Identificación fenotípica   Indol: Detecta liberación de indol en un compuesto bacteriano.  E coli: Indol positivo  Klebsiella spp: indol negativoo Pruebas lentas: Lectura entre las 18 y 48 horas  Oxido-Fermentación: Indica el tipo de metaboismo energético  de  la  bacteria,  respiratorio, es decir, oxidativo  (O) o fermentador (F). La bacteria se inocula en el medio y se incuba en aerobiosis y anaerobiosis simultáneamente  María Belén Huetas Chacón 23
  • Identificación fenotípica  Reducción de nitratos:  Asignar bacterias a la familia Enterobacteriaceae  Diferenciar   Moraxella catatthalis  del  género  Neisseria  Identificación    de    bacilos    grampositivos aerobios Rojo de metilo: Identificación a nivel de especie de los bacilos entéricos gramnegativos. Voges-Proskauer: Identificación a nivel de especie de   bacilos  entéricos  gramnegativos,  Aeromonas spp y Vibrio spp María Belén Huetas Chacón 24
  • Identificación fenotípica   Agar hierro de Kligler:  Capacidad de metabolizar un hidrato de carbono específico (glucosa, lactosa o ambas)  Producción o no de gases CO2 e H2  Producción de ácido sulfhídrico (SH2)            Otro medio sería el TSI (Triple Sugar Iron) quecontiene un tercer hidrato de carbono: la sacarosa   Fermentación de azúcares  Hidrólisis de la esculina  Coagulasa: Diferenciar S aureus (positiva) de otros Staphylococcus                    María Belén Huetas Chacón 25
  • Identificación fenotípica  Fenilalanina-desaminasa: Diferenciar Proteus, Providencia y Morganella de otros género de enterobacterias. ADNasa Hidrólisis de la gelatina Descarboxilasas Lipasa Lecitinasa Utilización de citrato: Entre las enterobacterias, Enterobacter, Serratia, Klebsiella, Citrobacter y algunas especies de Salmonella.  María Belén Huetas Chacón 26
  • Identificación fenotípica   Utilización de malonato  Prueba de CAMP• Pruebas  basadas en la resistencia a ciertas substancias: o Optoquina: Inhibe  crecimiento  de S pneumniae, pero no de otros Streptococcus alfa-hemolíticos o Bacitracina: Los streptococcus beta-hemolíticos del grupo A suelen ser sensibles a bajas concentraciones de bacitracina. María Belén Huetas Chacón 27
  • Identificación fenotípica  o Solubilidad en bilis: Se basa en la capacidad de determinadas especies bacterianas de lisarse en presencia de sales biliares, el efecto de esta enzima autolítica se pone de manifiesto sobre colonias de S pneumoniae o Crecimiento en caldo hipersalino• S Sistemas comerciales o Sistemas comerciales manuales o galerías multipruebas o Sistemas comerciales automatizados María Belén Huetas Chacón 28
  • María Belén Huetas Chacón 2011 29