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Lab biol 2010

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  • 1. UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD- ESCUELA DE CIENCIAS BASICAS TECNOLOGÍA E INGENIERIA GUÍA DE LABORATORIO DE BIOLOGÍA 2010 Carmen Eugenia Piña López1 Yurby Salazar Núñez2, Bibiana Ávila García3_________________________1 M. Sc. Ciencias Biológicas; M.Sc. Docencia Universitaria; Especialista en Nutrición AnimalSostenible; Especialista en Informática y Multimedia.2 Bacterióloga Tutora José Acevedo y Gómez3 Magistra en Educación. Especialista en planeación para la educación ambiental.Psicopedagoga Licenciada en Biología y química
  • 2. GUIAS PARA PRÁCTICAS DE BIOLOGÍA GENERALINTRODUCCIONLas prácticas de laboratorio de biología permite que estudiante confronte los conocimientosteóricos básicos del curso, adquiera la habilidad y destreza en el manejo de equipos eintegre en su desarrollo aspectos de bioseguridad y ética.Las guías para las prácticas de biología, son un importante dispositivo de ayuda pedagógicay didáctica en el proceso de formación profesional que inician los estudiantes de losprogramas de pregradoEstas guías están descritas de manera clara y sencilla con el fin de que la ejecuciónpráctica pueda hacerse completamente.Antes de realizar la parte práctica se recomienda ver cada uno de los videos presentadosen el curso de Biología en el link Multimedia,http://www.unad.edu.co/curso_biologia/multimedia.htm para hacerse una idea delmaterial a utilizar y procedimiento a seguir lo cual le facilitará la comprensión y eldesarrollo de la práctica.Quienes deseen descargar los videos en su computador pueden hacerlo ver orientaciones alfinal de la guía. Orientaciones para las actividades de LaboratorioEl componente práctico se desarrollará mediante laboratorios previamente apoyados envídeos didácticos introductorios y se complementará con observaciones en el laboratorio.Los laboratorios se realizan de forma presencial en cada uno de los CEAD dondeestén matriculados, con un tutor asignado por el director del Cead para tal fin. La fecha derealización la determinan en cada CEAD y saldrá publicada en el Foro Noticias del aula yen cada CEAD, motivo por lo cual hay que estar pendiente " leer diariamente" las noticiasdel foro, para que puedan hacer su inscripción. La realización de las prácticas delaboratorio es obligatoria para aprobar el curso.Los informes de laboratorio de los estudiantes virtuales deben ser entregados al tutorde metodología tradicional con quien realicen el laboratorio. El Informe incluye lasrespuestas a las preguntas sobre la observación de los videos de preparación previa, elpre-informe y el desarrollo de las guías. El tutor tradicional con quien realizan ellaboratorio debe calificar su proceso y su informe, y envía la nota al tutor virtualpara sumarla con las notas obtenidas en las demás actividades y de esta manera se puedadar la nota definitiva de su curso.Las actividades en campus tienen un valor de 60% sobre la calificación del curso. El 60%equivale a 300 puntos, de los cuales 90 puntos corresponden a la nota del laboratorioenviada por el tutor tradicional, o sea un 30% de este componente práctico. La 1
  • 3. equivalencia es la siguiente por ejemplo para una nota de 4,5 enviada por el tutortradicional: Calificación de los laboratorios enviada por el Valor en tutor tradicional Puntos 5 90 4,5 X X= (90 x 4,5) / 5= 81 puntosEl costo de los laboratorios está incluido en la matrículaA continuación encontrarán una tabla con los nombres de las prácticas su duración yporcentaje. Sesiones de Práctica Duración Porcentaje sobre el 100% curso1. Normas de Seguridad en el laboratorio y 4 horas 6Microscopía2. La Célula y Tejidos Vegetales 4 horas 63. Mitosis y Meiosis 1 hora 44. Los Microorganismos 3 horas 6Total 12 22 FORMATO PARA OBSERVACIÓN DE VIDEOS DE LABORATORIO.Objetivos:Identificar los temas, materiales, habilidades que podemos desarrollar con la observaciónde los videos y prácticas de laboratorio.Instrucciones:Esta actividad no reemplaza los laboratorios nos prepara para la realización de losmismos.Observe detenidamente cada uno de los videos de laboratorio relacionados en el materialdidáctico del curso de Biología.Responda las preguntas que se realizan para cada video de las experiencias delaboratorio.Con los compañeros de su grupo colaborativo compare las respuestas. 2
  • 4. Consolide en un solo documento los datos y preséntelos al tutor virtualRecursos:Videos de las experiencias:1. Vídeo: Normas generales de uso del laboratoriohttp://www.unad.edu.co/curso_biologia/videoseguridad.htm2. Video:_El microscopio parte 1 ttp://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_microscopio1.htm Video: El microscopio parte 2 http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_microscopio2.htm3. Video: Célula parte 1 http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_celula-1.htm Video: Célula parte 2 http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_celula_2.htm4. Video: mitosis y meiosis parte 1http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_mitosis1.htmVideo: mitosis y meiosis parte 2 http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_mitosis2.htm5. Video: biodiversidad microbiana parte 1http://www.unad.edu.co/curso_biologia/biodiversidad1.htmVideo: biodiversidad microbiana parte 2http://www.unad.edu.co/curso_biologia/biodiversidad_2.htm6. Video: tejidos vegetales http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_Tej_vegetales.htmPreguntas: RESPONDA PARA CADA VIDEO.1. ¿Cuál es el objetivo de esta práctica?2. ¿Qué materiales necesita? ¿Los conoce todos? ¿Cuáles desconoce?3. ¿Qué temas del módulo puede relacionar con esta experiencia? Justifique su respuesta.4. ¿Qué habilidades cree que se pueden desarrollar al realizar ésta práctica de laboratorio?5. ¿Qué utilidad o aplicaciones prácticas puede derivar del conocimiento que se desarrollacon estos laboratorios?6. Después de observar el video ¿Cuál es la conclusión a la que llega?Formato elaborado por:Esp. Bibiana Ávila García.Punto de contacto: 3004986704 – bibi.avila@gmail.com Tutora CEAD Barranquilla.Nota: No olviden colocar en el informe a entregar al tutor tradicional de laboratorio elnúmero del grupo colaborativo, el nombre de su tutor virtual, además de sus datos nombreapellidos y código. Recomendaciones GeneralesImplementos que deben llevar al laboratorioBata Blanca, Guantes.Papel absorbente, Paños de cocinaJabón 3
  • 5. Láminas y laminillaTapabocas.Papel y lápiz para tomar apuntesAntes de iniciar las prácticas usted debe haber leído el capítulo correspondiente en el cursode biología, observado los videos de preparación previa y resuelto las preguntas sobre laobservación de videos y lo que se solicite en cada prácticaForma de EvaluaciónLa evaluación se llevará a cabo por medio de las siguientes actividades1. Participación en el foro colaborativo con la presentación del pre-informe sobre loslaboratorios, el cual incluye las respuestas a las preguntas sobre observación de videos ylas respuestas a los cuestionarios de cada práctica. Los puntos del pre-informe son:  Titulo  Objetivos  Resumen de la información teórica  Esquema o diagrama de flujo en orden riguroso por cada observación  Respuesta a cuestionario que encuentre en la guía de práctica2. Evaluaciones parciales presenciales al iniciar algunas prácticas3. Presentación de informes de prácticas realizadas en el laboratorio, el cual incluyetambién el pre-informe4. Resolución de cuestionarios para medir el rendimiento después de las prácticas Aspectos mínimos que debe llevar un informe final (que se entregará al tutortradicional para su calificación)1. Titulo2. Objetivos3. Resumen de la información teórica4. Esquema de pasos para las observaciones en el laboratorio o diagrama de flujo en ordenriguroso por cada observación5. Respuesta a cuestionario de cada práctica5. Descripción detallada de las observaciones6. Conclusiones7. Referencias bibliográficasA continuación encontrará una tabla con la descripción de la actividad a realizar y losproductos a entregar Laboratorio 1 Normas de seguridad en el laboratorio.Vídeo: Normas generales de uso del laboratorioObjetivo 4
  • 6. Conocer y cumplir las principales normas de seguridad e higiene que se deben seguir en ellaboratorio, con el fin de evitar posibles riesgos, tanto para las personas como para elmedio ambiente.IntroducciónLa bioseguridad, es la aplicación del conocimiento, de las normas y técnicas en el desarrollode las prácticas que se realizan en el laboratorio para prevenir la exposición del personal ydel medio ambiente a cualquier riesgo. Los riesgos pueden estar relacionados con laspropias instalaciones, con las muestras de origen biológico, con los procedimientos ymanipulaciones que se realicen.Marco Teórico: Principales NormasLas principales normas a tener en cuenta para el desarrollo de prácticas en el laboratoriode Biología son las siguientes: en la zona de trabajo del laboratorio no se debe consumir alimentos ni bebidas paraevitar riesgos de contaminación. está prohibido fumar en el área del laboratorio o sus alrededores. Recordemos quese trabaja con gas y que algunos químicos generan vapores inflamables. no se deben llevar a la boca lápices, etiquetas o cualquier otro material utilizado enel laboratorio. se debe mantener el laboratorio limpio y aseado. Por consiguiente al terminar lapráctica se debe descontaminar la superficie de trabajo. las manos se deben lavar después de manipular material infeccioso, así como alabandonar el laboratorio. todo estudiante debe hacer uso de la bata blanca, esto le protegerá la ropa delcontacto con reactivos y colorantes empleados en el laboratorio. sólo se debe permitir el paso a la zona de trabajo del laboratorio a las personasautorizadas. Durante el trabajo se mantendrán cerradas las puertas del laboratorio. no se debe pipetear con la boca. debe utilizarse siempre un dispositivo de pipeteo todas las pipetas deben tener tapones de algodón para reducir la contaminación delos dispositivos de pipeteo. todo el personal debe poner especial cuidado en evitar el contacto de la piel conmateriales potencialmente infecciosos. Con este fin deben usarse guantes. Los guantesdeben ser desechados antes de salir del área de trabajo. Jamás se debe salir de la mismacon los guantes puestos, ni con ellos se debe coger el teléfono. marque y rotule adecuadamente las láminas. Deben llevar claramente escrito en unlugar visible, el nombre o identificación del grupo de trabajo, practica realizada y fecha. una vez concluida la práctica, proceda a organizar el sitio de trabajo, desinfectandoel mesón con toallas de papel humedecidas con hipoclorito de sodio o alcohol y dejandotanto el material como el equipo utilizado limpio y en el lugar adecuado. es importante conocer los agentes, sustancias y productos peligrosos que existenen el laboratorio. Antes de utilizar un compuesto hay que fijarse en la etiqueta paraasegurarse de que es el que se necesita y de los posibles riesgos de su manipulación. es necesario conocer el manejo de cada uno de los equipos existentes en ellaboratorio. Todo el material, especialmente los aparatos delicados, como lupas ymicroscopios, deben manejarse con cuidado evitando los golpes o el forzar sus 5
  • 7. mecanismos. Cualquier material de vidrio no debe enfriarse bruscamente justo después dehaberlos calentado con el fin de evitar roturas. en neveras que no posean un sistema de protección antideflagración no debenalmacenarse reactivos que contengan compuestos volátiles inflamables como éter etílico. los productos inflamables como gases, alcohol, éter, entre otros deben mantenersealejados de la llama del mechero. Si hay que calentar tubos de ensayo con estos productos,se hará al baño María, nunca directamente a la llama. Si se manejan mecheros de gas sedebe tener mucho cuidado de cerrar las llaves de paso al apagar la llama. se debe lavar muy bien la cristalería que se utilice. Preste atención y cuidado almanipular cristalería mojada. en el laboratorio habrá un recipiente plástico, para cristalería rota y para plásticosque hayan estado en contacto con cultivos de células o virus. Por favor, deseche cada cosaen el envase apropiado. mantenga despejadas las áreas. Trate de traer la menor cantidad posible depertenencias al laboratorio. Coloque sus pertenencias en un área designada o donde noestorben.Cuestionario para el pre-informe1.1 ¿Que es bioseguridad?1.2 ¿Cuáles serían para usted las normas básicas de bioseguridad en el laboratorio debiología?1.3 ¿Cómo puede usted evitar en el laboratorio daños a su salud?1.4 ConclusionesProcedimientoPara el desarrollo de esta práctica el estudiante debe observar el video normas deseguridad en el laboratorio y contestar las preguntas presentadas en el formato deobservación del video LABORATORIO 2: MICROSCOPÍAAutoría: Carmen Eugenia Piña Lvideo:_El microscopio parte 1video:_EL microscopio parte 2OBJETIVOS:  Señalar los componentes mecánicos y ópticos que constituyen el microscopio.  Realizar montajes húmedos  Comprobar las propiedades que posee el microscopio.  Realizar correctamente el manejo del microscopio óptico  Calcular el diámetro del campo de visión  Comprobar los principios en que se basa la microscopía óptica.  Desarrollar en trabajo colaborativo el informe de laboratorio 6
  • 8. Marco TeóricoTipos de MicroscopioEl Microscopio óptico simpleConstituido por una lente biconvexa única o lupa que hace converger los rayos luminososque la atraviesan en un punto denominado foco y a una distancia focal muy corta.El Microscopio óptico CompuestoEl microscopio se define como un instrumento óptico formado por un sistema de lentes:objetivos y oculares que amplían los objetos extremadamente pequeños para posibilitar suobservación. La lente del objetivo proporciona una imagen intermedia ampliada del objeto,es decir, funciona como una lente simple, y la lente del ocular que recoge la imagen dadpor el objetivo y la aumenta.El Microscopio electrónicoEste microscopio en lugar de una fuente de luz, utiliza un haz de electrones que sedesplazan en el vacío y en línea recta. Con el microscopio electrónico es posible observarobjetos muy pequeños como los virus que no pueden ser resueltos con el microscopioóptico. En el microscopio óptico en lugar de lentes se emplean campos magnéticos queenfocan los haces de electrones.El Microscopio óptico Compuesto: componentesA continuación se describen las partes que lo conforman:Los objetivos: están localizados en la parte inferior del tubo insertados en una piezametálica, denominada revólver o portaobjetivos, que permite cambiarlos fácilmente.Estos generan una imagen real, invertida y aumentada, esta imagen intermedia es captada 7
  • 9. y sufre una nueva ampliación por el ocular. . Los objetivos más frecuentes son los de 4X, 10X, 40X y 100X aumentos. Este último de 100x se llama de inmersión ya que para su utilización se necesita aplicar aceite de cedro sobre la preparación. Y se utiliza para observar láminas coloreadas completamente secas. El poder de aumento de cada objetivo se indica en el número grabado en la manga del lente. Generalmente el objetivo de 4X se encuentra marcado por un anillo rojo, el de 10X por un anillo de color amarillo, el de 40=x con un anillo de color azul y el de 100X con un anillo de color blancoLa abertura numérica se encuentra (A.N.) se encuentra grabada en la manga del objetivo,junto a la indicación del aumento.0,30 En el objetivo de 10X0,65 En el objetivo de 40X1,30 En el objetivo de 100XA medida que aumenta la A.N. disminuyen las dimensiones de la lente frontal, montada enla base del objetivo. La lente del objetivo de 100x tiene el tamaño de una cabeza de alfileres mayor el poder de resolución. Además a medida que aumenta A.N. es mayor el poder deresolución. Cuanto mayor sea el poder de resolución del objetivo, será más clara la imageny aumentará la capacidad de poner de manifiesto detalles adyacentes muy cercanos,separándolos y aclarándolos. El poder de resolución máximo de un buen microscopio esaproximadamente 0,25 nanómetros, el poder de resolución del ojo humano es de 0,25milímetros. Los oculares se denominan así porque están muy cercanos al ojo. Su función es la de captar y ampliar la imagen formada en los objetivos. El poder de aumento del ocular se encuentra marcado en el ocular. Un ocular por 4 aumenta 4 veces la imagen que produce el objetivo. Un ocular por 6 la aumenta 6 veces. Un ocular por 10 la aumenta 10 veces Nunca se deben tocar las lentes con las manos. Si se ensucian, se deben limpiar muy suavemente con un papel de ópticaEl tubo óptico: es una cámara oscura unida mediante una cremallera. Tiene el revolvercon los objetivos en su parte inferior y los oculares en el extremo superior.El Brazo: es una columna perpendicular al pie. Puede ser arqueado o vertical y une al piecon el tubo. 8
  • 10. Platina Es una plataforma horizontal con un orificio central, sobre el que se coloca la preparación, que permite el paso de los rayos procedentes de la fuente de iluminación situada por debajo. Dos pinzas sirven para retener el portaobjetos sobre la platina y un carro con un sistema de cremallera guiado por dos tornillos de desplazamiento que permite mover la preparación de delante hacia atrás o de izquierda a derecha y viceversa. Está dotado de una escala graduada para medir de forma precisa las observaciones.El condensador: es un sistema de lentes convergentes situadas bajo la platina, sufunción es la de concentrar la luz generada por la fuente de iluminación hacia lapreparación.Diafragma-iris Es una cortinilla que regula la cantidad de luz que entra en elcondensador, eliminando los rayos demasiado desviados. Se acciona mediante una perilla.Esta situado debajo de la platina, inmediatamente debajo del condensador. La disminucióndel diafragma permite visualizar partes de protozoos u hongos se utiliza en laspreparaciones frescas 9
  • 11. Tornillo Macrométrico: Se encuentra en la parte inferior del microscopio. Sirve para alejar o acercar el tubo y la platina moviéndola de arriba hacia abajo y viceversa. Permite un enfoque aproximado o grueso de la muestra Tornillo micrométrico: Generalmente se encuentra incorporado al tornillo macrométrico. Sirve para dar claridad a la imagen al lograr un ajuste fino y preciso, mediante movimiento de la platina hacia arriba y hacia abajo de forma lenta. Ambos tornillos llevan incorporado un mando de bloqueo que fija la platina a una determinada altura.La fuente de iluminación: se trata de una lámpara halógena de intensidad graduable.Está situada en el pie del microscopio. Se enciende y se apaga con un interruptor y en susuperficie externa puede tener una especie de anillo para colocar filtros que facilitan lavisualización.Por último definimos el pie o base: sirve como base del microscopio y tiene un pesosuficiente para dar estabilidad al aparato. En él se integra la fuente luminosa.Poderes o capacidades del Poder de aumento: Permite magnificar la imagen.microscopio Corresponde al aumento (A) dado por la relación: Tamaño de la imagen / tamaño del objeto. La ampliación es igual al producto del aumento del lente ocular por el del objetivo. Cada objetivo y cada ocular tienen grabado el número de veces que aumentan la imagen. Si la imagen del objeto, se hace aumentar 40 veces mediante el objetivo y enseguida 10 mediante el ocular, su aumento total será 10X40= 400 ¿Cómo se calcula el aumento de una muestra? Se multiplica el aumento que señala el ocular por el aumento del objetivo dando como resultado el aumento total de la muestra o número de veces en que el objeto se encuentra ampliado con respecto a su tamaño original. Aumento total = aumento del ocular X aumento del objetivo 10
  • 12. Poder de definición Es la capacidad del microscopio para formar imágenes nítidas y con contornos definidos Poder de penetración o profundidad Permite visualizar los diferentes planos de una preparación y está dado por el ajuste de precisión que se logra con el tornillo micrométrico. Poder de resolución es la capacidad de presentar dos puntos que se encuentranmuy cercanos entre sí como separados, lo cual permite observar detalles de los objetos quecon el ojo humano no se podrían ver. El ojo humano no puede ver separados dos puntoscuando su distancia es menor a una décima de milímetro. Con el Microscopio óptico, elpoder separador máximo es de 0,2 décimas de micra. Mejora la visión unas 500 veces conrelación a la del ojo humano En la imagen se observan espacios En la imagen se observan varias fibras deblancos entre la tinta negra que a simple hilo que a simple vista no serían vistos vista no serían vistos 11
  • 13. El poder de resolución depende de la longitud de onda ( λ ) y de la apertura numérica del objetivo (A.N.) El Poder de resolución esta dado por la formula: Poder de resolución= λ 2x A.N. A.N: relaciona el ángulo de apertura de los rayos de luz, que provienen de la muestra, con el índice de refracción.Principios generales de microscopíaPrincipios ópticosUna lente sencilla (biconvexa) posee dos focos, uno a cada lado de la lente (F y F´).Cuando los rayos luminosos pasan a través de la lente se concentran en el foco. Ladistancia focal es la distancia entre el centro de la lente y el punto en donde convergen losrayos.La distancia focal de una lente depende del índice de refracción del material del cual estáhecha, y del medio que envuelve la lente. Por eso, es diferente la distancia focal de unalente en el agua, que esta misma en el aire. Como también es diferente la distancia focalde una lente de vidrio en comparación con una construida en plástico. http://micro.magnet.fsu.edu/primer/java/lenses/simplethinlens/index.htmlCuanto más pequeña es la distancia focal de una lente tanto mayor es su aumento. Si elobjeto se coloca a distancia mayor del foco, se obtiene una imagen real invertida, mientrasque si el objeto se localiza a una distancia menor del foco la imagen será virtual. A medida 12
  • 14. que se aleja el objeto del foco, la imagen se percibe más pequeña. La distancia de trabajofocal de un objetivo, es el espacio que existe entre la superficie de la lente del objetivo y lalaminilla, una vez se encuentre enfocada la preparación. A mayor aumento del objetivo ladistancia de trabajo disminuye.Como determinar la posición de los objetos observadosLos objetos que se observan en el campo microscópico se pueden localizar en relación conlas manecillas del reloj. Los objetos que aparecen en la parte inferior del fondo del campomicroscópico se encuentran realmente en la parte superior. Los objetos en el lado izquierdodel campo microscópico se encuentran realmente al lado derecho.Desplazamiento del objetoSi se mueve el portaobjetos hacia la derecha, el objeto examinado se desplazará hacia laizquierda. Si se mueve el portaobjetos hacia usted, el objeto examinado se alejará.Formación de la imagen real invertidahttp://www.edumedia-sciences.com/a301_l3-microscope.htmlLas imágenes se observan invertidas por las lentes. 13
  • 15. Refracción de la luzLa distancia focal de una lente depende del índice de refracción del material del cual estahecha y del medio que envuelve la lente. Cuando los rayos de luz se mueven en un mediohomogéneo como el aire, se propagan en línea recta, pero cuando caen sobre la superficiede un medio de diferente densidad, a la del medio en el cual se venía propagando, cambiande dirección y de velocidad a estos cambios se les conoce como refracción de la luz.Los rayos de luz procedentes de los objetos sumergidos en el agua se desvían al atravesardos medios de diferente densidad (agua-aire), originando este efecto de refracción. Porejemplo si introducimos un lápiz en un vaso con agua, el lápiz se verá cortado al pasar delagua al aire.En la práctica de microscopía encontramos diferentes medios: aire, agua aceite deinmersión y vidrio, cuyos índices de refracción son 1.0, 1.33, 1.51, .1.54 respectivamente.Al observar una muestra a través del microscopio, los rayos de luz tienen que atravesarestos medios y son refractados cambiando su dirección. 14
  • 16. Al aplicar el aceite inmersión se entre el preparado y la lente, aceite de inmersión, quetiene un índice de refracción igual al de la lente y evita la refracción de los rayos luminosos.Campo de VisiónEl campo de visión de un microscopio es la zona circular que se observa al mirar lapreparación bajo un determinado aumento. Para medir el campo de visión de unmicroscopio, se debe usar una unidad llamada micra. Una micra equivale a 0,0001 mm; enotras palabras, hay 1000 micras en un milímetro. El diámetro de este campo es sumedida.Para calcular el diámetro del campo de visión para un determinado aumento hay que seguirlos siguientes pasos:a) Recortar un cuadrado de 1 cm de lado de papel milimetrado.b) Ponerlo sobre la abertura central del portaobjetos 15
  • 17. c) Observando por el ocular y con el objetivo de 4X, mover la muestra hasta lograr que lalínea 0 mm quede en el borde izquierdo del campo visual d) Enfocar con el objetivo de menor aumento 4X hasta que se vea con claridad. Enfocar la preparación quiere decir situarla a la distancia del objetivo que permite su observación nítida. Esta distancia s e conoce como distancia de trabajo y es tanto menor cuanto mayor es el poder de aumento del objetivo. e) Medir el campo visual haciendo coincidir una de las líneas del papel milimetrado con el borde del campo de visión. f) Contar el número de milímetros que se ven (recuerde que la distancia entre dos líneas es un milímetro) y estimar aproximadamente la fracción sobrante, si la hay. El resultado será el diámetro del campo visual para ese aumento (objetivo x ocular). g) Si queremos calcular el diámetro del campo de visión para aumentos mayores, hay que tener en cuenta que cuanto mayor sea el aumento, el campo será menor, es decir, se verá menos de la muestra que estemos observando. De forma que, si el aumento es el doble, el campo será la mitad, si el aumento es el triple, el diámetro será la tercera parte, etc. (inversamente proporcionales). Por tanto, bastará con realizar un sencillo cálculo matemático para saber el nuevo diámetro.Así se puede calcular los diámetros de objetos microscópicos, células, amibas, vistos. Medida en mm (escala del Tamaño de las marcas Equivalencia en µm portaobjetos) (divisiones) 1mm 1000 µm grandes 0.1 mm 100 µm medianas 0.01mm 10 µm más pequeñasRecuerde que aunque la escala está marcando mm usted lo leerá en micras. Preparaciones Las preparaciones pueden ser de varios tipos: a) Frescas: Son montajesgeneralmente húmedos. La muestra se observa sin modificar, diluida o concentrada.Permite observar la movilidad de los microorganismos vivos. Se utiliza también paraobservar procesos como la mitosis, meiosis, la formación d esporas. Para realizar unmontaje húmedo se debe verter una gota de agua o del líquido que contiene losmicroorganismos en el centro de una lámina portaobjetos y cubrirlo con una laminillacubreobjetos. Para evitar la evaporación se puede sellar el espacio que hay entre elportaobjetos y el cubreobjetos con vaselina o alguna sustancia similar. Frescas ligeramentemodificadas: Las muestras se pueden diluir con agua o con agua con sal, esta última evitaque la presión osmótica del medio no sea demasiado baja. Se puede aplicar un colorante oreactivo para observar mejor las estructuras. b) Fijadas y teñidas: Se coloca unasuspensión homogénea de microorganismos en una gota de agua sobre el portaobjetos y 16
  • 18. se fija (mediante calor o agentes químicos) y después se tiñen mediante diferentestécnicas. Estas preparaciones se observan sin cubreobjetos y, habitualmente, con objetivosde inmersión.Cuestionario a resolver para el pre-informe2.1 En la siguiente representación gráfica de un microscopio, reconozca y ubique cada unade las siguientes partes y su función Tubo Oculares Brazo Objetivos de 4x, 10x, 40x y 100x Platina Condensador Fuente de iluminación Tornillo macrométrico y micrométrico Pie2.2 Clasifique en el cuadro las partes mecánicas y ópticas del microscopio.Partes mecánicas Partes ópticas2.3 Qué es un montaje húmedo.2.4 Defina los tipos de montaje que se pueden hacer en el laboratorio.2.5 Describa los pasos para la elaboración de un montaje húmedo.2.6 ¿Qué debe hacerse para lograr una iluminación adecuada?2.7 ¿Cómo se enfoca el microscopio al iniciar la observación?2.8 ¿Al mover el portaobjetos de derecha a izquierda a qué lado se mueve la imagen?2.9 ¿Con qué objetivo se logra un campo de visión más grande?2.10 ¿Con qué objetivo se observan mejor los detalles de una imagen?2.11 ¿Con el objetivo de mayor aumento se necesita menor o mayor iluminación de la quese necesita con el de menor aumento?2.12 ¿Qué función cumple el aceite de inmersión? ¿Con qué objetivo se utiliza? 17
  • 19. 2.13 ¿Cuál es el poder de aumento cuando se estén utilizando cada uno de los objetivos de4X, 10X, 40X y el ocular de 10X?2.14 ¿Cuáles son las propiedades del microscopio?2.15 Defina los siguientes poderes o capacidades del microscopio a. Poder de Aumento b. Poder de definición c. Poder de Resolución d. Poder de Penetración de Foco o Campo PROCEDIMIENTOMATERIALES QUE DEBEN LLEVAR AL LABORATORIOBata Blanca, Guantes.Papel absorbente, Paños de cocinaJabónTapabocas.Papel y lápiz para tomar apuntesResueltas las preguntas sobre la observación de videos y las que se solicite en cadaprácticaAgua estancada o de solución de tierra de infusoriosPapel milimetradoHilos de coloresTela de cuadros 2 centímetrosRecorte de periódico con la letra asimétrica: Pude ser la letra e o la letra aLáminas portaobjetos, Laminillas (por grupo)papel absorbenteMATERIALES QUE LE SERÁN SUMINISTRADOS EN EL LABORATORIOLamina con extendido coloreadaMicroscopioAceite de inmersiónPapel de Arroz o de ópticaAlcohol isopropílicoRealización de Montaje húmedoTome con una pipeta agua estancada o de solución de tierra de infusoriosColoque la gota de agua estancada o de solución de tierra de infusorios sobre una láminaporta-objetoTome una laminilla cubreobjetos, en posición oblicua, (45 grados) y apoyando una aristasobre la lámina al lado de la gota, déjela caer suavemente.Manejo del microscopioEncienda el microscopioColoque el objetivo de menor aumento 4XBaje la platina completamente girando el tornillo macrométrico. 18
  • 20. Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya debería estar en esascondicionesTome la lámina con la preparación fíjese que esté completamente seca en la parte inferiorColoque la lámina con la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas.Procure que la preparación quede centrada, girando el tornillo para desplazamiento delcarro móvilGire el tornillo macrométrico en sentido contrario a las agujas del reloj para subir la platinahasta el tope. Debe hacerlo mirando directamente y no a través del ocular, ya que se correel riesgo de incrustar el objetivo en la preparación.Cierre o abra el diafragma hasta una posición intermedia, accionando su perilla en sentidocontrario a las agujas del reloj para que la luz no sea ni muy brillante ni demasiado tenue.Inicie la observación con el objetivo de 4X.Mirando a través de los oculares, separe lentamente el objetivo de la preparación con eltornillo macrométrico en sentido de las agujas del reloj.Hasta lograr observar la imagenCuando se observe algo nítida la muestra, gire el tornillo micrométrico hasta obtener unenfoque finoGire el revolverColoque el objetivo de 10XVisualice con el objetivo de 10X y detalle las estructurasGire el revólver y visualice con el objetivo de 40X enfoque con el tornillo micrométrico ydetalle las estructurasDetalle como el campo se reduce y el alga y el protozoo se observan mejor.Observación con el objetivo de inmersión 100XSe utiliza para la observación de muestras fijadas, no para muestras frescas.Coloque el objetivo de inmersión de manera que el orificio de la platina quede entre elobjetivo de 100X y el de 40XSuba totalmente el condensador para ver claramente el círculo de luz que nos indica lazona que se va a visualizar y donde habrá que aplicar el aceiteColoque una gota de aceite de inmersión sobre la preparación en el círculo de luzColoque una lámina coloreada sobre la platinaUbique el objetivo el objetivo de 100xSuba la platina lentamente hasta que la lente toque la gota de aceiteObserve la imagen con aumento de 100XEn esta preparación se muestran eosinófilos un tipo de células sanguíneas coloreados concolorante de WrightLimpie el objetivo de inmersión con un papel especial para óptica y alcohol isopropílicoDeje el objetivo de menor aumento en posición de trabajo.En la siguiente dirección encuentra un excelente ejercicio en línea sobre las partes delmicroscopio y su función.http://personales.ya.com/geopal/g-b_1bach/ejercicios/act10tema6.htmPreguntas adicionales para el informe final2.16 Observe y escriba cuál es el valor de los oculares_________________2.17 Observe y escriba cual es el valor de cada uno de los objetivos_____,____,____,____ 19
  • 21. 2.18 Calcule el aumento logrado para cada objeto observado en su práctica de laboratorio(Al multiplicar el valor del ocular por el valor del objetivo se obtiene el aumento deltamaño del objeto que observamos). 3. Uso del microscopio. Organización del proceso paso a paso Tome una gota de la Colóquela sobre una Retire el exceso muestra de agua lámina portaobjetos, y de agua por los estancada cúbrala con una bordes, usando laminilla. papel absorbente. Observe el Dibuje sus montaje observaciones realizado al anotando el aumento microscopio en utilizado 4x, 10x y 40x.3.1. De la muestra de agua estancada tome una gota y colóquela en una láminaportaobjetos, cubra con una laminilla.3.2 Retire el exceso de agua por los bordes usando papel absorbente.3.3 Observe el montaje realizado al microscopio con aumentos de 4x, 10x y 40x. En elinforme debe incluirse el siguiente cuadro que debe registrar las observaciones realizadas. OBJETO AUMENTO DIBUJO ANÁLISIS YOBSERVADO UTILIZADO CONCLUSIONESAgua 4Xestancada 10X 40X3.4 ¿Qué organismos pueden observarse en la gota de agua estancada?3.5 ¿Son todos de igual tamaño y forma?3.6 ¿Se observan organismos móviles o estáticos?4. Comprobación de los poderes o capacidades del microscopio óptico4.1 Realice un montaje húmedo con la letra asimétrica y obsérvela al microscopio siguiendolos pasos anteriores.4.2 Calcule el aumento del tamaño del objeto observado para cada objetivo del microscopiocon el cual le correspondió trabajar.4.3 ¿Cómo se manifiesta el poder de aumento al observar la letra?5. Realice un montaje húmedo con un centímetro cuadrado de papel milimetrado yobsérvelo al microscopio5.1 Calcule el diámetro del campo de visión para un aumento de 4x en un cuadrado de 1cm de lado de papel milimetrado. 20
  • 22. Para calcular el diámetro del campo de visión para un determinado aumento hay que seguirlos siguientes pasos:a) Recortar un cuadrado de 1 cm de lado de papel milimetrado.b) Ponerlo sobre la abertura central del portaobjetos: c) Observando por el ocular y con el objetivo de 4X, mover la muestra hasta lograr que la línea 0 mm quede en el borde izquierdo del campo visual como se observa en la gráfica d) Enfocar con el objetivo de menor aumento 4X hasta que se vea con claridad. Enfocar la preparación quiere decir situarla a la distancia del objetivo que permite su observación nítida. Esta distancia s e conoce como distancia de trabajo y es tanto menor cuanto mayor es el poder de aumento del objetivo e) Medir el campo visual haciendo coincidir una de las líneas del papel milimetrado con el borde del campo de visión. f) Contar el número de milímetros que se ven (recuerde que la distancia entre dos líneas es un milímetro) y estimar aproximadamente la fracción sobrante, si la hay. El resultado será el diámetro del campo visual para ese aumento (objetivo x ocular).g) Si queremos calcular el diámetro del campo de visión para aumentos mayores, hay quetener en cuenta que cuanto mayor sea el aumento, el campo será menor, es decir, se verámenos de la muestra que estemos observando. De forma que, si el aumento es el doble, elcampo será la mitad, si el aumento es el triple, el diámetro será la tercera parte, etc.(inversamente proporcionales). Por tanto, bastará con realizar un sencillo cálculomatemático para saber el nuevo diámetro.Así se puede calcular los diámetros de objetos microscópicos, células, amibas, vistos.5.2 Calcule el diámetro del campo de visión para aumentos de 10X, 40X del mismocuadrado de 1 cm de lado de papel milimetrado.5.3 Compare la anchura del campo visual con cada uno de los tres objetivos5.4 ¿Con cuál objetivo el campo de visión es mayor con el de mayor o menor aumento?6. Realice un montaje húmedo con tres hebras de hilo superpuestas y obsérvelas almicroscopio6.1 Para las muestras de la letra, la hebra de hilo observadas determine: 21
  • 23. a. ¿Cómo se manifiesta el poder de resolución? b. ¿Cómo se manifiesta el poder de aumento? c. ¿Cómo se manifiesta el poder de definición? d. ¿Cómo se manifiesta el poder de penetración o profundidad?6.2 ¿Cuál es la utilidad del microscopio?6.3 ¿En qué montaje se observó mejor el poder de penetración?7. Comprobación de los principios ópticos del microscopioDespués de observar la letra asimétrica, Conteste las siguientes preguntas:7.1 ¿Al observar la letra asimétrica: ¿Se ve invertida, o en la misma posición en que estaríasi se viera a simple vista? ¿Parece como si se viera por un espejo?7.2 ¿Al mover la preparación hacia la derecha. ¿Hacia dónde se mueve la imagen?7.3 ¿Al alejara el portaobjeto o la muestra de usted hacia donde se nueve la imagen?7.4 ¿Si la distancia focal es mayor el tamaño del objeto es mayor o menor?8. Tome la lámina con el extendido coloreado y obsérvela en el microscopio enfocandoprimero con el objetivo de 10x, luego ponga una gota de aceite de inmersión sobre elextendido y ubique el objetivo de 100x.Describa los detalles observados con cada objetivo.Al finalizar el trabajo deje el microscopio en su correcta posición, limpie los objetivos,colóquele la funda y guarde en su puesto. Al terminar de desarrollar las prácticasusted debe ingresar al foro colaborativo del curso y participar con sus 4compañeros de grupo colaborativo en la elaboración del informe de laboratoriorespondiendo a las anteriores preguntas compare las respuestas de los 5integrantes y consolídelas en un solo documento que enviarán al foro para laretroalimentación y calificación por parte de su tutor. Laboratorio 3: La Célulavídeo Célula parte 1Vídeo Célula parte 2OBJETIVOS:  Describir las diferentes formas y tamaños de las células  Identificar las diferentes estructuras y organelos que posee una célula, con base en la capacidad de ampliación del microscopio óptico.  Describir las diferentes formas y tamaños de una célula  Señalar las diferencias fundamentales entre una célula animal y una vegetal  Reconocer que una célula puede constituir un organismo.Marco Teórico: Módulo de Biología, Unidad 1, lecciones 7 a 10MATERIALES QUE DEBEN LLEVAR: 22
  • 24. Bulbo de cebolla Allium cepaPapaTomateHojas de ElodeaLaminas portaobjetos y LaminillasCuchilla o bisturíPinzaTijeras pequeñashisoposMATERIALES QUE LE SERÁN SUMINISTRADOS EN EL LABORATORIO:1 caja de petriAguja o asa rectaAlgodónAlcoholLancetasLugolSolución salinaAcetocarminAzul de metilenoSafraninaColorante de WrightMicroscopioCuestionario a resolver para el pre-informeEstablezca claramente y de forma gráfica las diferencias entre célula procariota yeucariota, entre una célula animal y vegetal. (la representación gráfica puede realizarla demanera creativa)Defina el concepto de tejido, y explique la función del tejido Epidérmico, Parenquimático,Epitelial, SanguíneoPara cada una de las observaciones realice un esquema o diagrama de flujo en ordenrigurosoPROCEDIMIENTOObservación de tejido epidermal de cebollaElabore un montaje de tejido epidermal de bulbo de cebolla y obsérvelo al microscopio.Responda como mínimo las preguntas consignadas en la orientación para descripciónanálisis y conclusiones.1. Tome la cebolla y corte con el bisturí un pedazo de bulbo, levante suavemente con unapinza una capa delgada y transparente de la parte interna, este es el tejido epidermal.2. Levante suavemente con la pinza una capa delgada y transparente de la parte interna,éste es el tejido epidermal. Divida el tejido que obtuvo en dos partes de 3-4 mm.3. Coloque una gota de agua sobre la lámina portaobjetos y con ayuda de una aguja dedisección extienda sobre ella una parte de la epidermis, teniendo cuidado que la caraexterna quede hacia arriba y sin dobleces. Cubra el preparado con una laminilla. 23
  • 25. 4. Coloque sobre en otra lámina una gota de lugol y la otra parte del tejido epidermal. Dejeactuar el colorante lugol durante 5 minutos. Acerque una laminilla, en posición oblicua, yapoyando una arista sobre la lámina al lado de la gota, déjela caer suavemente sobre lagota.7. Enseguida proceda a la observación de las preparaciones con pequeño aumento de 10x.8. A continuación revise las preparaciones con el objetivo de 40x.Tenga en cuenta que laspropiedades ópticas de los organelos son similares, por lo tanto se hace difícil distinguirunos de otros. Sin embargo las propiedades químicas de los organelos son diferentes, poresto, reaccionan de distinta forma ante determinados colorantes. Al utilizar Lugol sepueden distinguir mejor algunas estructuras celulares.9. Anote y dibuje sus observaciones. Tenga en cuenta las diferencias observadas en lalámina con agua y la lámina con lugol.Orientación para la descripción, análisis y conclusiones de las observaciones1. Dibuje en su formato 2 o 3 de las células que forman el tejido epidermal de lacebolla. Reconozca sus partes y señálelas mediante flechas con nombres, conteste lassiguientes preguntasa. ¿Qué forma tiene las células de este tejido?b. ¿Qué estructuras se observan en el montaje húmedo (agua) en 40X?c. ¿Qué conclusiones puede sacar de la utilización de diferentes aumentos?d. ¿Al hacer el montaje con tinción (lugol), que sucede, qué organelos se colorean?e. ¿Qué ventajas tiene el utilizar colorante? ¿Qué desventaja?f. ¿Qué función cumple el tejido epidermal?Observación de tejido parenquimatoso en un corte transversal de papaElabore un montaje para observación del tejido parenquimatoso en un corte transversalde papa:1. Tome el bisturí y haga un corte transversal de la papa, este corte debe ser tan fino quela apariencia de la porción que obtenga sea transparente.2. En una caja de petri con agua, enjuague el corte para sacar el exceso de almidón,contenido en las células de los tejidos de la papa.3. Elabore dos montajes húmedos uno con una gota de agua y otro con una gota de lugol.4. Observe con el objetivo de 10x. Anote y dibuje sus observaciones5. Observe el montaje con el objetivo de 40x.Observación, descripción, análisis y conclusiones2. Dibuje en su formato 2 o 3 de las células que forman el parénquima de la papa.Reconozca sus partes y señálelas mediante flechas con nombres, conteste las siguientespreguntasa. ¿Qué forma tiene las células de este tejido?b. ¿Qué estructuras se observan en el montaje húmedo (agua) en 40X?c. ¿Al hacer el montaje con tinción (lugol), que sucede, qué organelos se colorean?¿De qué color? ¿Por qué?d. ¿Qué función cumple este tejido?Observación de tejido epidermal y parénquima clorofílico en hoja de Elodea 24
  • 26. Para observación de tejido epidermal y parénquima clorofílico utilice una hoja de Elodea:1. Tome con la pinza una ramita de Elodea y corte con las tijeras una hojita.2. Extiéndala sin invertirla sobre una lámina portaobjetos, adicione una gota de agua ycúbrala con una laminilla.3. Observe detenidamente a través del microscopio con aumento 10x, 40x. Ponga atención al movimiento del citoplasma. Anote y dibuje sus observacionesObservación, descripción, análisis y conclusionesDibuje en su formato 2 o 3 de las células que forman el tejido. Reconozca sus partes yseñálelas mediante flechas con nombres. Indique mediante Flechas el movimiento delcitoplasma. Conteste las siguientes preguntas a. ¿Qué forma tiene las células de este tejido? b. ¿Qué estructuras se observan con el objetivo 40X? c. ¿Qué función cumplen los cloroplastos? d. ¿Qué es Ciclosis? ¿Por qué se realiza? e. ¿Qué es presión de turgencia? f. ¿Qué es ósmosis?Observación de cromoplastos en pulpa de tomatePara continuar realice un montaje con pulpa de tomate e identifique los cromoplastos:1. Con una hoja de afeitar o bisturí, haga una incisión y separe la cáscara.2. Extraiga una pequeña porción de pulpa con el extremo de una aguja y espárzalo sobreun porta objetos seco. No adicione agua.3. Coloque encima un cubreobjetos y comprima suavemente con los dedos hasta obtenerun completo aplastamiento del fragmento de pulpa de tomate.4. Identifique las células con el objetivo de 10X5. Seleccione el mejor grupo de células y luego pase al objetivo de 40x. Anote y dibuje sus observacionesObservación de células escamosas epiteliales1. Coloque una pequeña gota de solución salina en el centro del portaobjetos.2. Con un palillo raspe suavemente el interior de su mejilla, de abajo hacia arriba.3. Coloque el producto de este raspado en la gota de solución salina.4. Coloree con una gota de acetocarmin, azul de metileno o safranina.6. Coloque el cubre objetos y observe al microscopio con objetivo de 10x y 40x e identifique las células de forma irregular. ¿Qué forma tiene estas células? ¿Qué organelos se observan con el aumento de 10X y 40X?. Al aplicar colorante qué organelos se observan mejor? ¿Cuál es la función del tejido epitelial? Anote y dibuje sus observacionesObservación de células sanguíneasA continuación realice un extendido para observación de células sanguíneas:1. Desinfecte con un algodón humedecido en alcohol la punta del dedo anular o índice, deje secar el alcohol y con la lanceta, haga una punción en la yema del dedo. 25
  • 27. 2. Coloque una pequeña gota en una lámina portaobjetos limpia y seca.3. Coloque otra lámina en ángulo agudo sobre la primera, acérquela a la sangre y deslice suavemente en forma continua hasta formar una capa o frotis delgado.4. Deje secar la preparación al medio ambiente.5. Una vez seca la lamina aplique sobre el frotis el colorante de Wright y déjelo actuar durante cuatro minutos. Con este procedimiento el colorante fijará la preparación.6. Lave el exceso de colorante con agua de la llave y deje secar la lámina verticalmente.7. Observe al microscopio con el objetivo de pequeño y mediano aumento e identifique los glóbulos rojos, leucocitos y plaquetas.8. Posteriormente observe la preparación con el objetivo de 100X y detalle la forma de los eritrocitos, plaquetas y neutrofilos. ¿En cuáles de estas células no se encuentra núcleo? ¿Cuáles aparecen más frecuentemente? Identifique las células sanguíneas teniendo en cuenta la forma, ausencia o presencia de gránulos en el citoplasma, coloración que toman los gránulos y forma del núcleo. ¿Qué función cumplen cada una de estas células? Anote y dibuje sus observaciones Formato de observaciones OBJETO AUMENTO DIBUJO ANÁLISIS Y OBSERVADO UTILIZADO CONCLUSIONESConclusiones:Deben estar relacionadas con la diferencia entre las células epidérmicas vegetales yparenquimatosas vegetales; diferencias entre las células animales y vegetales, (formatamaño, distribución, entre otros)Laboratorio 4: Mitosis y MeiosisVideo: mitosis y meiosis parte 1http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_mitosis1.htmVideo: mitosis y meiosis parte 2http://www.unad.edu.co/curso_biologia/video_mitosis2.htmOBJETIVOS:  Manejar correctamente los materiales y reactivos específicos de la práctica.  Identificar cada uno de los periodos que comprende el ciclo celular  Relacionar cada cambio presente en las células meristemáticas, con las diferentes fases de la mitosis.  Reconocer los procesos de la meiosis con base en el material suministrado.Marco Teórico Unidad 1 Capítulo 2 Lecciones 12 a 14MATERIALES QUE DEBEN LLEVARbulbo de cebolla Allium cepa 26
  • 28. BisturíPinzasvaso desechablePalillos grandesTijerasPapel de filtroPortaobjetosCubreobjetosLancetaEsmalte transparenteMATERIALES QUE LE SERÁN SUMINISTRADOS EN EL LABORATORIOPipeta Pasteur, Vaso de precipitadoCubeta de disecciónAceto orceinaEosinaMetanolBisturíPreinforme Defina y explique de manera grafica la mitosis y meiosis, detallando susetapas y las células en las que se presenta este proceso.PROCEDIMIENTO:Para el desarrollo de esta práctica utilice bulbos de cebolla, Allium cepa y realicepreparaciones con la raíz de material fijado y teñido, una vez obtenidos los extendidos decélulas obsérvelos al microscopio óptico.1. Con ayuda de una pinza retire la capa externa marronacea o rosácea y lave conabundante agua, esto se realiza para eliminar restos de sustancias con las quefrecuentemente han sido tratadas para inhibir o retardar la germinación de las raicillas.2. Llene un vaso de precipitados con agua y coloque un bulbo de cebolla sujeto con dos otres palillos de manera que la parte inferior quede inmersa en el agua.3. Póngalo a germinar a 25°C o a temperatura ambiente durante 3 días, al cabo de estosaparecerán numerosas raicillas en crecimiento de unos 3 o 4 cm. de longitud.4. Revise diariamente y procure que la corona no se deseque para lo cual es necesariorellenar con agua cada 24 horas.5. Cuando las raíces tengan entre 0.5 y 1 cm de longitud, realice cortes de raíz deaproximadamente 2 – 3 mm a partir del ápice.6. colóquelas en una lámina portaobjetos. Adiciona una gota del colorante aceto orceina oeosina.7. Coloque el cubreobjetos con mucho cuidado sobre la raíz. Con ayuda de la punta de unalanceta, de unos golpecitos sobre el cubre objetos sin romperlo, de modo que la raízquede extendida.8. Use papel de filtro para retirar el exceso de colorante realice una suave presión,evitando que él cubre objetos resbale. Si la preparación está bien asentada no hay peligrode rotura por mucha presión que se realice.9. Selle todos los bordes del cubre objetos con esmalte transparente, para evitar que seseque y de esta manera conservar la preparación durante varios días.10. Coloque la preparación al microscopio e inicie la observación con el objetivo de 10x eidentifique las células. 27
  • 29. 11. Cambie al objetivo de 40X para detallar las células. Observe los núcleos y cromosomasen color rosáceo – morado.12. Ubique el objetivo de 100 x y anote sus observaciones anotando las diferencias encada uno de los aumentos mencionados.13. Trate de observar detenidamente las preparaciones y distinga células en interfase ycélulas en división y dentro de estas, las diferentes etapas de la mitosisRealice dibujos de lo observado.Para la observación de las diferentes fases de la meiosis trabaje con micropreparados concélulas en proceso de meiosisTrate de observar detenidamente las preparaciones y distinga células en interfase y célulasen división y dentro de estas, las diferentes etapas de la mitosisRealice dibujos de las fases que distinga, tenga en cuenta la posición de los cromosomaspara identificar las fases.INFORME. OBJETO AUMENTO DIBUJO ANÁLISIS Y OBSERVADO UTILIZADO CONCLUSIONES1. Dibuje en su formato 2 o 3 de las células observadas, señalando en el dibujo a quétipo de tejidos pertenecen e identifique lo siguiente.¿Qué etapas de la meiosis y mitosis observo?¿Qué proceso se está desarrollando en las etapas observadas?¿Qué tipo de células se están observando?¿Cuántos cromosomas poseen las células en mitosis?¿Cuántos cromosomas poseen las células en meiosis? Laboratorio 5: Diversidad de MicroorganismosVideo: biodiversidad microbiana parte 1http://www.unad.edu.co/curso_biologia/biodiversidad1.htmVideo: biodiversidad microbiana parte 2http://www.unad.edu.co/curso_biologia/biodiversidad_2.htmDescripciónA través de esta práctica el estudiante podrá realizar una descripción macroscópica de lascolonias bacterianas y de hongos, de microorganismos como protozoos y microalgas,además de adquirir destrezas en técnicas de tinción.OBJETIVOS: 28
  • 30.  Reconocer en placas de cultivo diferentes tipos de microorganismos, en especial Colonias de bacterias y hongos.  Conocer y aplicar la técnica de tinción de Gram  Identificar bacterias Gram positivas y Gram negativas  Observar microscópicamente bacterias con endosporas (Bacillus)  Observar microscópicamente hongos.  Observar microscópicamente levaduras.  Observar microorganismos de fermentación ácido láctica y fermentación alcohólica a partir del kumis o yogurt.  Observar protozoarios y algas en muestras de aguaMarco Teórico: Unidad Capitulo 4 Lecciones 22 a 26MATERIAL SUMINISTRADO MATERIAL QUE SE DEBECultivos de diversos hongos TRAERbacterias en cajas de petri Levadura de panaderíaSolución salina Yogur casero o probióticoAgua destilada Agua estancadaMechero Laminas portaobjetos LaminillasEscobillones Agua azucaradaGotero Tajada de panPapel de filtro Asa recta y de argollaTubo de ensayo Cinta adhesivaVarilla de vidrioMicroscopioColoración de Gram ( cristal violeta, lugol, alcoholacetona y safranina)Verde de MalaquitaSafranina 0.5%LactofenolAzul de MetilenoRojo neutroAlcohol o MetanolPreinforme 1. Defina los principales linajes los organismos. Enriquezca gráficamente su explicación. 2. Complete el siguiente cuadro conceptual. Principales Características Impacto Organismo Tipo de Célula Morfológicas y Hábitat Ecológico Fisiológicas Bacteria Protozoario 29
  • 31. Hongos AlgasPROCEDIMIENTO:Entre los principales grupos de microorganismos se encuentran: bacterias, hongos, algas yprotozoarios.Observación macroscópica de colonias1. Realice una descripción macroscópica de las colonias bacterianas y de hongosentregadas en las cajas de Petri. Haga un cuadro donde describa la forma (puntiforme,circular, rizoide, irregular y filamentosa), el borde (entero, ondulado o filamentoso), laelevación (plana, elevada, convexa, crateriforme y acuminada) y la superficie (lisa orugosa, mate o brillante, seca o cremosa, invasiva o superficial).Dibuje en su formato 2 o 3 de las colonias observadas, señalando en el dibujo a que tipo deorganismo pertenece e identifique lo siguiente.¿Qué forma tienen las colonias célulares observadas? ¿Cuál es su color?¿Qué forma tienen las colonias observadas (puntiforme, circular, rizoide, irregular yfilamentosa), ¿Cómo es el borde de la colonia (entero, ondulado o filamentoso)¿Cómo es la elevación (plana, elevada, convexa, crateriforme y acuminada)¿Cómo es la superficie (lisa o rugosa, mate o brillante, seca o cremosa, invasiva osuperficial) Colonia Forma Borde Elevación SuperficieCOLORACION DE GRAMA partir de una de las colonias de los cultivos dados realice un frotis de la siguientemanera:1. Tome una lamina portaobjetos limpia y en ella coloque una gota de solución salina.2. Con un asa previamente esterilizada a la llama del mechero, obtenga una pequeñamuestra de las colonias observadas. Mézclela en la gota de solución salina que coloco enel portaobjetos.3. Déjela secar al aire libre y fíjela pasándola por la llama del mechero.Posteriormente proceda a colorear con la tinción de gram de la siguiente manera:4. Cubra la preparación con cristal violeta y déjela actuar por 1 minuto. Lave con aguacorriente.5. Cubra la preparación con lugol y déjelo actuar por 1 minuto. Lave con agua corriente. 30
  • 32. 6. Agregue alcohol acetona y déjelo actuar por 5 segundos. Lave con agua corriente.7. Adicione safranina y déjela actuar por 30 segundos. Lave con agua corriente y ponga asecar la lámina.8. Ubique la lámina en el microscopio, localice las bacterias con el objetivo de menoraumento y observe en detalle a mayor aumento.9. Identifique las células observadas. Anote sus observaciones.BACTERIAS DE LA CAVIDAD BUCAL1. Prepare una lámina portaobjetos limpia y sin grasa.2. Tome un escotillón desechable, páselo por el borde de la encía en la parte que hacecontacto con los dientes.3. La muestra extraída con el escotillón colóquela sobre una lámina portaobjetos.4. Deje secar por sí sola la lámina durante unos minutos con el fin de definir el frotis.5. Pase lentamente el portaobjetos a través de la llama del mechero, con esto se fija elfrotis.6. Deje enfriar y coloree con la tinción de Gram como se indicó anteriormente.7. Deje secar la lámina y ubique las células con el objetivo de menor aumento y luegoobserve con el objetivo de inmersión.8. Tenga en cuenta que las bacterias Gram positivas toman coloración violeta y las Gramnegativas coloración roja. Anote sus observaciones.BACTERIAS DEL YOGUR1. Tome una lámina portaobjetos y en ella coloque una gota de agua destilada.2. Con un asa de argolla, obtenga una gota de yogur y mézclela con la gota de aguacolocada en el portaobjetos.3. Deje secar completamente la lámina. Pásela 3 veces por la llama del mechero. Tengacuidado de no sobre calentar la muestra.4. Cubra la preparación con alcohol o metanol por unos segundos para eliminar la partegrasa.5. Escurra el alcohol y deje secar al aire. Luego cubra el extendido con azul de metilenodurante 2 minutos. Lave el exceso de colorante y deje secar.6. Enfoque el microscopio con el objetivo de mayor aumento e identifique los estreptococosy los lactobacilos. Anote sus observaciones.Dibuje en su formato 2 o 3 de las células observadas, señalando en el dibujo a qué tipo deorganismo pertenece e identifique lo siguiente.a. ¿Qué tipo de microorganismos se observan?b. ¿Cómo se denominan las bacterias según su forma?c. ¿Cómo se clasifican las bacterias según la manera de agruparse?d. ¿Qué color toman las bacterias de acuerdo a la coloración de gram?OBSERVACION DE MOHOS1. Prepare una solución de agua azucarada y agregue 20 gotas de esta a una tajada depan, déjela por espacio de media hora al aire libre.2. Almacénela en una bolsa plástica y ciérrela. Guárdela en un lugar oscuro a 30°C yobsérvela diariamente. 31
  • 33. 3. Cuando el pan esté enmohecido, coloque en un portaobjetos una pequeña gota desolución de lactófenol.4. Luego con un trozo de cinta adhesiva transparente de aproximadamente 2 cm toque lasuperficie del pan enmohecido.5. Pegue la cinta adhesiva sobre la gota del portaobjetos.Elimine el colorante sobrante con un papel de filtro.6. Observe al microscopio con objetivo de 40X e identifique el micelio y las hifas.El procedimiento anterior también puede hacerlo con frutas u hortalizas dañadas quepresenten en su superficie mohos. Anote sus observaciones.OBSERVACION DE LEVADURAS1. Tome un poco de levadura de panadería y colóquela en un tubo de ensayo quecontenga agua con azúcar.2. Incube a 37°C durante 15 minutos esto producirá el desarrollo de las levaduras.3. Con una varilla de vidrio tome una gota del cultivo anterior y extiéndala en elportaobjetos. Deje secar al aire4. Adicione dos gotas de azul de metileno y deje actuar durante tres minutos5. Coloque una laminilla y elimine el exceso de colorante con papel de filtro.6. Observe al microscopio e identifique las levaduras por su forma ovalada.Observe que algunas presentan gemaciones. Anote sus observaciones.BACTERIAS DEL SUELO1. Entierre horizontalmente un portaobjetos en la tierra de una maceta o de un jardín,déjela allí durante 5 días.2. Transcurrido este tiempo saque la lamina y fíjela pasándola tres veces por la llama delmechero.3. Limpie los bordes del portaobjetos y la parte que no va a teñir.4. Luego coloree la lamina con safranina al 0.5% durante 1 minuto. Lave el exceso decolorante y deje secar.5. Observe al microscopio con el objetivo de mayor aumento y anote sus observaciones.ALGAS Y PROTOZOOS1. Tome una muestra de agua estancada con un cuentagotas y deposítela en el centro deun portaobjetos. Coloque un cubreobjetos.2. Observe la preparación al microscopio. Mueva lentamente la preparación, e identifiquelas algas y los protozoos.3. Añada unas gotas de rojo neutro por el borde del cubre para que penetre en lapreparación y puedas ver los microorganismos, que por su transparencia son difíciles deobservar.4. Anote sus observaciones.CONTENIDO DEL INFORME:  portada 32
  • 34.  objetivos  diligenciamiento de los formatos para cada uno de los diagramas: FORMATO #1bacterias tinción Enfoque Enfoque forma Gran Gram Observaciones 40X 100X (-) (-) FORMATO #2hongos tinción Enfoque Enfoque Estructuras nombre Observaciones 40X 100X FORMATO #3levaduras tinción Enfoque Enfoque Reproducción Observaciones 40X 100X(Utilice lápices de colores)  Análisis de resultados  conclusiones  bibliografíaOBSERVACION DE ESPORASA partir del cultivo en caja de petri marcado como Bacillus, prepare un extendido delmicroorganismo.1. Fije por calor y cubra todo el portaobjetos con una solución de verde de Malaquita.2. Caliente hasta emisión de vapores y siga dicho calentamiento durante 3 minutos.3. Lave con agua y cubra con solución de safranina. Deje actuar 30 segundos. Lave conagua y deje secar la lámina.4. Enfoque con el objetivo de inmersión y observe los bacilos y en su interior las esporasubicadas en un extremo. Anote sus observacionesLaboratorio 6: Tejidos VegetalesLaboratorio 6: Tejidos Vegetales 33
  • 35. º Vídeo: tejidos vegetalesDescripciónEsta práctica permite a los estudiantes comprobar la diversidad y especuialización de lostejidos vegetales , además de adquirir la habilidad para realizar cortes a mano alzadaOBJETIVOS:  Comprobar la diversidad y especialización de las células vegetales y sus agrupaciones en tejidos.  Adquirir habilidad en la elaboración de cortes a mano alzada y en coloración  Agudizar el sentido de la observación de las estructuras vegetales, aspecto importante para comprender la morfología vegetal.MATERIALES QUE DEBEN LLEVARHoja de lirioHoja de olivoHoja de ElodeaRama de hiedraBulbo de cebollaTomatePapaPeraRaíces de cebollaLápiz de madera de cedroBisturí o cuchillaPinzaLáminas portaobjetos y LaminillasMATERIAL SUMINISTRADOFluoroglucinaAcido clorhídricoVerde brillanteMicroscopio 34
  • 36. PROCEDIMIENTO:En esta práctica observe a través del microscopio la morfología de los distintos tejidosvegetales.TEJIDO PROTECTOR1. Tome una hoja de lirio y con un bisturí haga una pequeña incisión en el limbo2. Con ayuda de una pinza levante la capa externa para obtener una lámina fina.3. Coloque la lámina fina obtenida en el portaobjetos y agregue una gota agua.4. Enfoque al microscopio con objetivo de 10x y 40x. Identifique los ostiolos y loscloroplastos. Anote sus observaciones.Observe otro ejemplo de tejido epidérmico realizando un montaje con cebolla como seexplico en la práctica de la célula.Observe al microscopio con el objetivo de menor aumento e identifique la forma de lascélulas epiteliales. Con el objetivo 40X identifique los nucleolos.Otro ejemplo de tejido protector puede observarlo en la hoja de olivo.Raspe el envés de una hoja de olivo.Coloque el raspado en una lámina y adicione una gota de agua.Observe los pelos escamiformes con forma de sombrilla. Anote sus observacionesTEJIDO PARENQUIMÁTICO DE ALMACENAMIENTO.Realice un montaje con pulpa de tomate como se explicó en la práctica de la célula.Observe al microscopio y anote sus observaciones.Realice un montaje con el raspado de papa como se indico en la práctica de la célula.Observe al microscopio y anote sus observaciones.Realice un montaje con la hoja de Elodea como se indico en prácticas anteriores. Observeal microscopio y anote sus observaciones.TEJIDOS MECÁNICOS O DE SOSTÉN.Raspe con un cuchillo o bisturí una parte pequeña de mesocarpio de pera y colóquela enun portaobjetos.Cubra la muestra con fluoroglucina durante 2 minutos.Elimine el exceso y cubra con ácido clorhídrico. 35
  • 37. Coloque una lámina portaobjetos y observe el microscopio con objetivo de 40x. Anote susobservaciones.TEJIDOS CONDUCTORESRealice un corte longitudinal y fino de un lápiz de madera de cedro. Coloque las virutas enun portaobjetos, adicione agua. Coloque una laminilla y observe al microscopio.Realice finos cortes perpendiculares del pecíolo de la hiedra, a la dirección del tallo;mínimo cuatro cortes.Deposítelos en una lámina y adicione verde brillante durante 5 minutos. Lave con aguacorriente.Cubra la lámina con fluoroglucina durante 2 minutos.Transcurridos los 2 minutos elimine el exceso de colorante.Cubra con ácido clorhídrico, coloque un cubreobjetos y observe al microscopio. Anote susobservaciones.TEJIDO MERISTEMATICORealice un montaje con la raíz de la cebolla como se indico en la práctica de mitosis.Observe las células que se encuentran en mitosis. 36
  • 38. AnexoOrientaciones para la descarga de los videosApreciados estudiantes para que no tengan dificultades para ver los videos en línea, los hesubido a un sitio Web desde el cual los pueden descargar y guardar en su computador yasí los pueden observar sin necesidad de internet. Solo deben tener flash que ya todos loscomputadores lo traen.1. Para descargar el video de normas de seguridad en el laboratorio deben entran a estadirección http://www.4shared.com/file/N9heZ5gz/NORMASB.html2. dar clic en descargar ahora (ver pantallazos)3. Dar clic para descargar este archivo ahora 37
  • 39. 4. Guardar el archivo del video en su computador2. A continuación las direcciones para descargar los demás videos:Microscopio parte 1 http://www.4shared.com/file/QLGjS_x3/MICROSCOPIO1.htmlMicroscopio parte 2 http://www.4shared.com/file/a5V8jaL-/MICROSCOPIO2.htmlLa célula parte 1 y 2 http://www.4shared.com/file/cjFouFzX/CELULA3F.html 38
  • 40. Los microorganismos parte 1 y 2http://www.4shared.com/file/srcfinxo/MICROORGANISMOS.htmlMitosis 1 parte http://www.4shared.com/file/5SjzDkSJ/MITOSIS_1.htmlMitosis 2 parte http://www.4shared.com/account/file/__h3_PdC/MITOSIS_2.htmlTejidos vegetales http://www.4shared.com/file/e_Gw7Jl7/TEJIDOSV.htmlQuienes quieran descargar el simulador de microscopía y practicar en él pueden hacerlo enesta dirección:http://www.4shared.com/file/D4dxxdnY/Simulador_microscopa.htmlEste archivo está comprimido con Winrar deben descargarlo, guardarlo en su PC y luegodescomprimirlo.Si quieren descargar el curso completo con videos y animaciones pueden hacerlo desdeesta direcciónhttp://www.4shared.com/file/H7lcGfwu/sitiocursohipermedia.htmlNo deben borrar ningún archivo abren la carpeta sitiocursohipermedia y dan clic en elarchivo index 39

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