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Reporte #3

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  • 1. CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLOGICO INDUSTRIAL y de SERVICIOS 236 REPORTE DE PRÁCTICA #3: PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO SUBMODULO 3:EJECUTA TECNICAS DE IDENTIFICACION DE MICROORGANISMOS CON BASE EN LAS NORMAS. ALUMNA: LESLIE SUSANA GARZA MARTINEZ MAESTRA: ING. ILEANA PEREZ NAVARRO FECHA DE INICIO-ENTREGA: 05/09/2011 – 19/09/2011
  • 2. PRACTICA #3: PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO Objetivo: Aprender ¿Qué es un medio de cultivo? ¿Qué condiciones y nutrimentos debe de contener?, ¿vcomo se realiza?, aplicar los conocimientos quehemos aprendido en las anteriores practicas ¿Cuál es el control que debe de tener? ANTECEDENTES.Las bacterias u otros microorganismos que se desarrollan en medios delaboratorio, se llaman cultivos. Las diferentes especies de bacterias que sedesarrollan en la misma clase de medios de cultivo pueden tener aspectos muydiferentes, y por tanto, el conocimiento de las características de cultivo de lasespecies es útil para reconocer a ciertos tipos de bacterias. Las bacterias debenser obtenidas en cultivo puro para determinar las características del cultivo ocualquier otra propiedad de las especies.Para estudiar debidamente los microorganismos se necesita como requisito previoel cultivarlos en condiciones de laboratorio. Para lograr esto es preciso conocercuáles son los nutrientes y las condiciones físicas que requieren. Medianteinvestigaciones extensas se han determinado las necesidades nutricionales de lasbacterias, y esta información ha sido la causa del desarrollo de numerosos mediosde cultivo. Ya que las necesidades nutricionales de las bacterias varían de maneramuy amplia, existen diferencias muy importantes en cuanto a la composición delos medios empleados. Las bacterias también tienen diferencias notables en loque respecta a las condiciones del ambiente que favorece su proliferación.Desde los hombres hasta los microorganismos tienen en común determinadasnecesidades nutricionales en términos de necesidades químicas para llevar a cabosu crecimiento y sus funciones normales. 1. Todo organismo vivo necesita una fuente de energía. 2. Todo organismo vivo necesita obtener carbono de una manera. 3. Todo organismo vivo necesita obtener nitrógeno de alguna manera. 4. Todo organismo vivo necesita azufre y fosforo. 5. Todos los organismos vivos necesitan de varios metales como Na, K Ca, Mg, Mn, Fe, Zn, Cu, P, Co, para que puedan crecer normalmente. 6. Todo organismo vivo tiene vitaminas y compuestos vitaminados. 7. Todos los organismos necesitan agua para su crecimiento.
  • 3. Se necesita de un gran número de sustancias químicamente puras paracultivar bacterias que tengan necesidades nutricionales como los lactobacilos.Aunque para el cultivo de bacterias heterótrofas en laboratorios de rutinageneralmente se basan en medios de cultivo sintéticos. Se usan ciertosmateriales crudos como peptonas, extracto de carne y extracto de levadura yasí el medio de cultivo que se obtiene hace posible el desarrollo de granvariedad de bacterias y otros microorganismos. Cuando se desea un mediosolido se toma un agar como agente solidificante. A partir de estos ingredienteses posible preparar un medio capaz de permitir el crecimiento de muchasbacterias heterótrofas.TIPOS DE MEDIOSSe necesitan muchos medios de cultivo elaborados para propósitos especialesque facilitan la identificación, aislamiento y cuantificación de ciertos tipos debacterias. A los medios de cultivo se les puede clasificar de la siguientemanera:Medios Enriquecidos: la adición de componentes como sangre, suero oextractos de tejidos de animales y plantas al caldo nutritivo o agar, lesproporciona sustancias nutritivas complementarias para que el medio puedasoportar el crecimiento de los heterótrofos exigentes.Medios Selectivos: la adición de agar nutritivo de ciertas sustancias químicasespecificas, no permitirá el desarrollo de un grupo de bacterias, sin inhibir almismo tiempo el crecimiento de otros grupos.Medios Diferenciales: la adición de ciertos reactivos o sustancias químicas alos medios de cultivo trae como resultado determinado tipo de crecimientobacteriano o de cambios, lo cual permite al observador diferenciar distintostipos de bacterias. El medio agar-sangre sirve simultáneamente como mediode enriquecimiento y diferencial.Medios de Prueba: para el ensayo de vitaminas, aminoácidos y antibióticos, seutilizan medios de cultivo de composición conocida. Asi mismo, se recurre amedios de composición especial para probar desinfectantes.Medios para Cuenta de Bacterias: para determinar el contenido bacteriano desustancias tales como la leche y el agua. Se debe señalar su formula asi comolas especificaciones prescritas.Medios para Caracterizar Bacterias: para determinar el tipo de crecimientoproducido por los organismos, asi como la capacidad de las bacterias paraproducir cambios químicos.
  • 4. Medios de Mantenimiento: para preservar satisfactoriamente las característicasfisiológicas y la viabilidad de un cultivo. El crecimiento rápido y prolífico sueleocasionar la muerte rápida de las células.PREPARACION DE LOS MEDIOS.Para el cultivo de las bacterias se recurre a algunas sustancias naturalescomunes. Los materiales, en su forma natural, no presentan ningún problemapara tomarlos como medios de cultivo ya que simplemente se depositan dentrode los envases adecuados tales como tubos de ensayo, o matraces, los cualesdeberán ser esterilizados antes de utilizarlos. Los medios que se preparan deltipo agar o caldo nutritivos, se hacen mezclando los ingredientes individualesnecesarios. En la preparación de medios de cultivo, se deben seguir lossiguientes pasos: 1. Cada ingrediente se debe disolver en un volumen adecuado de agua destilada. 2. Se determinara el pH del medio y si es necesario se ajustara. 3. El medio se pondrá en recipientes adecuados como tubos, matraces, botellas, cuyas bocas se cierran con tapones de algodón, plástico o cubiertas de metal. 4. Los medios se esterilizan generalmente en autoclave.Para obtener un buen desarrollo de las bacterias, el trabajador de laboratoriodeberá: a) Inocular las bacterias en un medio de cultivo que tenga los nutrientes necesarios. b) Incubar el medio ya sembrado en condiciones físicas apropiadas.
  • 5. MATERIALES Instrumentos: Estufa de cultivo Autoclave Baño maría Contador de colonias Quebec Balanza Analítica Materiales: Caja Petri (5) Matraz Erlen Meyer Probeta Mechero bunsen Trípode Triangulo de porcelana Espátula acanalada Guante de asbesto Materiales Auxiliares: Papel estraza Algodón Aluminio Cinta testigo Gasas Agua destilada cubreboca NORMAS QUE SE APLICANNOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002-Proteccion Ambiental- ResiduosPeligrosos Biológico-Infecciosos (RPBI): Utilizamos esta norma ya queempleamos diferentes técnicas de protección contra los residuospeligrosos. DESARROLLO:1. Lavar y desinfectar la mesa de trabajo.2. Lavar, escurrir y acondicionar el material a usar.
  • 6. 3. Hacer un pequeño platillo con papel aluminio para pesar, según las instrucciones.4. Anotar los datos de la etiqueta del frasco del medio de cultivo a preparar: Nombre del medio: Agar Método Estandar Tipo de medio (para que tipo de microorganismos se recomienda): Recuento con placa de bacterias en microbiología sanitaria. Método de preparación: agar en placa Ingredientes: peptona de capseína, extracto de levadura, dextrosa, agar Condiciones de esterilización: esterilización a vapor de 115 – 120°C5. Realizar los cálculos de acuerdo al medio de cultivo a preparar así como a la cantidad a preparar, según la explicación dada por el facilitador. Considerar la capacidad de los materiales a usar (cajas petri; 100, 70 y 30 ml). A.M.E. (Agar Método Estándar). 5 Cajas Petri (Grandes). 23.5gr. ------------> 1000ml X gr. ------------> 180 ml Xgr. = (23.5gr.) (180ml) 1000ml Xgr. = 4230 1000ml Xgr. = 4.23gr. 4.23gr. ------------> 180 ml6. Pesar y disolver el agar en agua destilada, calentar con agitación hasta disolución completa.7. Tapar el matraz y acondicionarlo adecuadamente.8. Esterilizar el medio de cultivo preparado (según las condiciones marcadas en la etiqueta) y las cajas petri previamente acondicionadas.9. Colocarse el cubreboca y asegurar que la bata este debidamente cerrada. Sacar el material del autoclave.
  • 7. 10. Preparar la mesa donde se trabajara, es decir donde se verterá el medio a las cajas petri (usar cubreboca en este proceso).11. Quitar el papel estraza y abrir con cuidado la caja petri cerca de un mechero de bunsen y agregar el agar, volver a tapar el matraz, tener precaución para que el medio no toque la tapa de la caja petri, si no se corre el riesgo de contaminación.12. Dejar que el medio solidifique por un tiempo (20 min. Aprox.).13. Después sellar los bordes de la caja con cinta para que no se abra por algún descuido.14. Colocar en la estufa de cultivo, una placa testigo, y una placa (invertida) por alumno, a 37°C por 12 horas.15. Al siguiente dia checar si hubo crecimiento por medio del contador de colonias Quebec. Se debe esperar que las placas no presenten crecimiento, es decir que no presenten cambios de color, olor y aspecto, esto denotara un crecimiento negativo; en caso contrario será considerado como un crecimiento positivo, de ser asi deberá observarse y anotarse la morfología de las colonias de acuerdo al siguiente esquema(*).16. Si los resultados fueron negativos, colocar invertidas las placas por equipo dentro de una bolsa de plástico y guardarlas en el refrigerador colocando en la etiqueta; # de equipo, nombre del medio de cultivo, y fecha de preparación. RESULTADOS: TABLA DE RESULTADOS DE “PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO”. Esta tabla proporciona la información por equipo, si la preparación del medio de cultivo se realizo correctamente (no hubo crecimiento = negativo), o si no se realizo correctamente (hubo crecimiento = positivo). Número de placa Crecimiento No hubo Características (que después de crecimiento morfológicas. corresponderá al incubación después de la E = elevación nombre de quien (POSITIVO) incubación F = Forma la realizo). (NEGATIVO) B = Borde P = Pigmentación 1. Ana carlota ● E = Plana F = Irregular B = Ondulado P = Blanco 2. Liliana Yaneth ● E = Plana F = Circular B = Liso P = Blanco 3. Carlos Alberto ● E = Plana F = Circular y Punteada
  • 8. B = Liso P = Blanco 4. Néstor ● E = Plana F = Circular B = Ondulado P = Blanco 5. Leslie Susana ● E = Umbilicada F = Irregular B = Filamentoso P = BlancoAgregar en una esquina una columna que contenga hora de incubacion ytemperatura de incubación.ESQUEMA (*) COLONIAS DE BACTERIAS:
  • 9. CONCLUSIONES: La practica abarco algunas sesiones de clase, Nos costó un poco de trabajo realizarla y tuvimos algunos contratiempos e incidentes pero pues aprendí apreparar el medio de cultivo en placa que parecía sencillo pero no fue tan fácil, al final revisamos nuestros medios y algunos salieron contaminados, como por ejemplo el mío y ahí fue cuando me di cuenta de que no hice la practica correctamente pero iremos perfeccionando nuestra técnica con el paso del tiempo ya que será un trabajo rutinario. También algo muy importante es quepara preparar los medios de cultivo se necesita de mucha limpieza, ya que de lo contrario todo saldrá mal.
  • 10. CUESTIONARIO:1. Define el término medio de cultivo? Las bacterias u otros microorganismos que se desarrollan en medios de laboratorio, se llaman cultivos.2. Que es un cultivo mixto? Es aquel que contiene dos o más sepias de organismos.3. Que es un cultivo puro? Representa las condiciones artificiales para el desarrollo de las bacterias y otros microorganismos y las condiciones impuestas a los microorganismos mediante el manejo del laboratorio.4. Cual es la clasificación que se hace de los tipos de medios de cultivo? Medios Enriquecidos; Medios Selectivos; Medios Diferenciales; Medios de Prueba; Medios para Cuenta de Bacterias; Medios para Caracterizar Bacterias; Medios de Mantenimiento.5. Complementa el cuadro que se presenta a continuación, especificando cuales son las características de varios materiales que se usan como ingredientes en los medios de cultivo. Material Crudo Características Valor nutritivo Extracto de carne Extracto acuoso de Contiene las sustancias carne magra de res solubles en agua de concentrado en pasta. tejidos animales, entre ellas carbohidratos, compuestos orgánicos nitrogenados, vitaminas solubles en agua y sales. Peptona Es el producto que Fuente principal de resulta de la digestión nitrógeno orgánico; de materiales puede contener proteínicos. La digestión también algunas del material proteínico vitaminas y algunas se efectúa con ácidos y veces carbohidratos, enzimas: sirven para esto en relación a la hacer medios de cultivo clase de material bacteriológicos, proteico digerido. diferentes tipos de peptona. Existen diferencias en las peptonas en cuanto a su propiedad para permitir el crecimiento bacteriano. Agar Carbohidratos Se usa como agente complejos obtenidos de solidificante de los ciertas algas marinas medios de cultivo, se procesadas para disuelve en solución eliminar sustancias acuosa, gelifica cuando
  • 11. extrañas. la temperatura baja de 45°C; no se considera al agar como nutriente para las bacterias. Extracto de levadura Es un extracto en Es una fuente muy rica solución acuosa de en vitaminas B, también levaduras, se obtiene contiene nitrógeno comercialmente en orgánico y compuestos polvo. de carbono.6. Que aspectos debes considerar para la preparación adecuada de un medio de cultivo y para su condición de incubación? En la preparación de medios de cultivo, se deben seguir los siguientes pasos: 1. Cada ingrediente se debe disolver en un volumen adecuado de agua destilada. 2. Se determinara el pH del medio y si es necesario se ajustara. 3. El medio se pondrá en recipientes adecuados como tubos, matraces, botellas, cuyas bocas se cierran con tapones de algodón, plástico o cubiertas de metal. 4. Los medios se esterilizan generalmente en autoclave. Para obtener un buen desarrollo de las bacterias, el trabajador de laboratorio deberá: a) Inocular las bacterias en un medio de cultivo que tenga los nutrientes necesarios. b) Incubar el medio ya sembrado en condiciones físicas apropiadas.7. Como se clasifican las bacterias con base a su tiempo optimo de desarrollo? Fototrofos, quimiotrofos, Autotrofos y heterotrofos.8. Cuales son las ventajas inherentes al uso de medios de cultivo sinteticos? Que se tienen la producción de muchos más embriones somáticos y el empleo de técnicas convencionales. BIBLIOGRAFIA: Capitulo 6, 7 y 8; Pelczar , reid, chan “Microbiologia” Ed. Mc. Graw-Hill Mexico