Ganglio linfático, histología, biopsia e inmunohistoquímica básica

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Una presentación realizada a manera de introducción antes de abordar el tema de linfomas. Donde se tratan aspectos básicos de histología, de la toma de biopsia y el manejo adecuado de esta, y los conceptos básicos de inmunohistoquímica y su utilidad en el diagnóstico de linfomas

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Ganglio linfático, histología, biopsia e inmunohistoquímica básica

  1. 1. Ganglio linfático Histología,biopsia e inmunohistoquímica básica Dr. Luis Humberto Cruz Contreras Hospital General Morelia, Mich
  2. 2. Ganglio linfático - anatomía
  3. 3. Ganglio linfático Centro germinal Manto
  4. 4. Centro germinal • Blastos (centroblastos y centrocitos) • Macrófagos de cuerpos teñibles • Células dendríticas foliculares (capturar y preservar antígenos para presentación) Zona del Manto • Linfocitos pequeños NO estimulados (folículos primarios) Zona Marginal
  5. 5. Paracorteza LinfocitosT Células interdigitantes reticulares Vénulas de endotelio ALTO
  6. 6. Ganglio linfático Manejo Toma de biopsia y manejo SUBOPTIMO • Diagnóstico correcto • Diagnóstico oportuno • MANEJO - Toma de Biopsia • Selección • Disección COMPLETA • NO fragmentos
  7. 7. Ganglio linfático BAAF UTILIDAD BAAF •Separar carcinoma vs Linfoma •Detectar recurrencias •Estadificación •Diagnóstico de LINFOMA … NO!!
  8. 8. Ganglio linfático MANEJO PATOLOGÍA Fijación • 10 veces el volumen en formol • REBANAR • FIJACIÓN 24 HRS • Se puede realizar citología por impronta • Tejido fresco sin fijar para biología molecular, citometría de flujo
  9. 9. Ganglio linfático PROCESO HISTOLÓGICO CORTES 3-5 MICRAS •Tinción HE •Giemsa –Wright •PAS - Inmunoglobulinas •Reticulina
  10. 10. Gangio linfático IHQ INMUNOHISTOQUÍMICA • Estándar en muchas partes • CONFIRMATORIA, No Dx • Diagnóstico PRECISO • ¿ Costo? Trivial, ante la necesidad de Dx preciso y los costos deTratamiento
  11. 11. Gangio linfático IHQ INMUNOHISTOQUÍMICA • Control de Calidad –Testigos • Buscar testigos internos… UN CORTE UNIFORMEMENTE AZUL…. NO SIRVE
  12. 12. Ganglio linfático PREGUNTAS INICIALESY GENERALIDADES ¿Es un linfoma? • CD45, EMA, PS100, HMB45 CD45, LCA (Leucocyte common antigen) • Presente en casi todos los linfocitos • AUSENTE, • Precursores de linfocitos (linfomas linfoblástico) • Linfoma anaplásico (Puede ser positivo para EMA, pero no otras citoqueratinas) • Células Reed Stenberg / Hodgkin
  13. 13. ¿Linfoma B?
  14. 14. ¿Linfoma B? Inmunoglobulinas • Células B = Capacidad de secretar Ig • Retículo endoplásmico – Paranuclear (Golgi positivo) • Clonalidad –Monotípico • Solo un tipo de cadena ligera (RESTRICCIÓN DE CADENAS LIGERAS)
  15. 15. CD20 (L26) Fosfoproteína NO glucosilada de Membrana Membrana de células B • NO ES PERFECTO • No se expresa en etapas tempranas • NO se expresa cuando comienzan la diferenciación a cél. plasmática MEMBRANA • Núcleo, nucléolo, citoplasma = NEGATIVO
  16. 16. CD79a Glicoproteínade membranaque se asocia con las Ig CITOPLASMA DE células B • SE UNE A CADENA alfa de Ig • Marcador casi perfecto • Todas las etapas de Diferenciación • 50% Linfomas linfoblásticosT
  17. 17. Otros marcadores…
  18. 18. CD5 Glicoproteina de membrana cél.T Expresado en célulasT • De manera más débil en LINFOMA LINFOCÍTICO DE CÉLULAS PEQUEÑAS • LEUCEMIA LINFOCÍTICA CRÓNICA • LINFOMA DE CÉLULAS DEL MANTO
  19. 19. • COMMON ACUTE LINFOBLASTIC LEUKEMIAANTIGEN • CENTRO GERMINAL • Linfomas con origen en centro germinal : FOLICULAR, DIFUSO DE CÉL. GRANDES, BURKITT • Linfomas / Leucemias linfoblásticos B yT CALLA CD10 Endopeptidasa Neutralde superficie(Zinc Dep)
  20. 20. CD23 Glicoproteína de membrana Células B activadas • Ganglios reactivos centro germinal y zona del manto • CÉLULAS DENDRITICAS FOLICULARES LINFOMA linfocítico de cél. Pequeña / LLC • Marcador útil de este linfoma
  21. 21. CiclinaD1 Ch 11q13 Reg.Ciclo celular Translocada en • LINFOMA DE CÉL. DEL MANTO • Leucemia de cél. peludas • Tinción NUCLEAR, en citoplasma es negativa Control Interno • CÉLULAS ENDOTELIALES
  22. 22. Bcl-2 Proteína de membrana mitocondrial Regula apoptosis • Ch18q21 • Translocación 14:18 • LINFOMA FOLICULAR Utilidad • Tej. Reactivos : Linfocitos B yT pequeños • Negativa en centro germinal normal • POSITIVA EN LINFOMA FOLICULAR!!!! • Reactivo vs folicular
  23. 23. Bcl-6 Factor represor transcripción dep.ZINC Expresa centro germinales reactivos • Ch3q27 • LINFOMA FOLICULAR, LINFOMA DIFUSO, LINFOMA BURKITT • Tinción NUCLEAR Utilidad Origen de centro germinal
  24. 24. CD3 glicoproteína asociadaa receptor de cél.T Marcador de célulasT • Pérdida de este marcador • SOLO 25% de linfomasT • Tinción membrana Utilidad LIMITADA • No es el marcador ideal
  25. 25. CD5 Marcador EXCELENTE DE CÉL. T!! • Casi todos los linfomasT • Tinción Membrana FUERTE CUIDADO!!! • Linfoma linfocítico de cel. Pequeña / LLC y MANTO • Tinción débil • Diferencial: CD20 y CD79a
  26. 26. Otros CD1a • Timocitos corticales y CÉL. LANGERHANS CD4 • LinfocitosT Cooperadores CD8 • LinfocitosT citotóxicos CD45RO • Marcador LinfocitosT (Sustituido actualmente por CD3 y CD5) CD43 • Sialophorina de Membrana, célulasT, B • NEOPLASIA GRANULOCÍTICAS INDIFERENCIADAS
  27. 27. CD56 células NK CD56 / NCAM • Neural cell adhesión molecule …. Identificada en cerebro • Tumores neuroectodérmicos • Células Natural Killer (2 tipos) • CélulaT NK • Célula NK- CD57 • Algunos linfocitos normales periféricos y algunas células NK
  28. 28. TdT Terminal dioxynucleotidyl transferasa PRECURSORES LINFOIDES BYT • DNA polimerasa intranuclear que cataliza la unión de dioxidonucleótidos • Linfoma / Leucemias linfoblásticas • NO Leucemia mieloide TINCIÓN NUCLEAR • Presente en 1-2% linfocitos MO • Timocitos corticales
  29. 29. CD30 Familia de factor de necrosis tumoral = activación • Tinción membranosa y paranuclear • Tinción difusa = NEGATIVO Expresión • Células reactivas parafoliculares (blastoides) • LINFOMA ANAPLÁSICO • CÉLULAS DE REED-STENBERG
  30. 30. CD15 Reconoce sequencia de azúcar (haptenoX) FINAL de diferenciación MIELOIDE • NEUTRÓFILOS…Testigo interno • MEMBRANAY CITOPLASMA Células Reed-Sternberg / Hodgkin • 70-80% Linfomas Hodgkin • Débil : algunos linfomas B yT, Carcinomas y células epiteliales normales
  31. 31. CD21 Receptor de C3d y para EBV Células dendríticas foliculares • EXCELENTE MARCADOR • Algunos linfocitos B
  32. 32. CD21 Receptor de C3d y para EBV
  33. 33. CD68 proteína transmembrana • TRÁFICO DE LISOSOMAS Expresada en histiocitos normales y neoplásicos
  34. 34. Proteína S 100 proteína de unión a calcio ¿S100? • Solubles en SULFATO de amonio neutral al 100% • Identificadas por PRIMERA vez en cerebro Expresion • Células interdigitantes reticulares • Células de Langerhans • Tumores neurales, Melanomas
  35. 35. Ki67 Nucleoproteína NO histona ¿Ki67? • Kiel, Alemania, clona número 67 • MIB-1 (Otro anticuerpo misma molécula) Nucleoproteína que se expresa casi en todo el ciclo celular • EXCEPTO G0 • Máximo en mitosis • Índice de proliferación • Valor pronóstico • Ayuda diagnóstica
  36. 36. Ki67 Ayuda diagnóstica Linfoma de células pequeñas Linfoma B Difuso de células grandes Linfoma Burkitt 1-15% 45-95% 100% Índice de proliferación
  37. 37. ALK-1 Anaplastic lymphoma kinase Tirosina cinasa 85% LINFOMAS ANAPLÁSICOS • ResultadoTranslocación 2:5 • Citoplasma, núcleo y nucléolo • Algunos linfomas difusos También tumor miofibroblástico inflamatorio • Misma translocación
  38. 38. Diagnósticar lo imposible •Ganglios demasiado pequeños •Artificios •Necrosis extensa •MALA FIJACIÓN NO diagnosticar
  39. 39. Diagnóstico Categorías Reactivo Neoplásico • Linfoma • Cél. Grande • Cél. pequeñas
  40. 40. Divisiones iniciales Linfomas • NO Hodgkin • Hodgkin Linfomas • Cél. Madura • Células precursoras Linfomas • Células B • CélulasT
  41. 41. Denis Parson Burkitt 1911-1993 Médico Irlandés • Enniskillen Irlanda • Padre ingeniero y ornitólogo • Familia protestante evangelista- papel activo en religión • Inicialmente entró a la escuela de ingeniería y por la influencia de un tío médico cambió • Perdió un ojo cuando era pequeño Colegio real de cirujanos –EDINBURGO (Escocia) • Trabajo como cirujano en varios hospitales
  42. 42. Denis Parson Burkitt 1911-1993 Quiso ayudar a los más desprotegidos • Se unió al ejercito en la segunda guerra mundial (Kenia, Somalia, Uganda) • Solicitó quedarse en Uganda • Interés en epidemiología • RELACIONÓ HIDROCELE CON FILARIASIS • Inició una fábrica de prótesis para enfermos amputados por elefantiasis 1957- Encontró su primer caso de Linfoma de Burkitt, • Reunío datos y pacientes y encontró 51 pacientes • Sarcoma indiferenciado
  43. 43. Denis Parson Burkitt Continuó su investigación • Posteriormente lo relacionó con los ganglios linfáticos (lymphoma syndrome in Uganda, Burkitt y Grez O’Connor) • Causa del linfoma (Mosquitos??) • 1961 Michael Anthony Epstein le pidió muestras para buscar virus • Se aisló 1ª vezVirus Epstein Barr

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