Tinción De Gram, Cultivo Y ELISA Landero Montes de Oca Roberto
<ul><li>Nos permiten diferenciar entre grupos de bacterias que tienen distintas propiedades tintoriales. </li></ul><ul><li...
<ul><li>Se debe solicitar siempre. </li></ul><ul><li>De bajo costo y gran utilidad:  </li></ul><ul><ul><li>1.Orientación d...
Tinción De Gram <ul><li>La tinción de Gram fue desarrollada empíricamente por Christian Gram en 1884. </li></ul><ul><li>A ...
Tinción De Gram <ul><li>La tinción de Gram requiere cuatro soluciones: </li></ul><ul><ul><li>Primer colorante. Un colorant...
Tinción De Gram Cristal-violeta Lugol Alcohol-acetona Safranina
Diferencias Tintoriales <ul><li>Los dos grupos bacterianos difieren en el color con el que finalmente se tiñen las bacteri...
Diferencias Entre Gram (+) Y Gram (-)
Técnica De Gram Por Pasos Gram (+)  Gram (-) Cristal violeta Lugol Alcohol-acetona Safranina
Fundamento de la técnica de Gram <ul><li>La diferenciación entre las bacterias   Gram positivas y Gram negativas se   esta...
<ul><li>Landero Montes De Oca Roberto </li></ul>
Definición <ul><li>Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que crean...
Cultivos <ul><li>Se considera el método de referencia porque permite la confirmación de género y especie y la determinació...
<ul><li>Requiere bacterias  y hongos viables. </li></ul><ul><li>Requieren medios de transporte, especialmente anaerobios. ...
Cultivos Bacterianos Y Fúngicos <ul><li>Diagnóstico macroscópico y microscópico. </li></ul><ul><li>Identificación y sensib...
Clasificación De Medios Por Consistencia <ul><li>Los medios de cultivo pueden ser: </li></ul><ul><ul><li>Líquidos </li></u...
Tipos De Medio Por Su Uso <ul><li>Medio sintetico:   </li></ul><ul><ul><li>Son los medios que contienen una composición qu...
Tipos De Medio Por Su Uso <ul><li>Medio enriquecido:  </li></ul><ul><ul><li>Medio que tiene un gran exceso de nutrientes y...
 
Otros Factores De Los Medios <ul><li>Aporte de nutrientes: </li></ul><ul><ul><li>La cantidad y naturaleza de los nutriente...
Otros Factores De Los Medios <ul><li>Presencia del oxígeno: </li></ul><ul><li>Los gases principales que afectan al desarro...
Otros Factores De Los Medios <ul><li>Suministro de luz. </li></ul><ul><li>Control de la temperatura. </li></ul><ul><ul><li...
<ul><li>Landero Montes De Oca Roberto </li></ul>
Historia <ul><li>1959 Yalowy Berson,  precursor de los ensayos inmunoenzimáticos que fueron descritos originalmente en 197...
ELISA <ul><li>La prueba de ELISA se basa en la reacción antígeno-anticuerpo, uno de los cuales debe ser de reactividad con...
ELISA <ul><li>Los métodos de ELISA dependiendo de la actividad enzimática se dividen en dos tipos: </li></ul><ul><ul><li>C...
ELISA Competitivo <ul><li>El anticuerpo de la muestra va a competir con el conjugado por un número limitado de sitios de u...
ELISA No Competitivo <ul><li>Consiste en enfrentar la muestra con el antígeno o anticuerpo que está en la fase sólida.  </...
ELISA No Competitivo <ul><li>Dentro de los no competitivos tenemos: </li></ul><ul><ul><li>Los  directos  que detectan antí...
ELISA <ul><li>Pasos generales de un ELISA </li></ul><ul><li>Tapizado  del pocillo con el antígeno o anticuerpo </li></ul><...
ELISA Competitiva (1)
ELISA Competitiva (2)
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ELISA Competitiva (6)
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ELISA Competitiva (1)
ELISA Competitiva (9)
Western Blot
Western Blot <ul><ul><li>Método de biología molecular  para detectar una proteína de interés usando un anticuerpo especifi...
Western Blot  <ul><li>Requiere: </li></ul><ul><ul><li>Anticuerpo monoclonal o policlonal </li></ul></ul><ul><ul><li>Soluci...
Western Blot <ul><li>Se basa en la separación de las proteínas (antígenos) obtenidas del virus, ejemplo VH-1, procedentes ...
Western Blot <ul><li>Después se transfieren a una de nitrocelulosa. </li></ul><ul><li>Estas tiras se exponen al suero huma...
 
Western Blot <ul><li>Las tiras pueden contener un  número variable de bandas; las principales bandas del WB son: </li></ul>
 
Western Blot <ul><li>Criterios mínimos de positividad. </li></ul><ul><ul><li>FDA.: Existencia de por lo menos 3 bandas: p2...
 
Reacciones Febriles
Reacciones febriles <ul><li>Las reacciones febriles (RF) son pruebas serológicas que se han empleado para diagnosticar : <...
Reacciones febriles <ul><li>Las aglutininas son anticuerpos que hacen que los glóbulos rojos se agrupen.  </li></ul><ul><u...
Reacciones febriles <ul><li>Existen diversos estudios de reacciones febriles como: </li></ul><ul><ul><li>Crioaglutininas :...
Reacciones febriles: Reacción de Vidal. <ul><li>Es un test basado en el principio de aglutinación antígeno-anticuerpo, don...
Reacción de Widal
<ul><li>La importancia de la aglutinación de Widal radica en ser un método serológico, rápido, barato, y ampliamente conoc...
Reacción de Widal <ul><li>FALSOS  POSITIVOS </li></ul>
Reacción de Widal. Limitaciones <ul><li>Antibioticoterapia temprana, la cual, retrasa la aparición de anticuerpos  (descri...
Interpretación clínica de la reacción de Widal <ul><li>Un diagnóstico de fiebre tifoidea puede considerarse si los títulos...
CRITERIOS DE INTERPRETACION DE RESULTADOS EN REACCIONES FEBRILES, PARA REALIZAR UN DIAGNOSTICO SON: <ul><li>FIEBRE  TIFOID...
SE RECOMIENDA REALIZAR LAS SIGUIENTES PRUEBAS ANTE LA DUDA Ó CUANDO EL PACIENTE NO RESPONDIÓ COMO SE ESPERABA AL TRATAMIEN...
VDLR
CONCEPTO <ul><li>El VDRL es una técnica de floculación que utiliza el antígeno de cardiolipina para detectar anticuerpos a...
PROCEDIMIENTO <ul><li>Se practica en lámina de cristal, en la que se mezcla el suero del paciente (previamente calentado p...
INDICACIONES <ul><li>Pacientes que presenten lesiones cutáneas en áreas genitales,  rasch  cutáneo generalizado y/o erupci...
INDICACIONES <ul><li>Pacientes con otras enfermedades de trasmisión sexual: </li></ul><ul><li>Gonorrea </li></ul><ul><li>H...
INDICACIONES <ul><li>Contactos sospechosos y asociados de casos de sífilis recién diagnosticados.  </li></ul><ul><li>Segui...
<ul><li>Se hacen positivas: </li></ul><ul><li>De 4 a 6 semanas después de la infección y casi siempre son positivas en la ...
<ul><li>El VDRL no se negativiza inmediatamente después del tratamiento,  </li></ul><ul><li>Terapéutica se realiza en los ...
MANEJO DE LOS RESULTADOS DEL VDRL <ul><li>El diagnóstico positivo de la sifílis se basa en 3 pilares: 1) los elementos clí...
<ul><li>Es necesario tener presente que el VDRL reactivo debe ser utilizado como parámetro altamente sugestivo de sífilis,...
TRATAMIENTO   <ul><li>Ante todo caso de VDRL reactivo durante la gestación debe instaurarse tratamiento específico e inmed...
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TincióN De Gram, Cultivo Y Elisa 97 03

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TincióN De Gram, Cultivo Y Elisa 97 03

  1. 1. Tinción De Gram, Cultivo Y ELISA Landero Montes de Oca Roberto
  2. 2. <ul><li>Nos permiten diferenciar entre grupos de bacterias que tienen distintas propiedades tintoriales. </li></ul><ul><li>Las tinciones diferenciales mas comúnmente utilizadas son la tinción de Gram y la tinción de Ziehl-Neelsen. </li></ul>Tinciones
  3. 3. <ul><li>Se debe solicitar siempre. </li></ul><ul><li>De bajo costo y gran utilidad: </li></ul><ul><ul><li>1.Orientación diagnóstica rápida. </li></ul></ul><ul><ul><li>2.Características inflamatorias. </li></ul></ul><ul><ul><li>3.Infecciones mixtas (anaerobios). </li></ul></ul><ul><li>Sensibilidad analítica: 100.000 bacterias/ml muestra. </li></ul>Tinción De Gram
  4. 4. Tinción De Gram <ul><li>La tinción de Gram fue desarrollada empíricamente por Christian Gram en 1884. </li></ul><ul><li>A pesar del tiempo transcurrido la tinción apenas se ha modificado y es uno de los primeros pasos que se realiza para cualquier identificación bacteriana. </li></ul><ul><li>La técnica es capaz de diferenciar dos grandes grupos de eubacterias: </li></ul><ul><ul><li>Gram positivas. </li></ul></ul><ul><ul><li>Gram negativas. </li></ul></ul>
  5. 5. Tinción De Gram <ul><li>La tinción de Gram requiere cuatro soluciones: </li></ul><ul><ul><li>Primer colorante. Un colorante básico (+) que en contacto con las células cargadas negativamente, reacciona con ellas coloreándolas. El mas utilizado es el cristal violeta. </li></ul></ul><ul><ul><li>Solución mordiente. Fija las tinciones y aumenta la afinidad entre el colorante y las células. Los mordientes usados suelen ser sales metálicas, ácidos o bases, como por ejemplo, una sol. diluida de yodo. </li></ul></ul><ul><ul><li>A gente decolorante: Es un disolvente orgánico; por ejemplo alcohol acetona (1:1). </li></ul></ul><ul><ul><li>Colorante de contraste. Es un colorante básico de distinto color que el primer colorante, como por ejemplo, la Safranina. </li></ul></ul>
  6. 6. Tinción De Gram Cristal-violeta Lugol Alcohol-acetona Safranina
  7. 7. Diferencias Tintoriales <ul><li>Los dos grupos bacterianos difieren en el color con el que finalmente se tiñen las bacterias. </li></ul><ul><ul><li>Las Gram positivas se observarán de azul por el cristal violeta y no perderán esta coloración durante los pasos sucesivos. </li></ul></ul><ul><ul><li>Las bacterias Gram negativas perderán la coloración inicial con los siguientes pasos y se teñirán de rosa debido a la Safranina. </li></ul></ul><ul><li>La diferencia esta determinada por la composición de su envoltura celular. </li></ul><ul><ul><li>Las bacterias Gram positivas poseen una malla de péptidoglicano en su parte mas externa. </li></ul></ul><ul><ul><li>Las Gram negativas recubriendo una fina capa de peptidoglicano y presentan una membrana externa . </li></ul></ul>
  8. 8. Diferencias Entre Gram (+) Y Gram (-)
  9. 9. Técnica De Gram Por Pasos Gram (+) Gram (-) Cristal violeta Lugol Alcohol-acetona Safranina
  10. 10. Fundamento de la técnica de Gram <ul><li>La diferenciación entre las bacterias Gram positivas y Gram negativas se establece en la naturaleza de la pared celular bacteriana. </li></ul><ul><li>Las bacterias Gram positivas poseen una gruesa pared de peptidoglicano que es capaz de retener al complejo cristal violeta-yodo. </li></ul><ul><ul><li>Durante la decoloración con alcohol acetona se provoca una deshidratación de esta gruesa pared y se reduce la porosidad, atrapando entonces al complejo dentro de la célula. </li></ul></ul><ul><li>En las Gram negativas, la delgada capa de peptidoglicano no puede impedir la salida del complejo colorante-mordente y es entonces fácilmente teñida por el colorante secundario o de contraste. </li></ul>
  11. 11. <ul><li>Landero Montes De Oca Roberto </li></ul>
  12. 12. Definición <ul><li>Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos. </li></ul><ul><li>Debido a la diversidad metabólica de los microorganismos no existe un medio de cultivo universal. </li></ul><ul><li>Un medio de cultivo debe contener en forma asimilable: Nitrógeno y Proteínas (peptonas), lípidos, hidratos de carbono, distintas sales minerales, factores de crecimiento (Ej. vitaminas, sangre, etc), agua, extractos de carne o levadura agentes solidificantes (agar o gelatina). </li></ul><ul><li>Deben ser estériles, isotónicos, poseer propiedades buffer, una viscosidad óptima y un potencial oxido reductor determinado. </li></ul>
  13. 13. Cultivos <ul><li>Se considera el método de referencia porque permite la confirmación de género y especie y la determinación de la susceptibilidad a drogas. </li></ul><ul><li>En el caso de bacterias y hongos la automatización ha permitido disminuir los tiempos de respuesta (mejores sistemas de detección). </li></ul>
  14. 14. <ul><li>Requiere bacterias y hongos viables. </li></ul><ul><li>Requieren medios de transporte, especialmente anaerobios. </li></ul><ul><li>Medios líquidos son más sensibles que los sólidos. </li></ul><ul><li>Una buena alternativa en punciones y muestras líquidas es la inoculación en botellas de hemocultivos. </li></ul>Cultivos Bacterianos Y Fúngicos
  15. 15. Cultivos Bacterianos Y Fúngicos <ul><li>Diagnóstico macroscópico y microscópico. </li></ul><ul><li>Identificación y sensibilidad a drogas. </li></ul><ul><li>Diferentes plazos de entrega: </li></ul><ul><ul><li>Cultivo corriente: 48 horas. </li></ul></ul><ul><ul><li>Cultivo anaeróbico: 7 días. </li></ul></ul><ul><ul><li>Cultivo de hongos: 7 días a 4 semanas. </li></ul></ul><ul><ul><li>Cultivo de Micobacterias: 8 semanas. </li></ul></ul>
  16. 16. Clasificación De Medios Por Consistencia <ul><li>Los medios de cultivo pueden ser: </li></ul><ul><ul><li>Líquidos </li></ul></ul><ul><ul><li>Sólidos o semisólidos </li></ul></ul><ul><li>Los medios sólidos o semisólidos pueden contener los mismos ingredientes que los medios líquidos, pero poseen además agentes solidificantes que pueden ser agar, gelatina ó sílica gel. </li></ul><ul><li>El agar proviene de las algas rojas G elidium , Gracilaria , Acanthopeltis , Ceramium y Pterocladia y químicamente es un polímero de azúcares. </li></ul><ul><li>La gelatina tiene el inconveniente de que se licúa a temperaturas relativamente bajas y muchos microorganismos la utilizan como fuente de carbono y nitrógeno. </li></ul><ul><li>La sílica gel se emplea para algunos microorganismos que se inhiben en presencia de agar. </li></ul>
  17. 17. Tipos De Medio Por Su Uso <ul><li>Medio sintetico: </li></ul><ul><ul><li>Son los medios que contienen una composición química definida cuali y cuantitativamente. </li></ul></ul><ul><ul><li>Se utilizan para el estudio de requerimientos nutricionales y para obtener resultados reproducibles. </li></ul></ul><ul><li>Medio minimo: </li></ul><ul><ul><li>Son los medios que presentan la minima cantidad de nutrientes capaz de permitir el desarrollo de los microorganismos. </li></ul></ul><ul><li>Medio complejo: </li></ul><ul><ul><li>Medios que contienen nutrientes de composición química variable o no establecida. </li></ul></ul><ul><ul><li>Se forman a partir de extractos animales, vegetales, etc. </li></ul></ul><ul><ul><li>Se utilizan cuando se necesita obtener una amplia gama de microorganismos. </li></ul></ul>
  18. 18. Tipos De Medio Por Su Uso <ul><li>Medio enriquecido: </li></ul><ul><ul><li>Medio que tiene un gran exceso de nutrientes y se utiliza para microorganismos que tienen grandes exigencias nutricionales. </li></ul></ul><ul><ul><li>No pueden ser selectivos. Agar chocolate, agar cerebro-corazón, etc. </li></ul></ul><ul><li>Medio selectivo: </li></ul><ul><ul><li>Medio que sólo permite el crecimiento de un grupo de microorganismos e inhibe el de otros. </li></ul></ul><ul><ul><li>Permite seleccionar y aislar microorganismos a partir de poblaciones mixtas Agar sal es -manitol o Chapman (permite el crecimiento de ciertos Staphilococcus ). </li></ul></ul><ul><li>Medio diferencial: </li></ul><ul><ul><li>Medio que permite revelar características fisiológicas de los microorganismos. Levine (permite visualizar la fermentación de lactosa), Agar sangre (permite visualizar la síntesis de hemolisinas). </li></ul></ul><ul><li>Medios de transporte : </li></ul><ul><ul><li>Estos medios se utilizan para el transporte de diversas muestras biológicas evitando la muerte de l os microorganismos de interés. </li></ul></ul><ul><ul><li>Permite la viabilidad de los microorganismos pero no permite su multiplicación . Medio de Stuart, de agua peptonada para Vibrio , Cary y Blair, Glicerol-Solución Salina, Amies y Douglas, etc </li></ul></ul>
  19. 20. Otros Factores De Los Medios <ul><li>Aporte de nutrientes: </li></ul><ul><ul><li>La cantidad y naturaleza de los nutrientes en un medio de cultivo viene determinada por el rendimiento de un producto en especial además de los requerimientos nutricionales del microorganismo. </li></ul></ul><ul><li>pH: </li></ul><ul><ul><li>Un microorganismo puede alterar el pH del medio de cultivo como resultado de las sustancias producidas por el propio microorganismo. </li></ul></ul><ul><ul><li>Estos cambios pueden llegar a ser tan grandes que inhiban el crecimiento del microorganismo. </li></ul></ul>
  20. 21. Otros Factores De Los Medios <ul><li>Presencia del oxígeno: </li></ul><ul><li>Los gases principales que afectan al desarrollo microbiano son el oxígeno y el dióxido de carbono. Las bacterias presentan una respuesta amplia y variable al oxígeno libre clasificándose en cinco grupos: </li></ul><ul><ul><li>i.- Aerobias: bacterias que se desarrollan en presencia de oxígeno libre. </li></ul></ul><ul><ul><li>ii.- Anaerobias: bacterias que se desarrollan en ausencia de oxígeno libre. </li></ul></ul><ul><ul><li>iii.- Anaerobias facultativas: bacterias que se desarrollan tanto en presencia como en ausencia de oxígeno libre. </li></ul></ul><ul><ul><li>iv.- Aerotolerantes: son microorganismos que pueden tolerar o soportar el oxígeno y crecer en su presencia aún cuando no lo utilizan. </li></ul></ul><ul><ul><li>v.- Microaerófilas: bacterias que crecen en presencia de pequeñas cantidades de oxígeno libre. </li></ul></ul>
  21. 22. Otros Factores De Los Medios <ul><li>Suministro de luz. </li></ul><ul><li>Control de la temperatura. </li></ul><ul><ul><li>El desarrollo de las bacterias depende de reacciones químicas, y la velocidad con que se efectúan estas reacciones está influída por la temperatura, por lo que la temperatura puede en parte determinar la velocidad de crecimiento de los microorganismos. </li></ul></ul>
  22. 23. <ul><li>Landero Montes De Oca Roberto </li></ul>
  23. 24. Historia <ul><li>1959 Yalowy Berson, precursor de los ensayos inmunoenzimáticos que fueron descritos originalmente en 1971 por Engvall y Perlmann, y Van Wemeny y Schuurs. </li></ul><ul><li>El uso de material radiactivo ha limitado el uso del radioinmunoensayo y el empleo del inmunoensayo enzimático (EIA), del que hay dos técnicas principales: </li></ul><ul><ul><li>El ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas. </li></ul></ul><ul><ul><li>El ensayo inmunológico multiplicado por enzimas. </li></ul></ul>
  24. 25. ELISA <ul><li>La prueba de ELISA se basa en la reacción antígeno-anticuerpo, uno de los cuales debe ser de reactividad conocida. </li></ul><ul><li>El color se genera por la interacción de un sustrato cromogénico y una enzima que ha sido acoplada al anticuerpo detector. </li></ul><ul><li>Si debe medirse el anticuerpo, se coloca el antígeno en la fase sólida, como una capa de captura. </li></ul><ul><li>Después de la reacción del antígeno con el suero del paciente, la capa de detección puede ser un reactivo antiinmunoglobulina clase específica (IgM o IgG) para detectar respuesta de anticuerpos clase específicos. </li></ul>
  25. 26. ELISA <ul><li>Los métodos de ELISA dependiendo de la actividad enzimática se dividen en dos tipos: </li></ul><ul><ul><li>Competitivos. </li></ul></ul><ul><ul><li>No competitivos. </li></ul></ul>
  26. 27. ELISA Competitivo <ul><li>El anticuerpo de la muestra va a competir con el conjugado por un número limitado de sitios de unión del antígeno. </li></ul><ul><li>Habrá ausencia de color en una muestra positiva debido a que el sustrato no encontrará a la enzima porque el conjugado ha sido desplazado por el anticuerpo presente en la muestra. </li></ul>
  27. 28. ELISA No Competitivo <ul><li>Consiste en enfrentar la muestra con el antígeno o anticuerpo que está en la fase sólida. </li></ul><ul><li>Si una muestra es positiva se formará el complejo antígeno-anticuerpo y al agregar el conjugado reaccionará con el respectivo sustrato desarrollando color. </li></ul>
  28. 29. ELISA No Competitivo <ul><li>Dentro de los no competitivos tenemos: </li></ul><ul><ul><li>Los directos que detectan antígenos. </li></ul></ul><ul><ul><li>Los indirectos que detectan anticuerpos. </li></ul></ul>
  29. 30. ELISA <ul><li>Pasos generales de un ELISA </li></ul><ul><li>Tapizado del pocillo con el antígeno o anticuerpo </li></ul><ul><li>Adición de la muestra problema con la mezcla de antígenos o anticuerpos </li></ul><ul><li>Unión del antígeno o anticuerpo específico al anticuerpo o antígeno tapizado en el posillo. </li></ul><ul><li>Lavado del pocillo para eliminar el exceso de anticuerpo o antígeno no unido </li></ul><ul><li>Adición del anticuerpo secundario marcado con la enzima </li></ul><ul><li>Unión del anticuerpo secundario al antígeno o anticuerpo </li></ul><ul><li>Lavado del pocillo para eliminar el exceso de enzima no unida </li></ul><ul><li>Adición del sustrato </li></ul><ul><li>Unión del sustrato a la enzima </li></ul><ul><li>Desarrollo del color </li></ul>
  30. 31. ELISA Competitiva (1)
  31. 32. ELISA Competitiva (2)
  32. 33. ELISA Competitiva (3)
  33. 34. ELISA Competitiva (4)
  34. 35. ELISA Competitiva (5)
  35. 36. ELISA Competitiva (6)
  36. 37. ELISA Competitiva (7)
  37. 38. ELISA Competitiva (1)
  38. 39. ELISA Competitiva (9)
  39. 40. Western Blot
  40. 41. Western Blot <ul><ul><li>Método de biología molecular para detectar una proteína de interés usando un anticuerpo especifico. </li></ul></ul><ul><ul><li>El fundamento es una discriminación de los antígenos frente a los que se dirigen los anticuerpos presentes en la muestra. </li></ul></ul>
  41. 42. Western Blot <ul><li>Requiere: </li></ul><ul><ul><li>Anticuerpo monoclonal o policlonal </li></ul></ul><ul><ul><li>Solución que contenga la proteína </li></ul></ul><ul><li>Pasos esenciales: </li></ul><ul><ul><li>Transferencia de proteínas de un gel a la matriz. </li></ul></ul><ul><ul><li>Marcado del epitope con un anticuerpo especifico </li></ul></ul>
  42. 43. Western Blot <ul><li>Se basa en la separación de las proteínas (antígenos) obtenidas del virus, ejemplo VH-1, procedentes del lisado del cultivo del virus. </li></ul><ul><li>La proteína viral así contenida se coloca en un gel de poliacrilamida en forma de láminas delgadas y luego se efectúa una electroforesis. </li></ul>
  43. 44. Western Blot <ul><li>Después se transfieren a una de nitrocelulosa. </li></ul><ul><li>Estas tiras se exponen al suero humano diluido, después de una incubación se lavan y se vuelven a incubar con una IgG antihumana marcada con una enzima que con la exposición a un revelador enzimático producirá una banda coloreada en las zonas correspondientes a los anticuerpos específicos que contengan la muestra. </li></ul>
  44. 46. Western Blot <ul><li>Las tiras pueden contener un número variable de bandas; las principales bandas del WB son: </li></ul>
  45. 48. Western Blot <ul><li>Criterios mínimos de positividad. </li></ul><ul><ul><li>FDA.: Existencia de por lo menos 3 bandas: p24, p31 y gp41 u otro glicoproteína </li></ul></ul><ul><ul><li>ARC: Existencia de al menos tres bandas una por cada uno de los tres genes estructurales. </li></ul></ul><ul><ul><li>CDC: Al menos dos bandas: p24, gp41 y gp160/120. </li></ul></ul><ul><ul><li>CRSS: Al menos una banda del core (gag/pol) y otra de envoltura (env). </li></ul></ul><ul><ul><li>OMS: al menos dos bandas de envoltura. </li></ul></ul>
  46. 50. Reacciones Febriles
  47. 51. Reacciones febriles <ul><li>Las reacciones febriles (RF) son pruebas serológicas que se han empleado para diagnosticar : </li></ul><ul><ul><li>tifoidea, </li></ul></ul><ul><ul><li>paratifoidea, </li></ul></ul><ul><ul><li>ricketsias    y </li></ul></ul><ul><ul><li>brucelosis; </li></ul></ul><ul><li>Se basan en aglutinación con extractos bacterianos de los antígenos O y H de Salmonella tiphy, antígeno H de Salmonella Paratiphy, proteusox19 y antígenos contra Brucella abortus </li></ul>
  48. 52. Reacciones febriles <ul><li>Las aglutininas son anticuerpos que hacen que los glóbulos rojos se agrupen. </li></ul><ul><ul><li>Las aglutininas frías (crioaglutininas) son activas a temperaturas frías. </li></ul></ul><ul><ul><li>Las aglutininas febriles (calientes) son activas a la temperatura normal del cuerpo. </li></ul></ul><ul><li>Existen diversos estudios de reacciones febriles como: </li></ul><ul><ul><li>Crioaglutininas: micoplasmas o legionela, estafilococo, malaria, cancer, mieloma multiple y LES </li></ul></ul><ul><ul><li>Reacción de Weil-Felix : ricketisas, brucelosis, pasteurellas tularensis y vibrio colerae. </li></ul></ul><ul><ul><li>Examen de Widal : Sallmonella Tiphy </li></ul></ul><ul><ul><li>Aglutininas calientes : brucelosis, enfermedad rickettsial, infección por salmonella y tularemia, linfomas, LES </li></ul></ul>
  49. 53. Reacciones febriles <ul><li>Existen diversos estudios de reacciones febriles como: </li></ul><ul><ul><li>Crioaglutininas : micoplasmas o legionela, estafilococo, malaria, cáncer, mieloma múltiple y LES </li></ul></ul><ul><ul><li>Reacción de Weil-Felix : ricketisas, brucelosis, pasteurellas tularensis y vibrio colerae. </li></ul></ul><ul><ul><li>Examen de Widal : Sallmonella Tiphy </li></ul></ul><ul><ul><li>Aglutininas calientes : brucelosis, enfermedad rickettsial, infección por salmonella y tularemia, linfomas, LES </li></ul></ul>
  50. 54. Reacciones febriles: Reacción de Vidal. <ul><li>Es un test basado en el principio de aglutinación antígeno-anticuerpo, donde se determina la presencia de anticuerpos contra el antígeno O (somatico) y H (flagelar) de la Salmonella typhi para el serodiagnóstico de fiebre tifoidea, sin embargo debido a su falta de especificidad, debe ser interpretado en el contexto clínico del paciente. </li></ul><ul><li>Fue desarrollada por Georges Fernand Isadore Widal en Junio de 1896. </li></ul>
  51. 55. Reacción de Widal
  52. 56. <ul><li>La importancia de la aglutinación de Widal radica en ser un método serológico, rápido, barato, y ampliamente conocido para el diagnóstico de la fiebre tifoidea; sin embargo, tiene grandes limitaciones por reacciones antigénicas cruzadas con otras bacterias parásitos, virus y hongos, llevando con frecuencia al clínico a sobre diagnosticar síndromes febriles como fiebre tifoidea </li></ul>Reacción de Widal. Limitaciones
  53. 57. Reacción de Widal <ul><li>FALSOS POSITIVOS </li></ul>
  54. 58. Reacción de Widal. Limitaciones <ul><li>Antibioticoterapia temprana, la cual, retrasa la aparición de anticuerpos (descrito principalmente con cloranfenicol). </li></ul><ul><li>Utilización de corticosteroides. </li></ul><ul><li>Medición temprana de anticuerpos (primera semana). </li></ul><ul><li>Inmunodeficiencias adquiridas y congénitas. </li></ul><ul><li>Portadores crónicos de Salmonella typhi. </li></ul><ul><li>Hasta un 50 y 33% de los pacientes con FT no tratada no presentan el aumento en los títulos Anti-O y tienen negatividad en los Anti-H. </li></ul><ul><li>La presencia de Anti-O y Anti-H en la población sana, esta determinado principalmente por la prevalencia de salmonelosis en una comunidad determinada. </li></ul>
  55. 59. Interpretación clínica de la reacción de Widal <ul><li>Un diagnóstico de fiebre tifoidea puede considerarse si los títulos iníciales se cuadruplican entre una y cuatro semanas. </li></ul><ul><li>Sin embargo, el clínico no puede esperar este tiempo para establecer un tratamiento, por lo cual se debe considerar la posibilidad de esta entidad con un título aislado determinado. </li></ul><ul><li>Este punto de corte depende de la prevalencia de salmonelosis en la comunidad estudiada, siendo así, se han establecido protocolos diagnósticos en varios países, teniendo en cuenta los estudios realizados en sus regiones </li></ul>
  56. 60. CRITERIOS DE INTERPRETACION DE RESULTADOS EN REACCIONES FEBRILES, PARA REALIZAR UN DIAGNOSTICO SON: <ul><li>FIEBRE TIFOIDEA : Títulos de Ac. Mayores de 1:320 para Ag.Tífico “O” y mas de 1:80 para Ag.Tífico “H”, mas los signos y síntomas clínicos sugestivos de esta enfermedad. </li></ul><ul><li>SALMONELOSIS: Títulos de Ac. mayores de 1:320 para Ag. “O” y mas de 1:80 en Ag. paratífico A ó B., mas los signos y síntomas clínicos sugestivos de esta enfermedad. </li></ul><ul><li>RICKETSIOSIS: Títulos mayores de 1:320 para proteus ox19 , en este caso se sugiere solicitar los Ac. Anti Ricketsia. </li></ul><ul><li>BRUCELOSIS: Cualquier Título Huddleson, con Rosa de Bengala positivo y los síntomas sugestivos. </li></ul>
  57. 61. SE RECOMIENDA REALIZAR LAS SIGUIENTES PRUEBAS ANTE LA DUDA Ó CUANDO EL PACIENTE NO RESPONDIÓ COMO SE ESPERABA AL TRATAMIENTO ADMINISTRADO. <ul><li>Primero, suspender el tratamiento con antibióticos y posteriormente solicitar al laboratorio: </li></ul><ul><ul><li>HEMOCULTIVO , en pico febril y seriado de preferencia ( 2 ó 3 ), cuando se sospecha de Brucelosis ó Fiebre Tifoidea. </li></ul></ul><ul><ul><li>2 MERCAPTOETANOL Y SAT , en caso de sospecha de Brucelosis fase activa. </li></ul></ul><ul><ul><li>COPROCULTIVO , en caso de sospecha de Fiebre Tifoidea ó Salmonelosis. </li></ul></ul><ul><ul><li>A C . ANTI-RICKETSIA Y A C . ANTI-LEPTOSPIRA al sospechar de Ricketsiosis, cuando existe un resultado previo para Proteus ox19 positivo y sintomatología sugestiva. </li></ul></ul>
  58. 62. VDLR
  59. 63. CONCEPTO <ul><li>El VDRL es una técnica de floculación que utiliza el antígeno de cardiolipina para detectar anticuerpos antitreponémicos inespecíficos producidos por el individuo ante una infección sifilítica. </li></ul>
  60. 64. PROCEDIMIENTO <ul><li>Se practica en lámina de cristal, en la que se mezcla el suero del paciente (previamente calentado para inactivar el complemento), con suspensión fresca de antígeno de cardiolipina; esta mezcla se agita y al cabo de pocos minutos puede observarse la floculación utilizando un microscopio de bajo aumento. </li></ul>
  61. 65. INDICACIONES <ul><li>Pacientes que presenten lesiones cutáneas en áreas genitales, rasch cutáneo generalizado y/o erupciones en palmas y plantas de los pies (en estos casos incluirá a la o las parejas sexuales de los pacientes). </li></ul>
  62. 66. INDICACIONES <ul><li>Pacientes con otras enfermedades de trasmisión sexual: </li></ul><ul><li>Gonorrea </li></ul><ul><li>Herpes genital </li></ul><ul><li>Verrugas genitales </li></ul><ul><li>Uretritis </li></ul><ul><li>Leucorrea </li></ul>
  63. 67. INDICACIONES <ul><li>Contactos sospechosos y asociados de casos de sífilis recién diagnosticados. </li></ul><ul><li>Seguimiento serológico a pacientes sifilíticos ya tratados que tienen dispensarizados en su área de salud. </li></ul><ul><li>Consulta preconcepcional y planificación familiar. </li></ul><ul><li>Mujeres embarazadas en el primero y tercer trimestres de la gestación. </li></ul><ul><li>Donantes de sangre. </li></ul><ul><li>Chequeos pre-empleo. </li></ul>
  64. 68. <ul><li>Se hacen positivas: </li></ul><ul><li>De 4 a 6 semanas después de la infección y casi siempre son positivas en la sífilis secundaria. </li></ul><ul><li>Pueden ser negativas en: </li></ul><ul><li>Sífilis tardía o terciaria </li></ul><ul><li>Después del tratamiento. </li></ul><ul><li>En estadios precoces de la enfermedad. </li></ul><ul><li>Hasta el 15% de pruebas de VDRL positivas representan resultados falsos positivos. </li></ul>
  65. 69. <ul><li>El VDRL no se negativiza inmediatamente después del tratamiento, </li></ul><ul><li>Terapéutica se realiza en los estadios precoces de la sífilis (durante los primeros 2 años) los títulos del VDRL deben descender paulatinamente y hacerse no reactivos en un período no mayor de 18 meses. </li></ul>
  66. 70. MANEJO DE LOS RESULTADOS DEL VDRL <ul><li>El diagnóstico positivo de la sifílis se basa en 3 pilares: 1) los elementos clínicos, 2) las investigaciones de laboratorio y 3) los antecedentes epidemiológicos. </li></ul>
  67. 71. <ul><li>Es necesario tener presente que el VDRL reactivo debe ser utilizado como parámetro altamente sugestivo de sífilis, pero nunca como sinónimo de ésta. </li></ul><ul><li>El resultado del VDRL, debe evaluarse adecuadamente en combinación con un conocimiento histórico, epidemiológico y clínico del paciente, siendo entonces una prueba de laboratorio muy útil. </li></ul>
  68. 72. TRATAMIENTO <ul><li>Ante todo caso de VDRL reactivo durante la gestación debe instaurarse tratamiento específico e inmediato contra la sífilis a la gestante y a su pareja, después de esto realizará la interconsulta con el dermatólogo. </li></ul><ul><li>En los otros casos indicará VDRL a la o las parejas sexuales del paciente y se interconsultará el paciente con el dermatólogo que atiende el área de salud. </li></ul>
  69. 73. BAAR

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