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Inmunofluorescencia

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Presentación de inmunofluorescencia

Presentación de inmunofluorescencia

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    Inmunofluorescencia Inmunofluorescencia Presentation Transcript

    • INMUNOFLUORESCENCIA
    • Inmunofluorescencia
      • Consiste en conjugar colorantes fluorescentes con anticuerpos, exponiendo después este conjugado a los anticuerpos o antígenos correspondientes en cortes de tejidos, frotis de microorganismos o de células, o cultivo de tejidos en capa única.
      • Cuando la reacción es positiva y se expone a la luz ultravioleta se producirá fluorescencia observable bajo el microscopio de inmunofluorescencia.
      • Se realiza un acople a un anticuerpo de un fluoróforo o una enzima que cataliza una reacción por la cual se emite fluorescencia.
    • fluoróforo
      • Generalmente son compuestos heterocíclicos o hidrocarburos poliarómaticos: moléculas rígidas
      Rodamina 6G Rodamina B
      • Cada fluorocromo tiene un espectro de emisión y excitación característicos; si se utilizan dos con el mismo espectro de excitación pero distinto espectro de emisión, se pueden medir dos características al mismo tiempo (fluorescencia de dos colores).
      Fluoresceína
      • Las moléculas fluorescentes tienen la particularidad de que emiten luz de una determinada longitud de onda al ser excitadas con luz de otra determinada longitud de onda.
      • La Inmunofluorescencia es una técnica de biología molecular que consiste en incubar una muestra con un anticuerpo que detecte la molécula o componente que queramos detectar. Dicho anticuerpo lleva unida una molécula fluorescente (inmunofluorescecnia directa) o bien es reconocido por un segundo anticuerpo marcado fluorescentemente (inmunfluorescencia indirecta).
      • INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA:
      • Esta técnica se vale de un anticuerpo primario marcado con un fluorocromo que reacciona con el antígeno dentro de la muestra. Es un procedimiento de un solo paso y comprende un solo anticuerpo marcado. La visualización de estructuras no es ideal a causa de la poca emisión de la señal.
    • INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA
      • Esta prueba tiene una sensibilidad mayor que los métodos directos y con frecuencia recibe el nombre de técnica del emparedado o de la capa doble . En vez de conjugar un fluorocromo con un anticuerpo específico dirigido contra el antígeno de interés, el fluorocromo se conjuga con un anticuerpo secundario dirigido contra el anticuerpo primario.
      • Por lo tanto, cuando la fluoresceína se conjuga directamente con el anticuerpo primario el método es directo y cuando la fluoresceína se conjuga con un anticuerpo secundario el método es indirecto .
      • El método indirecto aumenta en forma considerable la señal fluorescente emitida por el tejido.
      • Una ventaja adicional del método de marcación indirecta es que es un solo anticuerpo secundario puede usarse para localizar la unión histoespecífica de varios anticuerpos primarios diferentes.
      • Para los estudios microscópicos el anticuerpo secundario puede conjugarse con colorantes fluorescentes distintos de modo que en el mismo corte de tejido aparezcan marcas múltiples.
      • Las desventajas de la inmunofluorescencia indirecta son que es cara, que requiere mucho trabajo y que no se adapta con facilidad a los procedimientos automatizados.
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