Informe alcaloides final030614

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Informe alcaloides final030614

  1. 1. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA T O X I C O L O G Í A Y Q U Í M I C A L E G A L ALCALOIDES “Año de la Promoción de la Industria Responsable y del Compromiso Climático” CÁTEDRA DE TOXICOLOGÍA Y QUIMICA LEGAL TOXICOLOGÍA GRUPO: MARTES Practica N°10 Determinación cualitativa y en Cromatografía en Capa Fina de Alcaloides Práctica: 27-05-14; Hora: 10 a.m. - 12 m INTEGRANTES  HUAYHUA ABREGÚ, Jhonny 10040072  HERNÁNDEZ LOLI, María 09040096  HUERTA CRUZ, Evelin 09040064  TRUJILLO DOMINGUEZ, John 10040428  VALLE GARCÍA, Alex 09040079  VÁSQUEZ GONZALES, Alan 07040001 PROFESOR: Jesús Lizano Gutiérrez Año Académico: 5to Año SEMESTRE: 2014-I UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS (Universidad del Perú, DECANA DE AMÉRICA) FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA EAP FARMACIA Y BIOQUÍMICA
  2. 2. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA T O X I C O L O G Í A Y Q U Í M I C A L E G A L ALCALOIDES I. MARCO TEORICO La atropina es un fármaco anticolinérgico extraído de la belladona y otras plantas de la familia Solanaceae. Es un antagonista competitivo del receptor muscarínico de acetilcolina, conteniendo en su estructura química grupos entéricos y básicos en la misma proporción que la acetilcolina pero en lugar de tener un grupo acetilo, posee un grupo aromático voluminoso. Suprime los efectos del sistema nervioso parasimpático, ya que los receptores muscarínicos se encuentran en los tejidos efectores parasimpáticos. Por eso, su administración afecta el corazón, los ojos, el tubo digestivo, y otras estructuras. La sobredosis de atropina consiste en un síndrome anticolinérgico con: midriasis, delirio, taquicardia, íleo y retención urinaria. Pueden aparecer en la intoxicación grave: movimientos mioclónicos y coreoatetosis, parálisis muscular, hiperpirexia, coma, hipertermia y parada respiratoria. La brucina y la estricnina son alcaloides de la nuez vómica y son la causa de intoxicaciones. En altas dosis produce una gran estimulación de todo el sistema nervioso central, agitación, dificultad para respirar, orina oscura y convulsiones, pudiendo llevar a un fallo respiratorio y la muerte cerebral. La morfina, codeína, papaverina son alcaloides obtenidos del opio. Los efectos farmacológicos de los opioides están mediados por su interacción sobre distintos receptores específicos localizados en el sistema nervioso central y en la periferia. Las acciones farmacológicas de los opioides varían según la afinidad del compuesto por los diversos receptores. El manejo del dolor es la principal indicación terapéutica de los opioides, y se afirma que han sido la piedra angular del tratamiento del dolor durante miles de años. Otras indicaciones clínicas de los opioides son: el tratamiento de la disnea, en especial la morfina por vía intravenosa puede ser útil en la disnea que acompaña la insuficiencia cardiaca y el edema agudo de pulmón; el manejo de la tos improductiva que fatiga inútilmente al paciente en el que se indica la codeína. Así como los opioides tienen indicaciones clínicas principalmente como analgésicos, también son consumidos fuera del ámbito médico de manera ilícita por sujetos fármaco- dependientes. En los casos de dependencia psíquica (adicción), la finalidad de su consumo es obtener cambios agradables en el estado de ánimo, descritos como un estado de tranquilidad, desaparición de sensaciones de miedo, ansiedad y aprehensión, desinhibición, elevación del tono vital, placer profundo e intenso ímpetu, seguidos de un periodo de relajación, sedación o somnolencia y un síndrome de abstinencia que obliga al nuevo consumo. Los cuadros de intoxicación aguda por opioides se producen bien sea en el contexto terapéutico
  3. 3. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA T O X I C O L O G Í A Y Q U Í M I C A L E G A L ALCALOIDES o en el de la adicción; estos eventos deben ser considerados una emergencia médica dado el riesgo letal que implican. En esta práctica realizaremos la determinación cualitativa de los alcaloides antes mencionados, mediante reacciones que nos permitan identificarlos. II. PARTE EXPERIMETAL A. ATROPINA La atropina es una droga anticolinérgica natural compuesta por ácido trópico y tropina, una base orgánica compleja con un enlace éster. 1. Reacción de Vitali  Fundamento Se fundamenta en la formación de un compuesto coloreado de color azul violáceo fugaz.  Técnica operatoria Resultado: (-)
  4. 4. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA T O X I C O L O G Í A Y Q U Í M I C A L E G A L ALCALOIDES  Reacción 2. Reacción de Wasicky  Fundamento Se fundamenta en la formación de un compuesto coloreado de color rojo violáceo.  Técnica operatoria           Resultado: (-)
  5. 5. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA T O X I C O L O G Í A Y Q U Í M I C A L E G A L ALCALOIDES  Reacción química B. BRUCINA Es un alcaloide de la nuez vómica y de las habas de san Ignacio. La exposición es peligrosa no sólo por deglución, sino también por inhalación y contacto con la piel. B. Brucina 1. Reacción HNO3 Cuando la brucina esta en contacto con el acido nítrico se desprende ácido carbónico y vapores de nitrito de oxido de metilo, quedando de residuo acido oxálico y una sustancia cristalizada en laminillas, llamada cacothelina. Se fundamenta en la formación de un compuesto coloreado de color rojo denominado cacothelina.  Reacción química C46 H36 N2 O8 + 5 NO 5, HO C40H22 (NO4)2 N2 O10 + Brucina Cacothelina NO2, C2 H3 O3 + 2 C2 O3, HO + 2 NO2 + 4 HO Nitrito de metilo Ácido oxálico P-dimetilaminobenzaldehido Resultado: (-)
  6. 6. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA T O X I C O L O G Í A Y Q U Í M I C A L E G A L ALCALOIDES C. ESTRICNINA 1. Reacción de Marchand Otto: Sensibilidad :1:5 000 000  Reactivos  Ácido sulfúrico  Cristales de bicromato de potasio  Fundamento Se basa en una reacción de óxido reducción en medio ácido, donde bicromato de potasio que actúa como agente oxidante se reduce, dando un compuesto de coloración azul.  Técnica operatoria  En un crisol o una placa de toques colocar gotas de la muestra problema.  Evaporar y adicionar 0,5 ml de ácido sulfúrico concentrado.  Adicionar un cristal de bicromato de potasio.  Observar la reacción positiva evidenciada pro una coloración azul.  Resultado Positivo  Discusión La reacción de Marchand Otto permite identificar la posible estricnina en una muestra, en este caso la reacción fue positiva, lo que es un indicativo de la posible presencia de este alcaloide.  Conclusión Posible presencia de estricnina en la muestra. 2. Reacción de Mandelín  Reactivos  Vanadato de amonio al 1% en ácido sulfúrico concentrado  Técnica operatoria  En un crisol o una placa de toques colocar gotas de la muestra problema.  Evaporar y adicionar 3 gotas del reactivo
  7. 7. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA T O X I C O L O G Í A Y Q U Í M I C A L E G A L ALCALOIDES  Observar la reacción positiva que se evidencia por la aparición de una coloración violeta, la cual al adicionar una gota de agua se torna roja violácea  Resultado Positivo  Discusión La reacción de Mandelín permite identificar la posible presencia de estricnina en una muestra o la ausencia de ella. En este caso la reacción fue positiva, lo que indica que la muestra presenta el alcaloide.  Conclusión La muestra presenta estricnina. ALCALOIDES OPIÁCEOS Este tipo de alcaloides son exclusivos del género Papaver, género que cuenta con mas de cien especies, pero solo una decena biosintetiza la tebaína; y la morfina es solamente elaborada por P. somniferum y P. setigerum. De esta planta se obtiene el opio que es el látex desecado obtenido de las cápsulas inmaduras de P. somniferum. Obtenido por la incisión de las cápsulas de las diferentes variedades, que luego de secado y oxidado, forma una pasta de color café oscuro y de sabor acre y amargo. El opio contiene cerca de 25 alcaloides. Estos se pueden agruparse principalmente en dos grupos: Los derivados de 1 – bencilisoquinolina; cuyo principal representante es la papaverina. Y los análogos de morfina; dentro de los cuales se encuentran la codeína, tebaína y la oripavina. 111 212 3 109 14 6 8 7 15 16NH 17 H OH OOH 111 212 3 109 14 6 8 7 15 16NH 17 H OCH3 OOH
  8. 8. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA T O X I C O L O G Í A Y Q U Í M I C A L E G A L ALCALOIDES D. MORFINA Presenta acción analgésica sobre el sistema nervioso central que se manifiesta a dosis bajas produciendo depresión de la percepción dolorosa; paralelamente, desarrolla una sedación seguida de euforia que pasa progresivamente a sueño, el despertar es particularmente desagradable. Así mismo actúa como un depresor respiratorio. 1. Reacción de Fröehde:  Materiales y reactivos  Reactivo: molibdato de amonio 1% en H2SO4  Capsula de porcelana  Fundamento Reducción del molibdato de amonio con formación de una coloración lila – violáceo virando poco a poco a azul, verde y amarillo hasta llegar al rosado; por acción del OH fenólico en posición 3 y del OH alcohólico en posición 6.  Técnica operatoria  Verter gotas de la muestra problema  Evaporar  Añadir II – III gotas del reactivo + H2SO4(NH4)6Mo7O24 Mo 3+ 111 212 3 109 14 6 8 7 15 16NH 17 H OH OOH
  9. 9. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA T O X I C O L O G Í A Y Q U Í M I C A L E G A L ALCALOIDES  Resultado 2. Reacción de Marquis  Materiales y reactivos  Reactivo: formol 1% en H2SO4  Capsula de porcelana  Fundamento Reducción del acido sulfúrico (H2SO4) por acción del grupo fenolico formando un complejo coloreado violeta; revelado por la alcalinización del medio con formol. 111 212 3 109 14 6 8 7 15 16NH 17 H OH OOH + H H O H2SO4 H O O S OH O O Reacción negativa
  10. 10. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA T O X I C O L O G Í A Y Q U Í M I C A L E G A L ALCALOIDES  Técnica operatoria  Verter gotas de la muestra problema  Evaporar  Añadir II – III gotas del reactivo  Resultado 3. Reacción de Sánchez  Materiales y reactivos  Reactivo: vainillina 0,3% en HCl  Capsula de porcelana  Fundamento La vainillina es protonada en una solución ácida dando como resultado un carbocatión electrofílico débil que reacciona con el anillo, el compuesto formado es deshidratado para dar como resultado un compuesto con color rosa ligero a un intenso rojo cereza OCH3 OH O + H + OCH3 OH OH + 111 212 3 109 14 6 8 7 15 16NH 17 H OH OOH OH OH3CO Reacción negativa
  11. 11. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA T O X I C O L O G Í A Y Q U Í M I C A L E G A L ALCALOIDES  Técnica operatoria  Verter gotas de la muestra problema  Evaporar  Añadir II – III gotas del reactivo  Resultado E. CODEINA Usado en terapéutica pues la metilación del hidroxilo fenólico de la morfina produce modificaciones de la actividad farmacológica, tales como: disminución de la acción analgésica, del efecto depresor respiratorio y la toxicomanía. Además de ser un excelente antitusígeno. Produce acción sedativa a dosis fuertes y prolongadas 1. Reacción de Fröehde  Materiales y reactivos  Reactivo: molibdato de amonio 1% en H2SO4  Capsula de porcelana Reacción positiva
  12. 12. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA T O X I C O L O G Í A Y Q U Í M I C A L E G A L ALCALOIDES  Fundamento Reducción del molibdato de amonio con formación de una coloración verde que luego vira a azul; por acción del OH en posición 3. Sin embargo debido al bajo poder reductor en esta posición se considera negativa para este compuesto una reacción que la caracteriza.  Técnica operatoria  Verter gotas de la muestra problema  Evaporar  Añadir II – III gotas del reactivo  Resultado + H2SO4 111 212 3 109 14 6 8 7 15 16NH 17 H OCH3 OOH (NH4)6Mo7O24 Mo 5+ Reacción negativa
  13. 13. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA T O X I C O L O G Í A Y Q U Í M I C A L E G A L ALCALOIDES 2. Reacción de Marquis  Materiales y reactivos  Reactivo: formol 1% en H2SO4  Capsula de porcelana  Fundamento Reducción del acido sulfúrico (H2SO4) por acción del grupo fenólico formando un complejo coloreado violeta; revelado por la alcalinización del medio con formol.  Técnica operatoria  Verter gotas de la muestra problema  Evaporar  Añadir II – III gotas del reactivo  Resultado + H H O H2SO4 H O O S OH O O 111 212 3 109 14 6 8 7 15 16NH 17 H OCH3 OOH Reacción negativa
  14. 14. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA T O X I C O L O G Í A Y Q U Í M I C A L E G A L ALCALOIDES 3. Reacción de Sánchez  Materiales y reactivos  Reactivo: vainillina 0,3% en HCl  Capsula de porcelana  Fundamento La vainillina es protonada en una solución ácida dando como resultado un carbocatión electrofílico débil que reacciona con el anillo, el compuesto formado es deshidratado para dar como resultado un compuesto con color rosa ligero a un intenso rojo cereza  Técnica operatoria 1. Verter gotas de la muestra problema 2. Evaporar 3. Añadir II – III gotas del reactivo  Resultado OCH3 OH O + H + OCH3 OH OH + 111 212 3 109 14 6 8 7 15 16NH 17 H OH OOH OH OH3CO Reacción positiva
  15. 15. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA T O X I C O L O G Í A Y Q U Í M I C A L E G A L ALCALOIDES  Discusión En cuanto a los resultados obtenidos, se debe tomar en cuenta la pureza de la muestra, ya que la presencia de estas evitaran obtener reacciones nítidas o en caso contrario evidenciar la reacción, sustancias tales como yeso, lactosa, acido bórico, sacarina, cenizas blancas, bicarbonato de sodio, resinosa y arena fina. Así mismo se debe tener en cuenta que estas reacciones no son específicas para uno u otro compuesto, y la evidencia de la coloración de estas estará también ligada a la vigencia y pureza de los reactivos.  Conclusión - Se concluye la no presencia de morfina. - Se presume la presencia de codeína F. PAPAVERINA 1. Reacción con H2SO4 (T.O.)  Fundamento  El ácido sulfúrico concentrado colorea de azul la papaverina (Reacción de deshidratación).  La papaverina posee reacción alcalina y forma sales cristalizables.  La papaverina disuelta en alcohol se deposita bajo la forma de cristales confusos, acumulados, aciculares y blanquecinos; si se rocían los cristales con ácido sulfúrico concentrado, se vuelven azules. El calentamiento favorece la cristalización. H2SO4 + .SO4 Los alcaloides con los ácidos forman sales semejantes a los amonios cuaternarios.
  16. 16. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA T O X I C O L O G Í A Y Q U Í M I C A L E G A L ALCALOIDES  Procedimiento  En una cápsula de porcelana colocar gotas del residuo 4 (alcaloides) y evaporar.  Agregar 4 a 5 gotas de ácido sulfúrico concentrado y calentar. (Se obtendrá una coloración azul).  Enfriar y agregar gotas de agua (coloración naranja).  Agregar gotas de NH4OH (Coloración azul).  Agregar gotas de H2SO4 (coloración naranja).  Resultado Negativo.  Discusión El resultado negativo se atribuye a que no hay en el residuo alcaloides que reaccionen con el ácido por lo que no se evidencia el cambio de coloración.  Conclusión No hay papaverina en el residuo. G. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA  Fundamento El proceso de cromatografía de adsorción se basa en la separación de un soluto entre una fase sólida adsorbente y una fase móvil. El fenómeno de adsorción ocurre en la superficie del granulo de fase fija, y se fundamenta entre la atracción entre el soluto y el adsorbente por formación de uniones dipolo y formación de puentes de hidrógeno. Los alcaloides a partir de soluciones orgánicas en soportes inertes pueden ser revelados gracias a coloraciones que dan con ciertos reactivos. Esto es debido a la propiedad de los alcaloides de dar reacciones coloreadas de precipitación cuando reaccionan con ciertos metales. Es así que usando el reactivo de Dragendorff como revelador se obtendrán manchas que van del rojo anaranjado al violeta (según la naturaleza del alcaloide) y con el reactivo yodoplatinato de potasio manchas que van del café al gris azulado (sobretodo para los alcaloides derivados del opio).
  17. 17. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA T O X I C O L O G Í A Y Q U Í M I C A L E G A L ALCALOIDES  Procedimiento  Sembrar en la placa la muestra a analizar.  Sembrar los estándares.  Llevar a la cuba cromatográfica previamente saturada con el sistema de solventes.  Esperar que corran la muestra y los estándares.  Secar la placa  Revelar  Medir los Rf.  Soporte: Silicagel G  Sistema de solventes  Metanol (100) : NH4OH (1.5)  Metanol (5) : acetona (5) : Trietanolamina (0.03)  Revelador  Iodoplatinato de potasio  Dragendorff  Resultado Negativo La muestra no evidenció ninguna mancha y por ende ninguna correspondencia con la corrida de los estándares de alcaloides. Metanol (100): NH4OH (100.15) Metanol (5) : acetona (5) : Trietanolamina Cuba saturada Placa de silicagel G
  18. 18. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA T O X I C O L O G Í A Y Q U Í M I C A L E G A L ALCALOIDES Revelador Yodoplatinato de Potasio: Revelador Dragendorff: M.P. 4ST. Estricnina Rfm.p.: 5.9/13.9= 0.42 Rfst: 5.8/13= 0.44 ST. Estricnina Rfst : 4/11=0.36 M.P. 4 Rfm.p.: 4.2/11.1= 0.37
  19. 19. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA T O X I C O L O G Í A Y Q U Í M I C A L E G A L ALCALOIDES  Discusión La muestra corrió en la placa debidamente ya que se podía observar la mancha perteneciente a las impurezas en la parte superior de la placa. Se evidenció la presencia del alcaloide Estricnina, lo cual corresponde en el Rf de la placa cromatográfica, así como en las reacciones de identificación cualitativa..  Conclusión Presencia del alcaloide Estricnina en la muestra problema #04 III. DISCUSIONES  En el ensayo realizado para el reconocimiento de la atropina con el hidróxido de potasio en etanol se observó el resultado negativo (no se evidenció la reacción coloreada azul fugaz), así como el segundo ensayo correspondiente a Wasicky se obtuvo negativo, estos ensayos complementarias llevan presuntivamente a la presencia de atropina en la muestra; pero es tambien apreciable para hiosciamina y escopolamina,(1) lo cual se pone a discusión debido al resultado negativo en el ensayo de Wasicky.  El ensayo de reacción con el acido nítrico para identificar brucina indico negativo para presencia de dicho alcaloide.  En las marchas analíticas cromáticas de condensación para estricnina se obtuvo positivo en el ensayo de Marchand-Otto y positivo para Mandelín, de los cuales presuntivamente indica la presencia del alcaloide a discusión, cabe recalcar que la prueba de Marchand-Otto es positivo también en presencia de Yohimbina, curare, gelsemina, cotarnina e hidrastina y que mediante el ensayo de Frohede ( resultado negativo) se descartan la gran mayoría quedándose con dos alternativas de estudio: estricnina y gelsemina.(2)  En los ensayos para morfina y codeína se obtuvieron resultados negativos para las pruebas de Froehde y Marquis, sin embargo en la reacción de Sánchez se aprecia el resultado positivo, que también se obtiene este último en presencia de nicotina que también es un posible componente del residuo 4 (R4) pero que no es producto a discusión en la presente práctica (3) , de acuerdo a esto descartamos la presencia de Morfina y Codeína.  La reacción del acido sulfúrico para reconocer el núcleo isoquinoléico de la papaverina resulto negativo descartándose la presencia de este toxico.  Los ensayos cromatográficos muestran que no hay presencia de bradicina, morfina, atropina, papaverina y codeína en la muestra; sin embargo, cabe señalar que no se evaluaron otros alcaloides, así como otros posibles productos
  20. 20. UNIVERSIDAD NACINAL MAOR DE SAN MARCOS FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA T O X I C O L O G Í A Y Q U Í M I C A L E G A L ALCALOIDES en el residuo 4 y que dada su presuntiva presencia interfieran en los resultados de algunos ensayos cromáticos. IV. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Asociación colombiana para el estudio del dolor .Intoxicación por opioides .Colombia.2009.Disponible en: http://www.dolor.org.co/libros/opioides/11- INTOXICACION.pdf 2. Universidad Complutense de Madrid .Sociedad Farmacéutica de Socorros Mutuos. El restaurador farmacéutico. 2008. 3. Botet R. Universidad Complutense de Madrid .Resumen de química legal: apéndice añadido al análisis químico del Doctor Hill. Editorial José Sol, 1857. 4. Laboratorio de Química. Universidad Nacional Federico Villarreal Alcaloides. 5. Martínez J. Evaluación de la actividad antioxidante de extractos orgánicos de semillas de Heliocarpus terebinthinaceus. Pág. 21. junio, 2007. Disponible en: http://jupiter.utm.mx/~tesis_dig/10150.pdf 6. García L. Actividad biológica e identificación de compuestos del extracto de orujo de uva. Pág. 42. Diciembre, 2010. Disponible en: http://eprints.uanl.mx/2824/1/TESIS_QBP._LEDY_GARC%C3%8DA_CO MPLETA.pdf 7. Universidad Central de Venezuela. Toxicología. Disponible en: ftp://medweb.med.ucv.ve/Bioanalisis/Toxicologia/contenidos/unidad- III/reacciones/particulares/morfina.html 8. García D. Los metabolitos secundarios de las especies vegetales. Pastos y Forrajes, Vol. 27, No. 1, 2004. Disponible en: http://payfo.ihatuey.cu/Revista/v27n1/pdf/pyf01104.pdf 9. Guatelli M. Manual práctico de quimia toxicológica. Editorial universitaria Macchi. Buenos aires. 1958.

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