1. UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA INSTITUTO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE – ICSDEPARTAMENTO DE BIOINTERAÇÃODISCIPLINA: IMUNOLOGIA I – ICS 045 IMUNOFLUORESCÊNCIA Trabalho realizado pela Acadêmica de Medicina Veterinária da UFBA Aretha Alves Borges da Silva sob orientação dos Professores Robert Schaer, Roberto Meyer, Claudia Brodskin e Ricardo Portela. Atualizado em Fevereiro de 2010.
7. Nos testes de imunofluorescência são empregados conjugados constituídos de anticorpos ligados covalentemente a moléculas reveladoras denominadas fluorocromos.
8. 1941: primeira vez que anticorpos foram conjugados com fluorocromos.
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10. São utilizados vários fluorocromos diferentes nos laboratórios clínicos para imunofluorescência.
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12. A reação imunofluorescente que é desencadeada no microscópio de epifluorescência ocorre através da emissão de luz de cor quando o fóton é excitado por luz de curto comprimento de onda (UV).
13. Para deixar passar somente a emissão secundária desejada, devem-se utilizar filtros apropriados dependendo da cor do fluorocromo.
16. IMUNOFLUORESCÊNCIA DIRETA (IFD) Y O anticorpo específico marcado com Fluorocromo (conjugado) é adicionado e se fixa ao antígeno, formando um imunocomplexo estável. Y Y Y Y Y O anticorpo não ligado é removido por lavagens. O preparado é observado em microscópio de fluorescência. Antígeno pesquisado Y Conjugado
22. Necessidade de um conjugadoparacadaantígenoque se desejaidentificaroulocalizar
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24. Detecção direta de microrganismos em secreções, na urina, nas fezes, em cortes de tecidos etc. Também é utilizada na fenotipagem de células tumorais.
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26. IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA (IFI) PARA A PESQUISA DE ANTÍGENOS Incuba-se a célula ou tecido em que se quer pesquisar o antígeno com o anticorpo específico obtido em animal ou um monoclonal, levando à formação de um imunocomplexo. Y Y Y Y Y Y Realiza-se lavagem para retirada do anticorpo não ligante excedente. A preparação é incubada com um conjugado antiimunoglobulina, marcado com fluorocromo, produzido em outra espécie de animal. Antígeno pesquisado Y Y Y Y Y Conjugado O preparado é observado em microscópio de fluorescência. Y Anticorpo Monoclonal
27. IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA (IFI) PARA A PESQUISA DE ANTICORPOS Antígenos padronizados são fixados a lâminas de vidro. O soro do paciente é diluído, colocado sobre o antígeno e incubado para permitir a formação do complexo antígeno-anticorpo. Y Y Y Y Y Y Realizam-se lavagens para a retirada dos anticorpos não ligados. A preparação é incubada com o conjugado fluorescente e, se houver anticorpo no soro, o conjugado reage com o anticorpo específico para o antígeno. Antígeno padronizado Y Conjugado Observa-se o preparado em microscópio de fluorescência. Y Y Y Y Y Anticorpo pesquisado