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  1. 1. GUÍA TÉCNICA GTCCOLOMBIANA 125 2005-10-26GUÍA DE REFERENCIAS DE MÉTODOSHORIZONTALES DE ANÁLISIS MICROBIOLÓGICOSPARA BEBIDAS, ALIMENTOS Y ALIMENTOS PARAANIMALESE: REFERENCES GUIDE FOR HORIZONTAL MICROBIOLOGYCAL METHODS FOR BEVERAGE, FOOD AND ANIMAL FEEDING STUFFSCORRESPONDENCIA:DESCRIPTORES: microbiología de alimentos – métodos horizontales; microbiología de alimentos – alimentos para animales; microbiología de alimentos – bebidas.I.C.S.: 07.100.30Editada por el Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación (ICONTEC)Apartado 14237 Bogotá, D.C. - Tel. 6078888 - Fax 2221435Prohibida su reproducción Editada 2005-11-08
  2. 2. PRÓLOGOEl Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación, ICONTEC, es el organismonacional de normalización, según el Decreto 2269 de 1993.ICONTEC es una entidad de carácter privado, sin ánimo de lucro, cuya Misión es fundamentalpara brindar soporte y desarrollo al productor y protección al consumidor. Colabora con elsector gubernamental y apoya al sector privado del país, para lograr ventajas competitivas enlos mercados interno y externo.La representación de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalización Técnicaestá garantizada por los Comités Técnicos y el período de Consulta Pública, este últimocaracterizado por la participación del público en general.La GTC 125 fue ratificada por el Consejo Directivo de 2005-10-26Esta guía está sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda entodo momento a las necesidades y exigencias actuales.A continuación se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta guía a travésde su participación en el Comité Técnico 25 Microbiología.3M COLOMBIA -DIVISIÓN DE MICROBIOLOGÍA- FARMACOOPACEITES Y GRASAS VEGETALES S.A. FRIGORÍFICO GUADALUPE S.A.ALGARRA S.A. FRIGORÍFICOS COLOMBIANOS S.A.ALPINA S.A. GASEOSAS COLOMBIANAS S.A.AQUALAB LTDA. HOSPITAL DE SAN CRISTÓBALASESORÍAS MICROBIOLÓGICAS HOSPITAL SAN JOSÉASINAL LTDA INSTITUTO NACIONAL DE SALUDASOCIACIÓN COLOMBIANA DE MICROBIOLOGÍA IVONNE BERNIER LABORATORIO LTDA.AVESCO Y KLIK S.A. -LABFARVE- LABORATORIO DEBIANÁLISIS FARMACOLOGÍA VEGETALBIOCONTROL LTDA. LABORATORIO A.B.B.A.BIOIMÁGEN LABORATORIO DE CONTROL DEBIOMERIUX S.A. CALIDAD DEL EJÉRCITOBIOQUILAB LTDA. LABORATORIO LABCONTROLBIOTRENDS LABORATORIOS LABORATORIOS GRAMCALIDAD MICROBIOLÓGICA LARKINCARULLA VIVERO S.A. LESNIAK E.U.CERCAL LTDA. LEVAPÁN S.A.COLEGIO MAYOR DE CUNDINAMARCA MERCADEO DE ALIMENTOS DECOMPAÑÍA NACIONAL DE CHOCOLATES S.A. COLOMBIA S.A.CONGELAGRO MERCK S.A.CREPES & WAFLES S.A. MICROBIÓLOGOS ASOCIADOSEMPRESA DE ACUEDUCTO Y NULAB LTDA.ALCANTARILLADO DE BOGOTÁ –E.S.P.– PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANAENZIPAN DE COLOMBIA LTDA.FÁBRICA DE ESPECIAS Y CONDIMENTOSEL REY S.A.
  3. 3. QUÍMICOS Y REACTIVOS LTDA. -QUIMIREL- SECRETARÍA DISTRITAL DE SALUDREPRESENTACIONES BIOTECNOLÓGICAS SUIZO S.A.LTDA. SURTIQUÍMICOS LTDA.ROCHE DIAGNOSTICS UNIVERSIDAD DE LOS ANDESAdemás de las anteriores, en Consulta Pública el Proyecto se puso a consideración de lassiguientes empresas:ASESORÍAS MICROBIOLÓGICAS MERCK S.A.BAVARIA S.A. MINISTERIO DE PROTECCIÓN SOCIAL.CASA LUKER NESTLÉ DE COLOMBIA S.A.CENICAÑA PASIFLORA COLOMBIANA S.A.CONGELAGRO PRODUCTORA DE CONCENTRADOS YCONSULTORÍAS MICROBIOLÓGICAS JUGOS DE FRUTACOOPERATIVA DE GANADEROS DE PURIFICACIÓN Y ANÁLISIS DE FLUIDOSCARTAGENA LTDA. LTDA.EJÉRCITO QUALA S.A.FRIGORÍFICO SUIZO S.A. QUIOS LTDA.INGENIO PICHICHI S.A. -RICA RONDO- INDUSTRIA NACIONALINGENIO RIOPAILA DE ALIMENTOS S.A.INSTITUTO COLOMBIANO TECNIMICRO LABORATORIO DEAGROPECUARIO -ICA- ANÁLISIS-INVIMA- INSTITUTO NACIONAL DE UNIDAD ADMINISTRATIVA DE SALUDVIGILANCIA MEDICAMENTOS Y PÚBLICAALIMENTOS UNIVERSIDAD CATÓLICA INGECALLABORATORIO MICROBIOLÓGICO SIS VIKINGOSLLOREDA GRASAS S.A.ICONTEC cuenta con un Centro de Información que pone a disposición de los interesadosnormas internacionales, regionales y nacionales y otros documentos relacionados. DIRECCIÓN DE NORMALIZACIÓN
  4. 4. GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125GUÍA DE REFERENCIAS DE MÉTODOS HORIZONTALES DE ANÁLISISMICROBIOLÓGICOS PARA BEBIDAS, ALIMENTOS Y ALIMENTOS PARA ANIMALES1. OBJETO1.1 Esta guía brinda información sobre los métodos horizontales propuestos por diferentesentidades oficiales para el análisis de los alimentos. Son criterios mínimos que todos loslaboratorios deberían considerar al establecer sus técnicas de análisis.1.2 Esta guía fue diseñada para que la utilicen quienes son responsables de realizar losanálisis microbiológicos de alimentos.1.3 Esta guía presenta las características de los medios de cultivo, tiempos, temperatura yforma de expresión de los resultados para cada método horizontal propuesto.1.4 Esta guía no pretende limitar solo el uso de los métodos horizontales, sino por elcontrario presentar también las alternativas de las metodologías propuestas por entidadesoficialmente reconocidas.2. RESUMEN DE LA GUÍAEsta guía describe las directrices más importantes a tener en cuenta en la aplicación de unmétodo horizontal, como son los medios de cultivo, los rangos de temperatura y los tiemposlímites de incubación según el microorganismo a detectar.Aunque esta guía está prevista para aplicarla a todos los alimentos de consumo humanoincluidos los productos lácteos, y alimentos de consumo animal, pueden existir ciertosalimentos a los cuales los métodos de ensayos descritos no aplican debido a la naturaleza dela muestra.3. IMPORTANCIA Y USOLa escogencia de un método horizontal para la evaluación de un alimento determinando suinocuidad o rechazo para consumo humano o animal y los resultados de los análisis, se usanpara control de los procesos o evaluación de la conformidad con la reglamentación queestablece los límites de aceptabilidad para un producto. 1
  5. 5. GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125Los laboratorios que llevan a cabo muestreo de alimentos y generan datos estadísticos, y laspersonas que tienen la responsabilidad de seleccionar un laboratorio para realizar estudios dela calidad de los alimentos, necesitan utilizar criterios, directrices y recomendaciones demétodos oficiales para la evaluación de sus productos.La demostración y documentación por parte de un laboratorio de que hubo una selecciónapropiada del método para el análisis del alimento, incrementa la credibilidad de los datosproducidos y promueve su aceptación.Por lo tanto, la guía proporciona recomendaciones para la selección de los diferentes métodoshorizontales utilizados tanto a nivel internacional, como a nivel nacional para cada uno de losmicroorganismos que se pueden presentar en una muestra para analizar. 2
  6. 6. GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125 Tabla 1. Métodos horizontales para hongos y levaduras Entidad Principio de la Incubación Método Alimentos Medio cultivo Expresión de resultados oficial técnica Temperatura Tiempo Filtración por Número más probable 25 C ± 1 C o o membrana 995.21 Todos los alimentos Agar YM - 11 50 h ± 2 h (NMP) AOAC 2000 hidrofóbica Capítulo 17 Membrana hidrofóbicas Recuento en o o 997.02 Todos los alimentos Yeast and Mold Count 20 C a 25 C 5d Contar cajas hasta 150 Colonias placa Plate Recuento en 1 OGY STANDARD placa METHODS Recuento en Dairy 2 DRBC placa o o Todos los alimentos 25 C ± 1 C 5d Se cuenta entre 15 y 150 colonias Products Recuento en 1992 16th 3 SMA + Clortetraciclina placa Capítulo 8.10 Recuento en 4 PDA placa Oxitetraciclina Se cuenta entre 30 y 300 colonias. Recuento en o o ICMSF 1984 1 Todos los alimentos Gentamicina Extracto de 20 C a 24 C 3da5d Calcular mohos y levaduras por placa levadura Glucosa (YGC) aparte Recuento en o o INVIMA 1998 1 Todos los alimentos OGY 22 C ± 2 C 5da7d Se cuenta entre 20 y 100 colonias placa Continúa . . . 3
  7. 7. GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125 Tabla 1. (Continuación) Entidad Principio de la Incubación Método Alimentos Medio cultivo Expresión de resultados oficial técnica Temperatura Tiempo DRBC (M183) DG18 ( M184) PCA (M124)+ Recuento en Cloranfenicol Capítulo 18 Todos los alimentos Agar maltosa (M185) 25 °C ± 1 °C 5d placa/dilución Agar extracto Malta (M182) Contar cajas entre 10 - 150 colonias Agar Papa Dextrosa (M127) FDA - BAM 2001 Habas, nueces, condimentos, café, DRBC (M183) Recuento en Capítulo 18 coco, etc. Alimentos 25°C ± 1 °C 5d placa directo que deben ser DG18 ( M184) abiertos con pinzas Microscopia Fluorescencia Cuantificación Bebidas y muestras Capítulo 18 Azul de Anilina NaOH levaduras liquidas viables y no viables 4
  8. 8. GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125 Tabla 1. (Continuación) Incubación Entidad Principio de la Método Alimentos Medio cultivo Expresión de resultados oficial técnica Temperatura Tiempo Agar Plate o Contar entre 15 - 150 colonias. 20.52 Todos los alimentos 22 °C a 25 C 5d count+Cloramfenicol Reportar como UFC por g o ml Cereales, arroz, o Contar entre 15 - 150 colonias. 20.53 Agar DG18 22 °C a 25 C 5d nueces y condimentos Reportar como UFC por g o ml o 20.541 Mohos acidofílicos Agar ADYS 25 C 5da7d Mohos o 20.542 Agar AFPA 32 C 42 h a 48 h Aflatosxigénicos APHA o Recuento 20.543 Especies de Fusarium Agar CZID 25 C 7d Capítulo 20 o 20.545 Especies De Mucor Agar MYCK 25 C 5d Contar entre 15 - 150 colonias. Especies De o Reportar como UFC por g o ml 20.546 Agar DRYES 20 C 7da8d Penicilium Levaduras resistentes o 20.547 Agar Agar MAA o TGY 25 °C a 30 C 3da5d a preservantes o 20.548 Hongos Xerofílicos Agar DG18 o MY50G 25 C ± 1 °C 7d Levaduras dominantes o 20.549 Agar MEA o TGY 25 C ± 1 °C 3d en alimentos 5
  9. 9. GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125 Tabla 1. (Final) Entidad Principio de la Incubación Método Alimentos Medio cultivo Expresión de resultados oficial técnica Temperatura Tiempo Recuento en NTC 4132 Agar extracto Contar entre 15 - 150 colonias. o ICONTEC Todos los alimentos levadura, dextrosa, 25 C ± 1 °C 3da5d placa ISO 7954 Reportar como UFC por g o ml cloranfenicol PDA Recuento en o Contar entre 15 - 150 colonias. AACC AACC 4250 Todos los alimentos PLATE COUNT 22 °C a 25 C 3da5d placa Reportar como UFC por g o ml AGAR MALTA 6
  10. 10. GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125 Tabla 2. Métodos horizontales para listeria monocytogenes Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Principio Entidad Tiempo y Tiempo y Tiempo y Expresión de de la Método Alimentos Medio (s) Medio (s) Medio (s) de Tiempo y Medio (s) de oficial Tempera- Tempera- Tempera- resultados técnica de cultivo de cultivo cultivo Temperatura °C cultivo tura °C tura °C tura °C OXA, Iluminación de Henry o 35 C/24 h a 48 h Coloración Gram, PALCAM, Catalasa, Oxidasa Prueba o CAMP Agar 35 C/48 h sangre LPM+esculin/ TSBYE*(A 3+, Fe partir de este o 30 C/24 h a 48 h se inoculan 35 C/24 h o EB+acrifla- vina, ácido las FDA-BAM Todos los o o bioquímicas Presencia Detección Capítulo 10 Caldo EB 30 C 4 h nalidixico y 30 C 44 h 2001 alimentos ó ausencia ciclohexam Reducción de LPM y pasar ida Nitrato (Caldo 35 oC/5 d a: Nitrato M108) o TSAYE 30 C/24 h a 48 h SIM o MTM Amb/7 d Caldo carbohidratos +: Dextrosa, Esculina, o 35 C/7 d Maltosa, Ramnosa, Manitol, Xilosa Continúa... * Hacer pruebas bioquímicas de acuerdo a cada entidad oficial 7
  11. 11. GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125 Tabla 2. (Continuación) Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Principio ExpresiónEntidad Tiempo y de la Método Alimentos Medio (s) Tiempo y Medio (s) Tiempo y Medio (s) de Medio (s) de Tiempo y de oficial Temperatura técnica de cultivo Temperatura °C de cultivo Temperatuta °C cultivo cultivo Temperatura °C resultados °C EB+acrifla- FDA- vina, ácido Kits para Elisa Capítulo Todos los o BAM Detección Caldo EB 30 °C 4h nalidixico y 30 C 44 h 10 alimentos 2001 ciclohexami da Serología Agar Oxford y o o 35 C ± 2 C/ Agar Palcam. Método Iluminación Henry 24 h ± 48 h Pasar a: Agar Triptosa ácido Coloración Gram, Catalasa, Productos o o 30 C ± 2 C/24 h - nalidixico. Oxidasa Caldo EB Pasar a: Lácteos 48 h Agar movilidad- Temperatura nitrato ambiente / 2 d - modificado INVIMA Detección No. 20 o o 5d 35 C ± 2 C/ Hatano Agar tripticasa 18 h a 24 h Schuch soya extracto o Levadura Hemólisis 35 C ± 2 C/24 h TSA-YE Caldo CAMP Caldo LEB o o o o Productos 30 C ± 2 C/18 h LEB2+ 30 C ± 2 C/18 h - o o + acriflavina 35 C ± 2 C/24 h cárnicos -24 h acriflavina 24 h Xilosa, 1% - 48 h 0,2 % Ramnosa, Manitol Serología 8
  12. 12. GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125 Tabla 2. (Continuación) Principio Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Expresión Entidad de la Método Alimentos Tiempo y de oficial Medio (s) Tiempo y Medio (s) Tiempo y Medio (s) de Medio (s) de Tiempo y técnica Temperatura resultados de cultivo Temperatura °C de cultivo Temperatura °C cultivo cultivo Temperatura °C °C Agar sangre 48 h 37 ºC Lácteos, Caldo TSYE: Medio de derivados Utilización de 7 d 37 ºC Enriqueci- enriqueci- lácteos, Medio Oxford carbohidratos miento y 993.12 miento 48 h 30º C 48 h 37 ºC cárnicos, medio TSYE Agar para Aislamiento selectivo 2 d -7 d 25 ºC derivados motilidad completo cárnicos. Medio de test 18 h -24 h 37 ºC CAMP Productos lácteos, carnes rojas, Presencia ó AOAC cerdo, ausencia aves y derivados, caldo MFB Inmunopre productos +Lic. O 997.03 28 h ±2 h 30 ºC BLEB 24±2h 30ºC INMUNOPRECIPITACIÓN cipitación marinos, Caldo frutas, Frazer vegetales, pastas, chocolate, huevos y harina de hueso 9
  13. 13. GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125 Tabla 2. (Continuación) Principio Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento BioquímicasEntidad Expresión de de la Método Alimentos Tiempo y oficial Medio (s) Tiempo y Medio (s) Tiempo y Medio (s) de Medio (s) de Tiempo y resultados técnica Temperatura de cultivo Temperatura °C de cultivo Temperatura °C cultivo cultivo Temperatura °C °C Coloración Gram, Catalasa Caldo 25 ºC ± 2 ºC 2 d - Caldo Motilidad Fraser 24 h - 48 h a 5d Fraser + media Agar Oxford 35 ºC ± 2 ºC Agar sangre 35 ºC ± 2 ºC 24 h Detección agentes ISO todos los concentra- 24 h -48 h a 30 ºC Agar Palcam y para de cordero ±2h Presencia óNTC 4666 y aisla- 24 h 30 ºC ± 2 ºC selectivos. 11290-1 alimentos ción. Caldo ± 2 ºC pasar a TSYEA:18 h - Fermenta- ausencia miento Caldo Leb Leb 1 TSYEA 24 h a 35 ºC ± ción de 2 Caldo 35 ºC ± 2 ºC Caldo 2 ºC carbohidra- Palcam 24 h - 48 h hasta Palcam tos: ramnosa, 5d xilosa, manitol Serología, CAMP Agar Oxford y 24 h a 48 h 35 Coloración Gram, Catalasa, Palcam ó ºC Oxidasa leche y 36.511 productos Caldo M52 48 h 30 ºC lácteos Agar LPM, y 24 h a 48 h 30 pasar a : ºC Fermentación del manitol, Aisla- 24 h - 48 h 30 ramnosa y xilosa APHA TSA-YE miento e ºC Presencia óCapítulo Identifica- ausencia 36 ción Caldo UVM 22 h ± 2 h 30 ºC 26 h a 48 h 35 y pasar a : ± 2 ºC ºC Productos Hemólisis en agar sangre de 36512 Agar MOX cárnicos caballo 26 h a 48 h Caldo FB 26 h -48 h 35 ºC 35 ºC ± 2 ºC 10
  14. 14. GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125 Tabla 2. (Final) Principio Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Entidad Expresión de de la Método Alimentos Tiempo y oficial Medio (s) Tiempo y Medio (s) Tiempo y Medio (s) de Medio (s) de Tiempo y resultados técnica Temperatura de cultivo Temperatu-ra °C de cultivo Temperatura °C cultivo cultivo Temperatura °C °C 24 h a 48 h 30 Coloración Gram, Catalasa, agar LMP ºC Oxidasa Agar oxford 24 h a 48 h 35 Agar sangre 48 h 35 ºC pasar a : ºC de cordero Urea Red de TSA-YE 24 h 30º C 5 d 35 ºC nitratos TSI 7 d temperaturaStandard SIM ambienteMethods todos los Detección 5,4A Caldo LEB 2 días 30 ºC MR-VP 48 h 35 ºCfor Dairy alimentosproducts Fermenta- ción carbohidratos TSBYE + Dextrosa, 7 d 35 ºC esculina, maltosa, ramnosa, manitol, xilosa CAMP 11
  15. 15. GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125 Tabla 3. (Métodos horizontales para Salmonella spp. Principio Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas ExpresiónEntidad de la Método Alimentos Tiempo y Tiempo y Medio (s) Tiempo y de oficial Medio (s) Medio (s) Medio (s) Tiempo y técnica Temperatura Temperatura de Tempera- resultados de cultivo de cultivo de cultivo Temperatura °C °C °C cultivo tura °C Huevos, leche, ponqués, bizcochos, pan, formulas infantiles, caseína, Harina de soya, PARA ALIMENTOS CON fideos, macarrones, ALTA CARGA spaghetti, queso, MICROBIANA TSI, LIA ensaladas o Caldo 35 C/ 24 h ± CONSULTAR NORMAS Urea o preparadas(con 35 C/24 h ± 2 h Lactosa 2h NTC 4491-1 conven- jamón, huevo, pollo, NTC 4491-2 cional atún, pavo), frutas y NTC 4491-3 vegetales NTC 4491-4 deshidratados, o FDA - carnes, crustáceos, Agar BS, 35 C/ 24 h Presencia ó Detección Capítulo 5 pescados, coco, BAM XLD y HE ±2h ausencia ancas de rana, carcasas de conejo Cáscara De Huevo, Caldo o Rappaport o o o o Huevo Liquido, Huevo 35 C/ 24 h ± 42 C ± 0,2 C/ UREA 37 C ± 0,5 C/2 h TS+Sulfato Vassiliadis cocido, colores, 2h 24 h ± 2 h Rápida Baño de María Ferroso (RV) y sabores Solución o Caldo o o Antisuero o o 35 C/ 24 h ± 43 C ± 0,2 C/ 48 C a 50 C/1 h Leche en polvo Verde Tetrationato flagelar 2h 24 h ± 2 h Baño de María Brillante (TT) polivalente o Antisuero Levadura seca, 35 C/ 24 h ± Caldo TS somático 1 min especias 2h polivalente Continúa... 12
  16. 16. GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125 Tabla 3. (Continuación) Principio Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento BioquímicasExpresiónEntidad de la Método Alimentos Medio (s) Tiempo y Tiempo y Medio (s) Tiempo y de oficial Medio (s) Medio (s) Tiempo y técnica de Temperatura Temperatura de Tempera- resultados de cultivo de cultivo Temperatura °C cultivo °C °C cultivo tura °C PARA ALIMENTOS CON Caldo Rojo ALTA CARGA fenol Reconsti- MICROBIANA o dulcitol o tuted 35 C/ 24 h ± CONSULTAR NORMAS o Dulces Caldo Base 35 C/48 h ± 2 h nonfat dry 2h NTC 4491-1 Púrpura milk NTC 4491-2 con 0,5 % NTC 4491-3 dulcitol NTC 4491-4 Rappaport o o Caldo 42 C ± 0,2 C/ Vassiliadis Para cultivos mixtos Triptona o 35 oC/24 h ± 2 h 24 h ± 2 h (RV) y Triptofano o Caldo XLD Caldo KCN 35 C/ 48 h ± 2 h FDA - Tetrationato 35 oC ± 2,0 oC/ 35 °C/ 24 h Presencia ó Detección Capítulo 5 (TT) 24 h ± 2 h Agar Mac ±2h Caldo o BAM 35 C/48 h ± 2 h ausencia Conkey Malonato Caldo Agar HE Test Indol Jugo Naranja Pre- o 35 C/ 24 h ± Caldo (Pasteurizado y No enriqueci 2h Lactosa Pasteurizado miento o Rojo Fenol, 35 C/48 h ± 2 h Universal o Lactosa Púrpura Caldo Sacarosa o Rojo Fenol, 35 C/48 h ± 2 h o Sacarosa Púrpura Caldo MR- o 35 C/48 h ± 2 h VP 13
  17. 17. GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125 Tabla 3. (Continuación) Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Expresión Entidad Principio de Método Alimentos Tiempo y Tiempo y Tiempo y de oficial la técnica Medio (s) Medio (s) de Medio (s) de Medio (s) de Tiempo y Tempera- Temperatura Temperatura resultados de cultivo cultivo cultivo cultivo Temperatura °C tura °C °C °C Agar Citrato o 35 C/96 h ± 2 h Simmons FDA - Agua De o o Detección Capítulo 18 Todos los 35 C ± 2 C/ BAM Peptona o o alimentos 18 h -24 h Caldo Selenito 35 C ± 0,2 C/ Coloración Tamponada Cistina y 18 h - 24 h Gram LIA Agar UREA Agar BS, Lactosa Agar XLD y Glucosa Agar Verde Sacarosa 35 oC ± 2 oC/24 h Caldo o o 35 C ± 2 C/ Lisina Agua Tetrationato brillante - 48h 24 h ± 2 h Movilidad destilada + (TT)+0,2 ml lactosa sacarosa con Caldo Red 5 ml de o Solución de o o Nitrato TSI Leche en 35 C/18 h - 43 C ± 0,2 C/ novobiocina INVIMA Detección solución Yodo + 0,1 ml Citrato Polvo 24 h 18 h - 24 h Verde Solución Simmons Brillante acuosa de Agar 0,1% verde brillante fenilalanina 0,1 % Caldo Triptofano Caldo MR- VP Oxidasa 14
  18. 18. GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125 Tabla 3. (Continuación) Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Expre- Principio Entidad sión de de la Método Alimentos Tiempo y Tiempo y Tiempo y oficial Medio (s) de Medio (s) de Medio (s) Medio (s) de Tiempo y resulta- técnica Temperatura Tempera- Temperatura cultivo cultivo de cultivo cultivo Temperatura °C dos °C tura °C °C Leche Cruda, Caldo o leche Caldo o 35 C/25 h ± 2 h 35 C/24 h ± 2 h Selenito TSI, LIA pasteurizada. Lactosa y 48 h ± 2 h Cistina y o Agar BS, Quesos, yogurt 35 C/24 h ± Agar XLD 35 oC/24 h ± 2 h Leche en polvo, 2h Solución Caldo y Agar HE caseína, postres o UREA o Verde 35 C/24 h ± 2 h Tetrationato 35 C/24 h ± 2 h congelados, Convencional Brillante (TT) mantequilla o o 37 C ± 0,5 C/2 UREA Rápida h Baño de María o o Antisuero 48 C - 50 C/ 1 flagelar h Baño de polivalente María Antisuero Presenci Standard Capítulo 5 Detección somático 1 min aó Methods No. 5,4 B polivalente ausencia Agar Lisina o Caldo o Agar BS, 35 C/48 h ± 2 h Todos los Caldo o 35 C/24 h ± o Decarboxilasa 35 C/24 h ± 2 h Tetrationato Agar XLD 35 C/24 h ± 2 h alimentos Lactosa 2h (TT) y Agar HE Caldo Rojo fenol dulcitol o o Caldo Base 35 C/48 h ± 2 h Púrpura con 0,5% dulcitol Caldo o Triptona o 35 C/24 h ± 2 h Triptofano o Caldo KCN 35 C/48 h ± 2 h Caldo o 35 C/48 h ± 2 h Malonato 15
  19. 19. GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125 Tabla 3. (Continuación) Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Principio ExpresiónEntidad de la Método Alimentos Tiempo y Tiempo y de oficial Medio (s) Tiempo y Medio (s) de Medio (s) Medio (s) de Tiempo y técnica Tempera- Temperatura resultados de cultivo Temperatura °C cultivo de cultivo cultivo Temperatura °C tura °C °C Test Indol Caldo Lactosa Rojo Fenol, o 35 oC/48 h ± 2 h Lactosa Púrpura Caldo Sacarosa Rojo o Fenol, o 35 C/48 h ± 2 h Sacarosa Caldo o Agar BS, o PúrpuraStandard Capítulo 5 Todos los Caldo o 35 C/24 h ± 35 C/24 h ± 2 Detección 35 C/24 h ± 2 h Tetrationato Agar XLD y oMethods No. 5,4 B alimentos Lactosa 2h h Caldo MR-VP 35 C/48 h ± 2 h (TT) Agar HE Agar Citrato o 35 C/96 h ± 2 h Simmons Sistemas multitest Rápidos 16
  20. 20. GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125 Tabla 3. (Continuación) Principio Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Expresión Entidad de la Método Alimentos Tiempo y Tiempo y Tiempo y de oficial Medio (s) de Medio (s) de Tiempo y Medio (s) Medio (s) de técnica Tempera- Tempera- Tempera- resultados cultivo cultivo Temperatura °C de cultivo cultivo tura °C tura °C tura °C Presencia ó o ausencia 35 C a 37 Agar Lisina de ºC durante Hierro Salmonella 24 h en g de producto. Levadura Agua destilada desecada Agua destilada leche en polvo + 2 ml de descremada y solución verde ICMSF Detección. 1 entera brillante al 1% Leche en polvo Caldo caramelos y reconstituida tetrationato 43 ºC ± 0,05 ºC Agar sulfito 35 ºC a 37 ºC Agar triple dulces con verde verde 24 h. bismuto durante 48 h azúcar hierro brillante brillante Caldo lactosa + 1 % de Subproductos Tergitol o agua grasos de de peptona animales, coco tamponada con 0,22 % de Tergitol 17
  21. 21. GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125 Tabla 3. (Continuación) Principio Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas ExpresiónEntidad de la Método Alimentos Medio (s) Tiempo y Tiempo y Tiempo y de oficial Medio (s) Medio (s) Medio (s) de Tiempo y técnica de Temperatura Temperatura Tempera- resultados de cultivo de cultivo cultivo Temperatura °C cultivo °C °C tura °C PARA ALIMENTOS CON ALTA CARGA MICROBIANA Agar BS o TSI CONSULTAR NORMAS 35 C/24 h ± o Huevos, leche, Agar XLD Urea 35 C/24 h ± 2 h NTC 4491-1 2h ponqués, Agar HE convencional NTC 4491-2 bizcochos, pan, NTC 4491-3 formulas NTC 4491-4 infantiles, caseína, Harina de soya, fideos, macarrones, Rappaport o 42 ºC ± 0,2 C/ o spaghetti, queso, Vassiliadis LIA 35 C/48 h ± 2 h 24 h ± 2 h ensaladas (RV) Método de Caldo o o 37 ºC ± 0,5 C/ Presencia/ APHA 37.5 preparadas(con 35 C/24 h ± 2 h Caldo o 43 ºC ± 0,2 C/ Referencia Lactosa UREA Rápida 2 h Baño de ausencia jamón, huevo, TBG 24 h ± 2 h pollo, atún, pavo), María o frutas y vegetales Antisuero 48 ºC a 50 C/ deshidratados, flagelar 1 h Baño de carnes, polivalente María crustáceos, pescados, coco, Antisuero ancas de rana, somático 1 min carcasas de polivalente conejo Caldo Rojo fenol dulcitol o Caldo Base o Púrpura 35 C/48 h ± 2 h bromocresol con 0,5 % dulcitol 18
  22. 22. GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125 Tabla 3. (Continuación) Principio Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Expresión Entidad de la Método Alimentos Tiempo y Tiempo y de oficial Medio (s) de Tiempo y Medio (s) Medio (s) Medio (s) de Tiempo y técnica Temperatura Tempera- resultados cultivo Temperatura °C de cultivo de cultivo cultivo Temperatura °C °C tura °C PARA ALIMENTOS Caldo Triptona o CON ALTA CARGA 35 C/24 h ± 2 h o Triptofano MICROBIANA o CONSULTAR NORMAS Caldo KCN 35 C/48 h ± 2 h NTC 4491-1 Caldo o NTC 4491-2 35 C/48 h ± 2 h Malonato NTC 4491-3 NTC 4491-4 Test Indol 35 ºC 24 h Cáscara De Huevo, Huevo Caldo Lactosa o Liquido, Huevo o 35 °C/24 h ± púrpura 35 C/24 h a Método de Caldo TS 35 C 24 h ± 2 h Caldo SC 37.5 cocido, colores, 2h bromocresol o 48 h Referencia sabores, rojo fenol Levadura seca, Caldo APHA Solución Sacarosa Rojo o Caldo 35 °C/24 h ± o Leche en polvo Verde 35 C/24 h ± 2 h Fenol, o 35 C/48 h ± 2 h TBG 2h Brillante Sacarosa Púrpura especias de Caldo o o 35 C/24 h ± 2 h Caldo MR-VP 35 C/8 h ± 2 h cebolla y ajo lactosa Caldo o Agar Citrato o Dulces 35 C/24 h ± 2 h 35 C/96 h ± 2 h lactosa Simmons leche en polvo, Agar Lisina huevo Caldo o y Agar HE 43 C/24 h Filtración pulverizado, lactosa, o ó Por queso Caldo TS, o Caldo 35 C/6 h a 37.72 35 C/18 h a 24h membrana pulverizado, Solución TBG 8h Hidrofóbica pimienta, Verde o Brillante Agar EF-18 35 C/24 h chocolate y pollo crudo 19

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