Timelapse gr

23/11/2011 Μορφοκινητικές μελέτες σε in vitro έμβρυα και παράμετροι επιλογής εμβρύου για επιτυχή εγκυμοσύνη.Time lapse observations in pre-implantation embryos and factors effecting implantation potential ART Σήμερα• 1-4% παιδιά έχουν γεννηθεί στην Ευρώπη• 400,000 κύκλοι/έτος• 22% πολύδημες γεννήσεις• Ποσοστό επιτυχίας σχετικά χαμηλό• Τάση στην Β. Ευρώπη μείωσης των πολύδημων κυήσεων/ SET• Ανησυχία για τη δημόσια υγεία Andersen (ESHRE) 2009, Seli 2011 1

23/11/2011 ART Σήμερα• 1-4% παιδιά έχουν γεννηθεί • Ανικανότητα επιλογής του στην Ευρώπη εμβρύου με την καλύτερη δυναμική• 400.000 κύκλοι/έτος • Μη παρεμβατικές τεχνικές• 22% πολύδημες γεννήσεις “omics” :πολλά υποσχόμενες δυνατότητες αλλά• Ποσοστό επιτυχίας σχετικά χρονοβόρες-τεχνικά χαμηλό απαιτητικές• Τάση στην Β. Ευρώπη μείωσης • Παρεμβατική-βιοψία των πολύδημων κυήσεων/ SET εμβρύου-FISH αντικαθιστάται από CGH• Ανησυχία για τη δημόσια • Ακόμα βασίζεται στην υγεία παρατήρηση Andersen (ESHRE) 2009, Seli 2011 Επιλέγοντας το καλύτερο έμβρυο Τα Στάδια της διαίρεσης του εμβρύου 19 ώρες 48 ώρες 72 ώρες 115 ώρες 2

23/11/2011Elder, 2007 Μορφολογία Προπυρήνων * 3

23/11/2011 Μορφολογία Προπυρήνων *Προσανατολισμός Προπυρήνων Balaban. Hum. Reprod. 16.11. (2001) 4

23/11/2011Προσανατολισμός Προπυρήνων Τρέχουσα υπόθεση: οι προπυρήνες παράλληλοι στον πολικό άξονα Πρώτη διαίρεση Διαφορετικές στρατηγικές για την ημέρα της εμβρυομεταφοράς: ? Ημέρα 5 Μόνο στο στάδιο της βλαστοκύστης ‘Υψηλότερα ποσοστά …. ……..εμφύτευσης ? Ημέρα 2-3 ή 5 Όποια και αν είναι η προσέγγιση- βασίζεται στην μορφολογία- δύσκολη η πρόβλεψη 51% 5ης ημέρας έμβρυα προεπιλέγονται την 3η ημέρα (Rijenders, 1998 ) 5

23/11/2011 2010 Σύστημα Βαθμολόγησης Μορφολογία προπυρήνα Πρώιμη 1η διαίρεση Παρουσία κυστιδίων, πολλαπλών πυρήνων Αριθμός βλαστομεριδίων /στάδιοFranscovits, 2006 6

23/11/2011 Η εμφύτευση συνδέεται με ακριβή χρονικά γεγονότα Γεγονός Εμφάνιση Εξαφάνιση 1st διαίρεση 2nd διαίρεση 3rd διαίρεση προπυρήνων προπυρήνωνΔιακύμανση 7.8-11.1 Εκτός 22.3- Εκτός 24.4-28.2 Εκτός 35.3-40.6 Εκτός 36.0-41.6 Εκτός (h) διακύμαν 25.8 διακύμαν διακύμαν διακύμαν διακύμαν σης σης σης σης σης 100% 15 13 23 12 23 12 13 5 19 7εμφύτευση (54%) (46%) (66%) (34%) (66%) (34%) (72%) (28%) (73%) (27%) N (%) 0% 60 62% 55 67 57 67 43 52 45 56εμφύτευση (49%) (51%) (45%) (55%) (46%) (54%) (45%) (55%) (45%) (55%) N (%) Herrero, 2010 Η εμφύτευση συνδέεται με ακριβή χρονικά γεγονότα Γεγονός Εμφανιση Εξαφάνιση 1st διαίρεση* 2nd διαίρεση* 3rd διαίρεση* προπυρηνων προπυρήνων*Διακύμανση 7.8-11.1 Εκτός 22.3- Εκτός 24.4-28.2 Εκτός 35.3-40.6 Εκτός 36.0-41.6 Εκτός (h) διακύμαν 25.8 διακύμαν διακύμαν διακύμαν διακύμαν σης σης σης σης σης 100% 15 13 23 12 23 12 13 5 19 7εμφύτευση (54%) (46%) (66%) (34%) (66%) (34%) (72%) (28%) (73%) (27%) N (%) 0% 60 62% 55 67 57 67 43 52 45 56εμφύτευση (49%) (51%) (45%) (55%) (46%) (54%) (45%) (55%) (45%) (55%) N (%) Herrero, 2010 7

23/11/2011Ακριβής χρόνος των ενδιάμεσων φάσεων ID2 ID3 ID4 3-4cc 5-8cc 9-16cc 10-20 30-50 40-70 min min min IP1 IP2 IP3 IP4 1-2cc 2-3cc 4-5cc 8-9cc20-26 hrs 10-12 14-16 22-24 hrs hrs hrs 1st cycle 2nd cycle 3rd cycle 4th cycle Hlinka 2010 Κυτταρικός κύκλος Οργάνωση πυρήνα και μίτωση Οργάνωση οργανιδίων Διαίρεση κυττάρου Συγχρονισμός κυττάρου 8

23/11/2011 Κυτταρικός κύκλος Οργάνωση πυρήνα και μίτωση Οργάνωση οργανιδίων Διαίρεση κυττάρου Συγχρονισμός κυττάρου Μετάβαση ελέγχου: Aπό Μητρικό σε Ζυγωτικό γονιδίωμα Μητρικός έλεγχος Ζυγωτικός έλεγχοςΓονιμοποίηση Μορφολογικά κριτήρια επιλογής εμβρύων βάση ερευνών: Κυτταρική διαίρεση Κυτταρική συμμετρία Συγχρονισμός Μέγεθος βλαστομεριδίου και παρουσία θραυσμάτων Παρουσία πολλαπλών πυρήνων 9

23/11/2011 t2 t3 t4 t5 Cc: cell cycle cc2 = t3-t2 cc3 = t5-t4 cc2 s2 cc3 s2 = t4-t3t2=25,6h (24,3-25,8h)t3=37,4h (35,4-37,8h)t4=38h (36,4-38,9h) cc2=11,8ht5=52,3h (48,8-56-6,h) s2 = <0.76h Time lapse • >4mm οπτικό πεδίο • 1 micron/pixel ανάλυση • Κατάλληλο πράσινο φώς • 1/10000 κανονικού φωτός • Αξιόπιστο, μικρό-μηχανική • Ανάλυση software 10

23/11/2011Time lapse • >4mm οπτικό πεδίο • 1 micron/pixel ανάλυση • Κατάλληλο πράσινο φώς • 1/10000 κανονικού φωτός • Αξιόπιστο, μικρό-μηχανική • Ανάλυση software • Εντός του επωαστήTime lapse 11

23/11/2011 Time lapse• Βελτιωμένο σύστημα καλλιέργειας• Καλλιέργεια εμβρύων σε ομάδες (“group effect”)• Τα έμβρυα αναπτύσσουν το δικό τους μικροπεριβάλλον• Επικοινωνία εμβρύων Vajta et al., 2008 12

23/11/2011 13

23/11/2011Time lapse Παράμετροι 14

23/11/2011 15

23/11/2011 ΜΗΤΕΡΑ _IVF Αποτελέσματα15 cx, 32-42 yrs., ICSI, Day 2-3 ETΕμφάνιση προπύρηνων/εξαφάνιση, πρότυπα διαίρεσης, θραύσματα Αριθμός Θετική β- Συνολικός αριθμός Αριθμός εμβρύων Χοριακή Εμβρυομεταφορών που εμφυτεύτηκαν 15 8 (53%) 39 12 (31%) 16

23/11/2011 ΘραύσματαIn vitro έρευνα με έμβρυα μυώνPrediction of developmental potential, Pribenszky, 2010Σημαντικός ο ακριβής εντοπισμός των πρώιμων διαιρέσεων 17

23/11/2011 In vitro έρευνα με έμβρυα μυών Prediction of developmental potential, Pribenszky, 2010Μειωμένη η πιθανότητα να φτάσουν στο στάδιο της βλαστοκύστης αν εμφανιστούνθραύσματα κατά την εμβρυική ανάπτυξη 35 In vitro έρευνα με έμβρυα μυών Prediction of developmental potential, Pribenszky, 2010Μειωμένη η πιθανότητα να φτάσουν στο στάδιο της βλαστοκύστης αν εμφανιστούνθραύσματα κατά την εμβρυική ανάπτυξη 36 18

23/11/2011 Σημαντικότητα των θραυσμάτων Διάρκεια εμφάνισης/εξαφάνισης των θραυσμάτων • 12% των εμβρύων παρουσίασαν θραύσματα • 89% των θραυσμάτων είχαν απορροφηθεί • Ο μέσος χρόνος εμφάνισης/εξαφάνισης των θραυσμάτων ήταν 9.1 h ( +/- 442) λεπτά (dotted line) • Η πιθανότητα να ΜΗΝ παρατηρήσουμε τα θραύσματα σε καθημερινό ημερήσιο έλεγχο: 72% !!! ( 61% – 94%) 37 Ανώμαλη κυτταρική διαίρεσηΔιαίρεση 1-3 κύτταρα 19

23/11/2011Ανώμαλη κυτταρική διαίρεση, μονός αριθμός βλαστομεριδίων σχετίζεται με ανευπολοειδία 3-4 Κύτταρα eTime line profileTime line profileCGH profile- μοριακός καρυότυπος e e 20

23/11/2011 Τι μάθαμε?Εν κατακλείδι• Πιο βαθιά ματιά στην εμβρυική ανάπτυξη• Δυνατότητα μορφολογικής και χρονολογικής ανάλυσης• Κινητικοί δείκτες ποιότητας εμβρύου α) πρώιμη διαίρεση β) 2,3,5 κύτταρα• Παράγοντες αποκλεισμού: 1-3 διαίρεση κυττάρου,εκτός χρονικών ορίων, θραύσματα, παρουσία πολλαπλών πυρήνων Τι μάθαμε? Μέλλον • Προσαρμογή-Ανάλυση μεμβρανών- πρόβλεψη 90% να φτάσει το έμβρυο στο στάδιο της βλαστοκύστης (Wong, 2010) • Κατανάλωση οξυγόνου- αυξημένη κατανάλωση κατά την γονιμοποίηση / πρώτη διαίρεση σχετίζεται με δυναμική • Εργαλείo μάθησης, DVD, πόρισμα, remote viewing 21

23/11/2011Τι μάθαμε? Μέλλον • Προσαρμογή-Ανάλυση μεμβρανών- πρόβλεψη 90% να φτάσει το έμβρυο στο στάδιο της βλαστοκύστης (Wong, 2010) • Κατανάλωση οξυγόνου- αυξημένη κατανάλωση κατά την γονιμοποίηση / πρώτη διαίρεση σχετίζεται με δυναμική • Εργαλείo μάθησης, DVD, πόρισμα, remote viewingΤι μάθαμε? Μέλλον • Προσαρμογή-Ανάλυση μεμβρανών- πρόβλεψη 90% να φτάσει το έμβρυο στο στάδιο της βλαστοκύστης (Wong, 2010) • Κατανάλωση οξυγόνου- αυξημένη κατανάλωση κατά την γονιμοποίηση / πρώτη διαίρεση σχετίζεται με δυναμική • Εργαλείo μάθησης, DVD, πόρισμα, remote viewing 22

23/11/2011 23

Timelapse gr

by Kosmogonia IVF on Dec 04, 2011

Accessibility

Categories

Tags

Upload Details

Usage Rights

Statistics

Timelapse gr — Document Transcript