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Evaluación de soportes en tromboplastina
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Evaluación de soportes en tromboplastina

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  • 1. Evaluación del efecto de diferentes soportes de liofilización sobre la tromboplastina.Realizó: QFB Carlos Enrique Guillén Barrios.Departamento de Nuevos Productos.Fecha: 28 FEB 2013.Resumen.Para probar el efecto que tienen diferentes soportes de liofilización sobre una tromboplastina en desarrollo, se realizó laprueba manual de tiempo de protrombina con plasma control liofilizado. Los soportes probados fueron manitol,sorbitol, glicina y sacarosa, en concentraciones de 0 a 4.5%. Se presentaron los tiempos de coagulación en cada casoencontrando que la glicina presenta menor interferencia en el tiempo de coagulación del plasma control.Objetivo. alguna tendencia de disminución o aumento del TP. LosDeterminar la aptitud de diferentes soportes de resultados se pueden observar en la Tabla 2 y en elliofilización para aplicarse en la tromboplastina Gráfico 2.liofilizada en desarrollo.Metodología. Soporte Concentración TP (s)Tromboplastina. Se prepararon 100 mL por el método 0.0% 12.47TRL-02. 1.5% 12.47Solución de calcio 25 mM: Se preparó una solución de Manitol 3.0% 12.92Cloruro de calcio 25 mM con Azida de sodio. Se 4.5% 13.27prepararon 0.0% 12.47Adición de Soportes: Se prepararon soluciones de 0.0%, 1.5% 12.311.5%, 3.0% y 4.5% de los diferentes soportes de Glicina 3.0% 11.79manitol, sorbitol, glicina y sacarosa pesando la cantidad 4.5% 11.97necesaria de cada uno y aforando con la solución de 0.0% 12.47calcio 25 mM. Cada una de las soluciones de Calcio- 1.5% 12.76 SacarosaSoporte se utilizó para diluir alícuotas de 3.0% 12.71tromboplastina líquida en proporción 1:1. 4.5% 12.19Plasma control: Se utilizó el plasma control preparado 0.0% 12.47por el método PLA-NOV.2012.1 identificado como 1.5% 12.51 Sorbitol28.NOV.2012, reconstituyendo cada frasco con 1.0 mL 3.0% 12.70de agua destilada. 4.5% 12.90Procedimiento: Se realizó la prueba de tiempo de Tabla 1. Tiempos de protrombina obtenidos.protrombina (PT) al plasma control evaluando cadasoporte a diferentes concentraciones, teniendo un Evento TP (s)panel de 16 pruebas que se realizaron por triplicado. La 1 12.56prueba se desarrollo a 37°C agregando 200 µL de 2 12.43tromboplastina cálcica a 100 µL de plasma control. 3 12.1 4 13.11 5 12.23Resultados. 6 11.93El tiempo promedio de coagulación con cada soporte 7 11.95se muestra en la Tabla 1 y se puede visualizar en el 8 11.88Gráfico 1. Media 12.273La evaluación del reactivo sin soporte (concentración D.E. 0.416cero) se llevó a cabo entre las determinaciones para Tabla 2. TP del plasma control.cada soporte, para detectar en el plasma control
  • 2. Gráfico 1. Tiempos de protrombina obtenidos. Faltaría determinar el efecto de los diferentes soportes sobre la sensibilidad del reactivo, mediante una calibración del Índice Internacional de Sensibilidad (ISI). La evaluación del plasma muestra una tendencia a disminuir el tiempo de coagulación a través del tiempo y se observa una probable. Conclusiones. A reserva de los resultados del Índice Internacional de Gráfico 2. TP del plasma control. Sensibilidad y de la apariencia del producto después de la liofilización, la glicina es el soporte con mejores resultados sobre el TP, seguida de sacarosa. Por otro lado, no es recomendable el uso de manitol y sorbitolAnálisis de resultados debido a su efecto prolongador del tiempo deLas curvas obtenidas muestran pendientes positivas coagulación.para el manitol (0.30) y el sorbitol (0.17); mientras quela pendiente es negativa en el caso de la sacarosa (- Perspectivas en el desarrollo del producto.0.02) y la glicina (-0.18). Esto quiere decir que, Para continuar con el desarrollo se sugiere realizar yaparentemente, la adición de glicina logra no solo no evaluar formulaciones de tromboplastina liofilizadaafectar el TP, sino disminuirlo. que incluyan glicina 1.5%, 3.0% y 4.5%.

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