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La TincióN De Gram
 

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    La TincióN De Gram La TincióN De Gram Presentation Transcript

    • Tinción de Gram M.Angélica Martínez, Germán Hermosilla, Gonzalo Osorio Programa de Microbiología y Micología Facultad de Medicina-Universidad de Chile
    • Utilidades
      • Divide las bacterias en Gram positivas y en Gram negativas, clasificación que es de gran utilidad para elegir un antimicrobiano
      • Otorga una identificación preliminar de la bacteria causante de la infección
      • Ayuda a interpretar los cultivos, puesto que los morfotipos bacterianos observados al Gram se deben corresponder con los aislamientos bacterianos realizados en los cultivos
    • Antecedentes históricos
      • Hans Christian Joachim Gram (1853-1938), fue un médico danés con estudios en bacteriología y farmacología. En 1884, mientras se encontraba en Berlín intentando aislar y observar neumococos de pulmones de pacientes muertos de neumonia, observó que algunas bacterias retenían la coloración con violeta de genciana, si previo al lavado con alcohol se les agregaba una solución descrita por Paul Ehrlich (lugol), mientras que otras no lo hacían. La tinción original que empleaba Gram difería de la actual por cuanto el no usaba colorante de contraste para teñir las bacterias Gram negativas. La tinción de Gram continúa siendo la tinción mas utilizada en Microbiología
    • Fundamentos
      • La técnica revela diferencias constitutivas de la pared celular entre bacterias Gram positivas y Gram negativas. La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglicano, la cuál impide que escape el complejo cristal violeta-lugol. Por el contrario, la capa de peptidoglicano de las Gram negativas es delgada y se encuentra unida a una membrana externa lipídica, susceptible a la decoloración con el alcohol-acetona, el que actúa como un solvente orgánico.
    • Protocolo
      • Fijar la muestra con calor a la llama, ó a temperatura ambiente
      • Teñir con cristal violeta por 1 min y lavar con agua
    • Protocolo Agregar Lugol y esperar 1 minuto Lavar con agua Lavar brevemente con alcohol-acetona Lavar con agua
    • Protocolo
      • Agregar Safranina y esperar 15 segundos
      • Lavar con agua
      • Secar en papel absorvente
    • Explicación
      • El Lugol entra en las células y forma un complejo insoluble con el cristal violeta
      • La mezcla de alcohol-acetona sirve para realizar la decoloración. Las bacterias Gram positivas no se decoloran, mientras que los Gram negativas sí lo hacen.
      • Para poner de manifiesto las bacterias gramnegativas se utiliza una coloración de contraste de color rojo; safranina ó fucsina. Después de la coloración de contraste las células gramnegativas son rojas, mientras que las grampositivas permanecen azules.
    • Interpretación Gram positivo Gram negativo