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Vectores de adn recombinante
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Vectores de adn recombinante

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  • 1. Vectores de ADN recombinante Eduardo Puentes Fredy Garcia Juan E. Salazar
  • 2. ¿ QUE SON LOS VECTORES DE CLONACIÓN ? • Son pequeñas moléculas transportadoras, que tienen capacidad para transferir y replicar fragmentos de ADN.
  • 3. TIPOS DE VECTORES • Existen varios tipos de vectores de clonación, que dependen de la célula huésped, el tamaño de los insertos que pueden transportar y en características como el número de copias que producen, el número y tipo de genes marcadores que contienen.
  • 4. PLASMIDOS • Fueron los primeros vectores que se desarrollaron. • Estos vectores proceden de moléculas de ADN de doble cadena que se encuentran de manera natural y que se replican autónomamente dentro de las células bacterianas.
  • 5. pUC 18 • Es pequeño, de modo que puede transportar fragmentos de ADN relativamente grandes (de unos 10.000 pares de bases). • Tiene un origen de replicación y puede producir hasta 500 copias de los fragmentos de ADN insertado por célula. • Se ha modificado para que presente muchas secuencias de reconocimiento para enzimas de restricción que se han agrupado en una región denominada polylinker • Permite la identificación sencilla de los plásmidos recombinantes, ya que contiene un fragmento del gen bacteriano lacZ que produce colonias de color azul. Si se inserta un fragmento de ADN en el polylinker, se inactiva este gen, y da lugar a colonias de color blanco.
  • 6. BACTERIOFAGO LAMBDA Para clonar ADN utilizando este vector • Se purifica el ADN del fago • Se corta con una enzima de restricción, tanto el ADN del fago como el fragmento ADN de interes. • Se unen con una ADN ligasa. • Los vectores lambda recombinantes se empaquetan in vitro. • Se introducen en células huesped bacterianas. • Dentro de las bacterias, los vectores se replican formando muchas copias del fago infectivo, llevando todas el fragmento de ADN de interés. • Los vectores fágicos pueden transportar fragmentos de hasta 20 kb
  • 7. COSMIDOS • son vectores hibridos utilizando partes del cromosoma de lambda y de plásmidos. Los cósmidos pueden transportar casi 50 kb de ADN insertado.
  • 8. CROMOSOMAS ARTIFICIALES DE LEVADURA • Los YAC tiene telómeros en sus extremos, un origen de replicación y un centrómero. Estos componentes están unidos a genes marcadores de selección y a un grupo de enzimas de restricción para insertar ADN exógeno. • Estos cromosomas artificiales de levadura permiten clonar grandes trozos de ADN, de 100 a 1000 kb.
  • 9. CROMOSOMA ARTIFICIAL BACTERIANO • Basado en el plásmido de fertilidad de bacterias. • El factor F es un plásmido que se replica independientemente y que transfiere información genética durante la conjugación bacteriana. • Los BAC pueden transportar insertos de hasta 300 kb.
  • 10. FAMEGIDOS • Es un plásmido y al que se le incorporo el origen de replicación de un fago filamentoso (fagos de ácido desoxirribonucleico monocatenario), De este modo mantiene todas las utilidades de los plásmidos pero además tiene la capacidad de producir ADN monocatenario.

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