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microbiología clínica: urocultivo, coprocultivo, hemocultivo,
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Cultivos
 Son medios esenciales para determinar la
identidad, cantidad y patogenicidad de un
microorganismo.
 Secreción:...
UROCULTIVO
•Es la determinación de elementos anormales,
observación del sedimento urinario y cultivos en medios
selectivos...
UROCULTIVO
Determinación
Volumen
(ml)
Comentarios
BACTERIAS 0.5-1
PRIMERA ORINA DE LA
MAÑANA
HONGOS > 20
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UROCULTIVO
 METODO
 Tomar la orina sin centrifugar, con el asa de siembra
calibrada, es decir q cada asada suministre 0,...
UROCULTIVO
Lectura e Interpretación
Detallar las características de las colonias en el
medio
Seleccionar colonias y res...
Negativo
(contaminación)
De 0 – 10 000 bacterias por ml
de orina
Dudoso, discutible ( debido al
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COPROCULTIVO
•Se toma muestra para identificar parásitos y otros
microorganismos que causan diarrea, para valorar la
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COPROCULTIVO
• MATERIALES :
• Recipientes
indicados, hisopo
rectal estéril, cinta
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transparente 12 x 1
cm (huevos ...
COPROCULTIVO
2) Examen bacteriológico
 Usar un recipiente estéril para la muestra.
 Se debe recolectar antes de la admin...
COPROCULTIVO
Lectura e Interpretación
Se puede identificar: helmintos, huevos o
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HUEVO DE ASCARIS EN
HECES
HUEVO DE TENIA EN
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HUEVO DE TRICHURIS
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ADULTO DE ECHINOCOCCUS
HEMOCULTIVO
•Es la prueba más útil y más frecuentemente usada para
demostrar la presencia de microorganismos en la sangre....
HEMOCULTIVO
 METODO
 Se extrae sangre del pliegue del codo en forma
aséptica
 Sembrar 5-10 ml de sangre ( mayor cantida...
HEMOCULTIVO
Lectura e Interpretación
Examinar el frasco diariamente durante la primera
semana para detectar la aparición...
Las secreciones que pueden determinarse son
entre otras:
• Tracto Respiratorio:
• Óticas: conducto auditivo externo
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Tracto Respiratorio: Muestras
Tracto
Respiratorio
Superior
Tracto Respiratorio
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Tracto Respiratorio
Método
•Se obtiene la
secreción faríngea.
•Paciente sentado, abre
la boca, baja la lengua
y dice Ahhh....
•El frotis faríngeo es un importante test para
diagnosticar y tratar con una gran precisión las
infecciones que causan los...
Secreción Ótica
Método:
•Si la pus sale al exterior,
es preferible eliminarlo
con algodón estéril.
•Introduce el hisopo en...
Secreción Vaginal
Método:
•La muestra es tomada del C.
cervical.
•En gonorrea: antes o inmediat
después de la menstruación...
Secreción Uretral
Método:
•Se toma la muestra a primera hora de
la mañana, antes q el paciente haya
orinado
•Limpiar el me...
Exudados y/o heridas
Método:
1)Muestra de Fluidos
•Lavar la lesión ulcerada con agua y jabón
•Pápula/alcohol/agua oxigenad...
Líquido Cefalorraquídeo
 El LCR es un líquido producido en los ventrículos,
que son los espacios que hay dentro del SNC.
...
Estudio químico del líquido
cefalorraquídeo
 El estudio de química del LCR identifica químicos,
tales como las proteínas ...
Forma en que se realiza el examen
 Una punción lumbar (espinal) es el medio más
común para recolectar una muestra de LCR ...
Forma en que se realiza el examen
 Si el paciente presenta un problema como deformidad lumbar
o infección, imposibilita l...
Conteo de células de LCR
 Valores normales
 El valor normal de glóbulos blancos está entre 0 y 5.
 El valor normal de g...
Cultivo de LCR
 Para detectar la presencia de bacterias, virus y hongos en el
LCR causantes de infección.
 El LCR es un ...
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO Meningitis bacteriana
LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
ANTIBIOGRAMA
Definición:
•Es el procedimiento por el cual se determina el grado de
resistencia de una bacteria al antibiót...
Método:
•Se distribuye sobre una placa el
microorganismo previamente cultivado, en
forma uniforme y abundante con una asa ...
Antibiograma. Técnica del disco en medio sólido
Lectura:
•Se observan las zonas de inhibición ( donde no
crecen los microorganismos) alrededor de los
discos ( halo claro)...
Modo de acción Antibióticos
Inhibición de síntesis de la
pared
Penicilina,Bacitracina,
Novobiocina
Cicloserina,,Vancomicin...
Referencias Bibliográficas
 GAW A, COWAN RA, O’REILLY D, STEWART MJ Y
SHEPHERD J. (2006): Bioquímica Clínica. 2ª Ed.
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T6 metod cultivos comunes.antibiograma

  1. 1. Metodología para los cultivos comunes: Tipos de cultivo en microbiología clínica: urocultivo, coprocultivo, hemocultivo, tracto respiratorio, genital, SNC, piel y heridas. Antibiograma. Definición. Procesamiento. Universidad Nacional de Trujillo Facultad de Farmacia y Bioquímica- Dpto. Bioquímica Cátedra de Bioquímica-Asignatura Análisis Clínicos Docente: MSc. Anabel González Siccha Trujillo, 10 de Abril de 2014
  2. 2. Cultivos  Son medios esenciales para determinar la identidad, cantidad y patogenicidad de un microorganismo.  Secreción: es el proceso por el que una célula o un ser vivo vierte al exterior sustancias de cualquier clase. También se llama secreción a la sustancia liberada. El acto de verter una secreción se llama secretar.  Ejemplo : Secreción de heridas Urocultivo
  3. 3. UROCULTIVO •Es la determinación de elementos anormales, observación del sedimento urinario y cultivos en medios selectivos y diferenciales RECOMENDACIONES •El paciente no debe haber recibido antibióticos por lo menos cinco días antes del examen. •El recolector puede estar como máximo 30’ instalado, mas tiempo, la muestra se considera contaminada. MATERIALES Muestra de orina ( torunda de algodón, Sol salina, frasco recolector), Microscopio, Placas de Agar, agar-sangre, Asa de siembra.
  4. 4. UROCULTIVO Determinación Volumen (ml) Comentarios BACTERIAS 0.5-1 PRIMERA ORINA DE LA MAÑANA HONGOS > 20 PRIMERA ORINA DE LA MAÑANA MICOBACTERIAS > 20 PRIMERA ORINA DE DIAS CONSECUTIVOS ANAEROBIOS 1 ASPIRADO SUPRAPÚBICO, ENVIAR EN UN SISTEMA DE TRANSPORTE PARA ANAEROBIOS PARÁSITOS ORINA DE 24 HORAS
  5. 5. UROCULTIVO  METODO  Tomar la orina sin centrifugar, con el asa de siembra calibrada, es decir q cada asada suministre 0,01 o 0,001 ml de orina.  Sembrar la orina por dispersión-agotamiento con una asa de siembra, sobre una placa de agar sangre y otra sobre una placa de agar Mac Conkey.  Rotular e incubar a 37ºC.
  6. 6. UROCULTIVO Lectura e Interpretación Detallar las características de las colonias en el medio Seleccionar colonias y resembrar en los medios de diferenciación bioquímica (citrato, urea) Se interpreta de acuerdo a las Rx bioquímicas Para conocer el número de microorganismos en 1 ml de orina, se cuentan las colonias y el resultado se multiplica x 100, si se uso asa de 0,01 ml. (0,001ml x 1000). Si el # de colonias sobrepasa el # de 100 000 bacterias/ ml de orina, al informar no interesa precisar el # exacto de bacterias, sólo debe
  7. 7. Negativo (contaminación) De 0 – 10 000 bacterias por ml de orina Dudoso, discutible ( debido al tiempo de envío de la muestra al laboratorio) De 10 000 – 100 000 bacterias / ml de orina Positivo: Indica infección urinaria Recuento superior a 100 000 bacterias/ ml de orina Lectura e Interpretación En la orina infectada puede encontrarse: •E. coli, P. aeruginosa, Enterococo, Citrobacter, Klebsiella •Se acepta un recuento superior de 100,000 bacterias/ ml de orina, indica infección de las vías urinarias.
  8. 8. COPROCULTIVO •Se toma muestra para identificar parásitos y otros microorganismos que causan diarrea, para valorar la función intestinal y para investigar la posibilidad de sangre oculta. •Recomendaciones •Se el análisis cuando presenta prurito anal, dolor abdominal y diarreas. •Cada muestra debe contener por lo menos 4 ml ( necesaria para facilitar la detección de parásitos cuando se encuentran pocos concentrados). Los niños que controlan su evacuación deben orinar y luego defecar en el recipiente. •No se debe dejar las muestras expuestas al aire en recipientes sin tapa. No dejar muestras para
  9. 9. COPROCULTIVO • MATERIALES : • Recipientes indicados, hisopo rectal estéril, cinta adhesiva transparente 12 x 1 cm (huevos oxiuros) • METODO • 1) Examen parasitológico: Test de Graham
  10. 10. COPROCULTIVO 2) Examen bacteriológico  Usar un recipiente estéril para la muestra.  Se debe recolectar antes de la administración de cualquier antibiótico  En niños y en paciente con problemas, se usa un hisopo embebido en el medio de transporte y se introduce en el recto en unos 3 cm, se toma la muestra rotando y por movimiento circular para arrastrar la deposición.  Se coloca la muestra en un tubo estéril con medio de transporte y se corta la porción sobrante del palo del hisopo y se ajusta fuertemente la tapa del
  11. 11. COPROCULTIVO Lectura e Interpretación Se puede identificar: helmintos, huevos o larvas de helmintos, protozoarios , quistes de flagelados y ciliados ( Giardia lamblia, Balantidium coli) En estado primario de la enfermedad (salmonella y shiguella) se encuentran el  cc en período agudo. En heces con moco: Giardia lamblia. Los coprocultivos se piden en toda diarrea desinteriforme, máxime si cursa con respuesta inflamatoria sistémica o si hay pus o sangre
  12. 12. HUEVO DE ASCARIS EN HECES HUEVO DE TENIA EN HECES HUEVO DE TRICHURIS TRICHURA ADULTO DE ECHINOCOCCUS
  13. 13. HEMOCULTIVO •Es la prueba más útil y más frecuentemente usada para demostrar la presencia de microorganismos en la sangre. •Consiste en obtener sangre en asepsia y añadirla a un frasco q contiene un medio de cultivo elegido para aislar un determinado microorganismo. Recomendaciones •Deben obtenerse, antes que el paciente reciba terapia antimicrobiana. •Tomar la muestra cuando el paciente esta con T elevada. •Se requiere un mínimo de tres hemocultivos seriados por pacientes antes de considerar el caso como negativo. •El medio: corazón cerebro con agar (aerobias y anaerobias), tioglicolato (b. anaerobias)
  14. 14. HEMOCULTIVO  METODO  Se extrae sangre del pliegue del codo en forma aséptica  Sembrar 5-10 ml de sangre ( mayor cantidad posible)  El medio de elección se calienta a 37ºC en una estufa de cultivo, y se flamea el tapón para destruir los microorganismos contaminantes en la superficie.  Para llevar el frasco a la cabecera del paciente se cubre el tapón con un algodón con alcohol.  Obtenida la muestra de sangre, se retira el algodón
  15. 15. HEMOCULTIVO Lectura e Interpretación Examinar el frasco diariamente durante la primera semana para detectar la aparición de turbidez en el medio, hemólisis, signos de producción de gas o crecimiento de colonias directamente encima de la sangre. Si los cultivos son negativos deben seguir en observación hasta por 21 días antes de informarse como negativos. Los hemocultivos “visualmente positivos” (turbidez) deben teñirse por el método de Gram y subcultivarse (resiembra) Retirar un gota del hemocultivo utilizando una
  16. 16. Las secreciones que pueden determinarse son entre otras: • Tracto Respiratorio: • Óticas: conducto auditivo externo • Vaginal : conducto cervical • Uretral • Exudados etc. Materiales: Hisopos de algodón estéril Tubos de ensayos con medio de cultivo Asa bacteriológica estéril de alambre delgado Tubo como medio de transporte Solución fisiológica Secreciones
  17. 17. Tracto Respiratorio: Muestras Tracto Respiratorio Superior Tracto Respiratorio Inferior MUESTRAS EXTRAPULMONAR ES Faringo- amigdalino Esputo, Esputo inducido Líquido pleural Nasofaringe Aspirado traqueobronquial Biopsia pleural Nasal: Staphylococcus aureus. Punción transtraqueal Hemocultivo Senos paranasales Muestras obtenidas a través de fibrobroncoscopia
  18. 18. Tracto Respiratorio Método •Se obtiene la secreción faríngea. •Paciente sentado, abre la boca, baja la lengua y dice Ahhh. •Introduce el hisopo evitando tocar la lengua, úvula •Introduce el hisopo con la secreción en el medio de cultivo Ejemplo:
  19. 19. •El frotis faríngeo es un importante test para diagnosticar y tratar con una gran precisión las infecciones que causan los dolores de garganta, además puede prevenir la transmisión de estas enfermedades de una persona a otra. •Por ejemplo: •Coco gram(+) Streptococcus beta-hemolítico (S. pyogenes). (Agar sangre-azida) •Neisseria gonorrhoeae, A. haemolyticum, C. diphteriae y H. influenzae (Epiglotitis (Agar Chapman) •Enterobacterias: Agar Mc Conkey •Levaduras. Tracto Respiratorio
  20. 20. Secreción Ótica Método: •Si la pus sale al exterior, es preferible eliminarlo con algodón estéril. •Introduce el hisopo en el CAE, en dirección oblicua de atrás hacia delante y de abajo hacia arriba. •Introduce el hisopo con la muestra en el tubo estéril.
  21. 21. Secreción Vaginal Método: •La muestra es tomada del C. cervical. •En gonorrea: antes o inmediat después de la menstruación. •Coloca al paciente en posición ginecológica, entreabrir la vulva •Introducir el espéculo humedecido en agua tibia en la vagina, no usar lubricante. •Visualizar el cuello uterino•Introducir el hisopo estéril dentro del canal cervical rotándolo suavemente y en un tiempo de 10 a 30 seg, retirar y colocar en el tubo estéril.
  22. 22. Secreción Uretral Método: •Se toma la muestra a primera hora de la mañana, antes q el paciente haya orinado •Limpiar el meato con algodón humedecido en sol. salina estéril. •Aplicar al pene una ligera presión desde atrás, de manera que salga una gota de secreción (pus) por el meato.•Si la gota no aparece, introducir el hiposo estéril en el C. uretral anterior hasta una profundidad de 2,5 cm aprox. para obtener la muestra. Tomar la pus con el hisopo o asa e introducir en el tubo con medio de transporte. Ejem:Neiseria (Agar Thayer-Martin), Levadura (Agar-
  23. 23. Exudados y/o heridas Método: 1)Muestra de Fluidos •Lavar la lesión ulcerada con agua y jabón •Pápula/alcohol/agua oxigenada/sol fisiológica •Inyectar, aspirar el contenido, y retirar la jeringa •Se inocula II a III gotas del material aspirado en tubos de medio de cultivo. 2)Muestra de Frotis •Lavar la lesión ulcerada con agua y jabón, desinfectar alcohol •Presionar con firmeza los bordes de la lesión hasta q palidezca: en el borde interno, hacer una incisión con bisturí, levantando la piel, secar la sangre y raspar el
  24. 24. Líquido Cefalorraquídeo  El LCR es un líquido producido en los ventrículos, que son los espacios que hay dentro del SNC.  En los ventrículos hay una estructura especializada que son los Plexos Coroideos donde se produce el LCR.  Circula en el espacio que rodea a la médula espinal y el encéfalo  Se produce y se reabsorbe continuamente a una velocidad de 500 mL / día. Su volumen permanece constante en situaciones fisiológicas.
  25. 25. Estudio químico del líquido cefalorraquídeo  El estudio de química del LCR identifica químicos, tales como las proteínas y los niveles de glucosa, que pueden ayudar a diagnosticar ciertos trastornos y enfermedades.  Llamado también Química del LCR.
  26. 26. Forma en que se realiza el examen  Una punción lumbar (espinal) es el medio más común para recolectar una muestra de LCR y generalmente se realiza de la siguiente manera: se le solicita al paciente que se acueste de lado con las rodillas encogidas hacia el abdomen y la barbilla pegada al tórax.  Se inyecta anestesia local en la parte inferior de la columna. Se inserta la aguja espinal generalmente entre la tercera y cuarta vertebra lumbar y se extrae el líquido para evaluarlo.  El paciente debe permanecer en posición horizontal o casi horizontal durante por lo menos seis u ocho horas después del examen.
  27. 27. Forma en que se realiza el examen  Si el paciente presenta un problema como deformidad lumbar o infección, imposibilita la punción lumbar o hacerla no confiable.  La punción cisternal implica la inserción de una aguja debajo del hueso occipital (parte posterior del cráneo). Esto puede ser peligroso porque la aguja se inserta cerca del tronco encefálico.  La punción ventricular es aún menos común, pero se puede recomendar cuando es necesario obtener la muestra de LCR en personas con posible hernia cerebral inminente. Se realiza generalmente en el quirófano. Se perfora un orificio en el cráneo y se inserta una aguja directamente en el ventrículo lateral del cerebro.  Posteriormente se lleva el LCR al laboratorio para su
  28. 28. Conteo de células de LCR  Valores normales  El valor normal de glóbulos blancos está entre 0 y 5.  El valor normal de glóbulos rojos es 0.  Significado de los resultados anormales  Un aumento en el conteo de leucocitos indica infección, inflamación o sangrado dentro del líquido cefalorraquídeo. Algunas de las causas son:  Absceso ,Infección aguda, Encefalitis , Hemorragia,,Esclerosis Múltiple, Meningitis, ACV hemorrágico, Tumor,  Afecciones adicionales que este examen puede ayudar a Dx abarcan:  Malformaciones arteriovenosa (cerebral), Delirio, Aneurisma cerebral, Demencia,  Sindrome de Guillain-Barré, Epilepsia, Neurosífilis, Linfoma
  29. 29. Cultivo de LCR  Para detectar la presencia de bacterias, virus y hongos en el LCR causantes de infección.  El LCR es un líquido claro que transporta productos de neurosecreciones (químicos liberados por el tejido neural), nutrientes, químicos en las células y cambios químicos en las mismas.  El LCR generalmente se obtiene a través de una punción lumbar (espinal).  El cultivo se realiza en el laboratorio.  El microbiólogo lo examina todos los días y en caso de presentarse crecimiento (un "cultivo positivo"), se identifican los microorganismos y se verifica la susceptibilidad a los antibióticos, permitiendo la mejor selección de éstos.  Valores normales: Es normal la ausencia de crecimiento de
  30. 30. LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO Meningitis bacteriana
  31. 31. LIQUIDO CEFALORRAQUIDEO
  32. 32. ANTIBIOGRAMA Definición: •Es el procedimiento por el cual se determina el grado de resistencia de una bacteria al antibiótico. •Consiste en poner en contacto al germen que hemos cultivado con distintos antibióticos para ver cual de ellos es el que mejor va con el tratamiento (selección del mejor antibiótico). •Se cultivan en “discos” los cuales son unos receptáculos circulares con sustancias que favorecen el crecimiento de los microorganismos, pero al mismo tiempo contienen cada uno de ellos, un antibiótico conocido. •En resumen: •Se hace un antibiograma para ver que microorganismo ha provocado la enfermedad y como podremos
  33. 33. Método: •Se distribuye sobre una placa el microorganismo previamente cultivado, en forma uniforme y abundante con una asa de siembra. •Colocar los discos sobre este medio sólido con pinzas estériles, dejando 2 cm entre cada uno de ellos. •Llevar a la estufa e incubar a 37ºC durante 12 – 18 horas. ANTIBIOGRAMA
  34. 34. Antibiograma. Técnica del disco en medio sólido
  35. 35. Lectura: •Se observan las zonas de inhibición ( donde no crecen los microorganismos) alrededor de los discos ( halo claro) que deben ser medidas con una regla en mm, en la parte exterior y reversa de la placa •Una zona de inhibición indicará sensibilidad o resistencia del antibiótico, según las medidas obtenidas en mm. •Se utilizan discos para determinados microorganismos, según sean muestras de: hemocultivo, urocultivo , coprocultivo y/ o ANTIBIOGRAMA
  36. 36. Modo de acción Antibióticos Inhibición de síntesis de la pared Penicilina,Bacitracina, Novobiocina Cicloserina,,Vancomicina, Ristocetna,Grriseofulvina Acción sobre la membrana Polipéptidicos básicos: Polimixinas, Bacitracina Tirotricina Replicación del DNA Mitomicina, Acido nalidixico Transcripción del DNA Actinomicina, Novobiocina Traducción del RNAm (síntesis de proteínas) Inhibición de la síntesis anomalías en la lectura del código Macrolidas, Sinergistina, Lincomicina Tetraciclina,Cloranfenicol etc.
  37. 37. Referencias Bibliográficas  GAW A, COWAN RA, O’REILLY D, STEWART MJ Y SHEPHERD J. (2006): Bioquímica Clínica. 2ª Ed. Editorial Harcourt - Elsevier, España.  http://perso.wanadoo.es/sergioram1/Microbiologia.htm Muchas Gracias
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