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Cromatografía líquida de alta presión

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  • 1. TRABAJO FINAL DE ANALISIS INSTRUMENTAL<br /> INTEGRANTES:<br /> Adrián Rodríguez<br />Diego Guamán<br />Ángel Núñez<br />TEMA: CROMATOGRAFIA HPLC<br />Dr. Juan Marcelo Ramos<br />Riobamba - Ecuador<br />
  • 2. INTRODUCCION A LA CROMATOGRAFIA<br />DEFINICION:<br /> La cromatografía es un método físico de separación basado en la distribución de los componentes de una mezcla entre dos fases inmiscibles, una fija o estacionaria y otra móvil. <br /> La cromatografía es una técnica de separación de sustancias que se basa en las diferentes velocidades con que se mueve cada una de ellas a través de un medio poroso arrastradas por un disolvente en movimiento.<br />
  • 3. <ul><li>Con el objeto de aumentar la eficiencia en las separaciones, el tamaño de las partículas de fase fija se fue disminuyendo hasta el tamaño de los micrones, lo cual generó la necesidad de utilizar altas presiones para lograr que fluya la fase móvil.
  • 4. De esta manera, nació la técnica de cromatografía líquida de alta resolución (HPLC), que requiere de equipos especiales que permita trabajar con las altas presiones requeridas.</li></li></ul><li>CROMATOGRAFIA HPLC<br /><ul><li> La Cromatografía líquida de alta eficacia o High performance liquid chromatography (HPLC) es un tipo de cromatografía en columna utilizada frecuentemente en bioquímica y química analítica. </li></ul>CROMATOGRAFO HPLC<br /><ul><li>El HPLC es una técnica utilizada para separar los componentes de una mezcla basándose en diferentes tipos de interacciones químicas entre las sustancias analizadas y la columna cromatográfica.</li></li></ul><li>Elementos que participan en una cromatografía<br />1. Fase estacionaria<br />2. Fase móvil<br />3. Muestra<br />En general, una cromatografía se realiza permitiendo que la (muestra) interaccione con un medio o matriz de soporte que se denomina fase estacionaria. Un segundo medio (la fase móvil) que no puede mezclarse con la fase estacionaria se hace fluir a través de ésta para "lavar" a las moléculas en la muestra.<br />
  • 5. TIPOS DE CROMATOGRAFIAS LIQUIDAS<br /><ul><li>Hay varias formas de interacción entre las cuales tenemos:
  • 6. Adsorción superficial
  • 7. Partición
  • 8. Intercambio iónico
  • 9. Exclusión por tamaño</li></li></ul><li>Adsorción superficial.<br /><ul><li>La fase estacionaria es sólida.
  • 10. La separación se logra por las diferencias en solubilidad (en fase móvil) y de retención por absorción (en fase estacionaria) de la mezcla de solutos.
  • 11. Sílice (90%) y alúmina (10%) son las fases estacionarias más comunes.
  • 12. Tanto las moléculas de solutos como de disolvente son atraídas hacia los lugares activos polares de la fase estacionaria.</li></li></ul><li>Partición.<br /><ul><li>La separación se basa en el reparto o distribución de los solutos entre una fase móvil líquida y otra estacionaria inmiscible, soportada sobre un sólido inerte.
  • 13. La migración se produce por diferencias de solubilidad.
  • 14. El mecanismo de actuación es similar al de un modelo de extracción en contracorriente.</li></li></ul><li>Intercambio Iónico<br />Tanto la fase estacionaria como la fase móvil son de naturaleza iónica.<br />Los iones de la fase estacionaria son de carga opuesta a los del eluyente.<br />
  • 15. La separación se basa en el tamaño molecular.<br />Como fase estacionaria se emplean sustancias porosas de un tamaño determinado.<br />Se denomina también cromatografía de permeabilidad.<br />Exclusión por Tamaño<br />
  • 16. ECUACIONES FUNDAMENTALES<br />Constante de distribución:<br />En general, los equilibrios de distribución implicados en cromatografía se describen por ecuaciones sencillas que suponen la transferencia de una analito entre las fases estacionaria y la móvil. Así, para el soluto A, se puede escribir:<br /> A movil A estacionario<br />
  • 17. La constante de equilibrio K para este proceso se denomina constante de distribución y mide la distribución del analito entre la fase móvil y la estacionaria<br />Entonces tenemos:<br />Donde:<br />CS : Es la concentración molar del soluto en la fase estacionaria<br />CM : Es la concentración molar del soluto en la fase móvil.<br />
  • 18. La resolución cromatográfica de una columna es una medida cuantitativa de su capacidad para separar sus analitos.<br />Se la define como:<br />Donde:<br />WA y WB son la anchura de los picos A y B en el cromatógrafo <br />TR: Es el tiempo que tarda en aparecer el máximo de un pico<br />A partir de esto se deduce que si R> 1,5 la separación de los componentes es completa, no será así si R<1,5. <br />- <br />
  • 19. PROCEDIMIENTO PARA UN ANALISIS CROMATOGRAFICO HPLC<br />Parámetros a seguir:<br />
  • 20. 1.- El compuesto pasa por la columna cromatográfica a través de la fase estacionaria mediante el bombeo de líquido (fase móvil) a alta presión a través de la columna. <br />
  • 21. 2.- La muestra a analizar es introducida en pequeñas cantidades y sus componentes se retrasan diferencialmente dependiendo de las interacciones químicas o físicas con la fase estacionaria a medida que adelantan por la columna.(El grado de retención de los componentes de la muestra depende de la naturaleza del compuesto, de la composición de la fase estacionaria y de la fase móvil.)<br />
  • 22. 3.- Después los componentes pasan por un detector que genera una señal (dependiendo de la concentración y del tipo de compuesto) <br />
  • 23. 4.- Se utilizará una bomba para impulsar a la fase móvil con velocidad y presión constante.<br />
  • 24. 5.- Luego llegan a las columnas en donde hay unos detectores que no hacen mas que indicar el momento de aparición de los distintos componentes que constituyen la muestra.<br />
  • 25. CARACTERISTICAS QUE DEBE TENER UNA FASE MOVIL (SOLVENTE)<br />
  • 26. BOMBAS UTILIZADAS EN UNA CROMATOGRAFIA HPLC<br />Las bombas que se usan en HPLC se pueden clasificar según su funcionamiento y diseño en:<br />
  • 27. REQUISITOS QUE DEBE TENER UNA BOMBA PARA UNA CROMATOGRAFIA HPLC<br />
  • 28. VENTAJAS de una cromatografía hplc<br />La mas importante es la diversidad de sus aplicaciones, tanto en compuestos orgánicos como inorgánicos,<br />Además:<br />
  • 29. DESVENTAJAS de una cromatografía hplc<br />
  • 30. APLICACIONES DE LA CROMATOGRAFIA HPLC<br />La cromatografía líquida de alta presión a pesar de ser una técnica relativamente nueva, tiene numerosas aplicaciones en la química. En la mayoría de los casos, éstas consisten en determinaciones de sustancias cuyo análisis por otra técnica cromatografía resulta muy difícil.<br />
  • 31. Compuestos iónicos: como aminoácidos, sales inorgánicas, ácidos orgánicos, etc. <br />Compuestos de alto peso molecular: como polímeros, hidrocarburos polinucleares, productos naturales, etc. <br />Compuestos no volátiles: como vitaminas, pesticidas, esteroides, plastificantes, drogas y una parte muy grande de otros productos farmacéuticos. <br />
  • 32. <ul><li> Tiene grandes aplicaciones en lo que se refiere a la contaminación ambiental la HPLC se utiliza para analizar la capacidadque tienen algunos pesticidas (insecticidas, larvicidas, herbicidas, etc.)</li></li></ul><li>El análisis de medicamentos constituye la Aplicación mas grande de la Cromatografía HPLC que nos sirve para determinar los componentes activos de diferentes productos usados en la Industria Farmaceutica como por ejemplo en tabletas analgésicas.<br />
  • 33. Recomendaciones para adquirir un Sistema HPLC<br />Dependerá de cuántas muestras y tipos de ensayos deban ser analizados.<br />La facilidad para reemplazar los sellos de las bombas (mantenimiento).<br />La exactitudes y precisión del sistema de bombas<br />La suavidad y reproducibilidad de la mezcla<br />
  • 34. GRACIAS POR SU ATENCION<br />

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