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  • 1. GAUSSIA LUCIFERASA COMO MARCADOR BIOLÓGICO PARA MONITOREO DE LA PROGRESIÓN DEL TUMOR Y RESPUESTA ALTRATAMIENTO DE LAS METÁSTASISIntegrantes: A DISTANCIA• Cárdenas Ramírez, Vanessa• Córdova Espinoza, Leidy• Guardia Herrero, David• Pérez Paucar, Pedro• Sallo Valenzuela, Patty• Robles , Paola• Yaranga Rojas, Kathya
  • 2. BIOLUMINISCEN CIAEs la luz producida por una reacción químicadentro de un organismo.Al menos 2 elementos se requieren. El queproduce la luz "luciferina" y otro que cataliza lareacción "luciferasa. luciferase = LUZ
  • 3. la energía de una fuente de es una radiación de vidaluz es absorbida y remitida media más prolongada y estácomo otro fotón. asociada con la intensidad de la luz absorbida.
  • 4. Algunas especies con actividad bioluminiscente•Bacterias, Hongos, dinoflagelados,radiolarios, Cnidarios, Hydrozoa,Anthozoa, Ctenóforos, Nemertinos, udibranquios,pulpos, anélidos,picnogónidos, Quetognatos, crustáceos (Copépodos, Ostrácodos,Anfípodos, Eufásidos), Equinodermos, Tunicados, Larváceos, Peces•Ciempiés, Milpiés, Insectos ❶Gaussia, mide unos 27mm. ❷Hidromedusa Producen la luz cuando hacen un Aequorea victoria giro al escaparse.
  • 5. ❹Japetella sp. la hembra usa su❸Dinoflagelado Pyrocystis fusiformis. bioluminiscencia alrededor de su boca, solo cuando busca pareja.❺Poliqueto Tomopteris sp. ❻Ctenóforo batipelágico Bathyctena sp.“Luminiscencia amarilla”. Cuando es (2000 m). La bioluminiscencia amarillaperturbado muestra la ioluminiscencia aparece cuando el animal es perturbado.en sus parapodios.
  • 6. CoelenteracinaEs una luciferina, molécula responsable de la emisión de luzen algunas bacterias , algas, hongos y animales.Es el sustrato de muchas luciferasas y fotoproteinasincluyendo luciferasa de Renilla reniformis (Rluc), Gaussialuciferase (Gluc), aequorina y obelina.
  • 7. Gaussia luciferase Es una proteína luminiscente con rendimientos cuánticos más altas que las luciferasas de Renilla sp. y luciérnaga. Es independiente de ATP, lo que requiere sólo coelenteracina y O 2 como sustratos.
  • 8. Luciferasa de luciérnaga
  • 9. Cáncer metastásico•Cáncer que se ha diseminadode su lugar de origen a otrolugar en el cuerpo.•Los lugares más comunes demetástasis del cáncer son lospulmones, los huesos y elhígado.•El tratamiento del cáncermetastático depende,usualmente, del tipo de cáncer ydel tamaño, ubicación y númerode tumores metastáticos.
  • 10. Glosario◘Ortotópico: Que está situado en su lugar normal. Se usa confrecuencia para describir un tejido u órgano que se trasplanta a sulugar normal en el cuerpo ◘MDA-MB-231: una sublínea de la línea celular de adenocarcinoma de mama humano; es decir, células se cultivaron con el fin de estudiar el papel de la acetilación y extra-celular ubicación de 90alpha proteína de choque térmico en la invasión de células tumorales. Marcador biológico: molécula biológica que se encuentra en la sangre, otros líquidos o tejidos corporales, es un signo de un proceso normal o anormal, o de una afección o enfermedad
  • 11. Glosario◘Inoculación: introducción de una sustancia en elcuerpo para producir o aumentar su inmunidadante una enfermedad o proceso asociado a dichasustancia. ◘Luminómetro: excelente para monitoreo de limpieza en planta, equipo portátil, su avanzado sistema permite leer la cantidad de ATP , cuenta con un software para realizar análisis estadísticos y llevar un control ◘ RLU( unidad relativa de luz) : la luz emitida desde los híbridos ARN:ADN marcados se mide como señales de fotones en un luminómetro y se incluye en el informe como unidades de luz relativa. ◘ Valor umbral: separa los objetos de una imagen que nos interesan del resto
  • 12. HER2 EGFReceptor del factor de Crecimiento Receptor del R factor de Crecimientoepidérmico epidérmicoEs el nombre de una proteína producida Es el receptor celular de la Superficiepor un gen específico cuya alteración de la célula de los Miembros de lapuede producir cáncer Familia del factor de crecimientoLas proteínas HER2 son receptores en las epidérmico (familia EGF) de los ligandoscélulas mamarias de las Proteínas extracelulares.Ayudan a controlar la manera en que unacélula mamaria sana crece, se divide y serepara así misma
  • 13. LapatinibEs un agente quimioterapéutico,un inhibidor dual de la tirosinaquinasa de EGFR y HER2 Actúa sobre una enzima específica que se encuentra en las células cancerosas y detiene el crecimiento de las células. Se usa en forma de ditosilato de lapatinib.
  • 14. INTRODUCCCION
  • 15. O Ratones de laboratorioO Los ratones fueron anestesiados con ketamina/xilazina(100/10mg/kg),O Inyección intraperitonial
  • 16. Línea celular y cultivocelularLínea celular humana 231 Br y HER2 consobreexpresión de contraparte, dondeambos expresan la proteína verdefluorescenteLas células 231 BR y 231BR Her2 semantuvieron en Dulbecco modificadopor Eagle, complementado con suerofetal bovino al 10%1% de penicilina – estreptomicinasolución
  • 17. GlucTransfeccion El vector lentiviral lleva un cassette de expresión que codifica la proteína Gluc y ceruleo flurescente, separados por un sitio interno de entrada ribosomal que se ha generado con anterioridad. Las células 231BR y 231BR Her2 fueron transducidas con LV-Gluc-PPC – 231BR-G y 231BR- HER2-G a una multiplicidad de infección.
  • 18. Modelo de almohadilla de grasa mamaria Se ha diseñado células MDA-MB-231BR(231BR), la cual se administra en un volumende 200 a 300 mm3 en la almohadilla de lagrasa mamaria (MFP) Ratones femeninos de 5 – 7 semanas de edad El tamaño del tumor se midió mediante unapinzaLos tumores se resecaron y se utiliza para H &Etinción
  • 19. Modelo de metástasis experimental (modelo de inyección intracardiaca)● Ratones femeninos de 6 -7 semanas deedad desnudos fueron inyectados con:0.25 x 106 231 BR- HER2-G células en 0,1ml de PBS a través del ventrículoizquierdo.● Fueron sacrificados los ratones quemostraron síntomas clínicos de dolorprolongadoo El cerebro, los huesos y los demás órganos se recogieron y se evalúan de inmediato para GFP mediante microscopía de fluorescencia.
  • 20. Ensayo Gluc De Sangre / Orina❶Se extrajo sangre de hacer unaligera incisión en al vena de lacola❷La orina se recogedirectamente de las aberturas dela uretra❸10 μL de sangre se recogió yse mezcló con 2μL de 50 mM deEDTA.❹Las muestras de sangre uorina se transfirió luego a unaplaca de 96 pocillos.❺La actividad de la Glu se midióutilizando un luminómetro placa.
  • 21. Cuantificación de tumor viableSe utilizo la tinciónhematoxilina-eosina (H& E) la cual nos permitecontrastar el núcleo delcitoplasma, tiñendo elnúcleo de color azul y elcitoplasma de un colorrosado.
  • 22. MATLABMatlab esta diseñado parala computación interactiva yautomatizada mediante lasfunciones matemáticas ygraficas incorporadas ,herramientas donde sepodrá analizar y visualizarlos datosExploración y análisis dedatos ,visualización yprocesado de imágenes
  • 23. Biolumiscencia de Imágenes (BLI)Es una tecnología la cual representa una poderosa herramienta parasu uso con bacterias modificadas para expresar genes reporteroscomo lux (unidad del nivel de iluminación).BLI se utiliza tradicionalmente como una modalidad 2D que resulta enimágenes que están limitados en su capacidad para localizaranatómicamente las poblaciones de células.
  • 24. Biolumiscencia de Imágenes Inyección de ctz Ratón Línea celular MDA- 4mg/kg anestesiado MB-231 BR(231BR)El tiempo de adquisición de Sistema IVIS acopladola imagen se encontraba a un software deen el intervalo de 15 imagensegundos a 1 minuto
  • 25. RESULTADOSResultado n 1 Comparación de la actividad Gluc en sangre, plasma y orina
  • 26. Resultado n 2 Seguimiento de la actividad Gluc en la sangre, la orina e imágenes de bioluminiscencia (BLI) del modelo ortotópico de cáncer de mama.
  • 27. Resultado n 3La sangre de ensayoGluc refleja la cargatumoral viable.
  • 28. Monitorización en tiempo real de progresión del tumor metastásico con Gluc sangre y localizaciónResultado n 4 de la metástasis, con imágenes de Bioluminiscencia
  • 29. metástasisMetástasis de columna vertebral cerebrales
  • 30. Resultado n 5El ensayo Gluc en sangre Ofrece monitoreo entiempo real de respuesta al tratamiento de laprogresión del metástasis sistémico.
  • 31. CONCLUSIONES• La detección del tumor viable primario se puede detectar antes que se desarrolle la proliferación celular, por medio del biomarcador Gaussia luciferasa solo se da a través en ensayo de sangre.• La Gaussia luciferasa es el regulador que ayuda detectar la formación y actividad de las células tumorales, tanto en tratamiento como en el control.
  • 32. Muchasgracias

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