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  • 1. HPLC Jesús Anzano
  • 2. Esquema de separación en cromatografía líquida
  • 3.  
  • 4.  
  • 5. N, número de platos teórico                              .
  • 6. GENERALIDADES   Introducción de muestras                Inyección directa              No es necesario que las muestras sean muy solubles en la fase móvil              Rara es la vez en la que se produce descomposición de la muestra              Algunas veces se inyectan derivados de la muestra .               Poca preparación de la muestra              Muestra inyectada: ng-2 mg Columnas              Columna: 25-50 cm              Diámetro interno de columna: 2-5 mm              Diámetro de partícula: 5-15  m
  • 7.  
  • 8. Mecanismos de reparto   Tipo Fase estacionaria Fase móvil Aplicaciones   ADSORCIÓN Gel de sílice Hexano, cloroformo, isopropanol Eteres, esteres, vitaminas Alúmina Hexano, cloroformo, isopropanol Aminas REPARTO: Fase Normal Amino Hexano, cloroformo, isopropanol Azucares, nitroderivados Ciano Hexano, cloroformo, isopropanol Nitroderivados, aminoácidos Fase inversa Dimetilsilano Agua, acetonitrilo, metanol Aminas,fenoles, vitaminas Octilsilano Hexano, cloroformo, isopropanol Aceites, esenciales, esteroides INTERCAMBIO IÓNICO: Intercambiador fuerte de cationes Ácido sulfónico Na 2 HPO 4 Aminoácidos Intercambiador fuerte de aniones Amonio cuaternario Na 2 HPO 4 Nucleótidos Intercambiador débil de aniones -NH 2 H 3 PO 4 Colorantes, carbohidratos   EXCLUSIÓN Gel acuoso Agua Proteínas, péptidos, Gel orgánico Cloroformo, THF Polímeros Gel de sílice THF, alcoholes, agua Compuestos biológicos Vidrio poroso Hexano, cloroformo, isopropanol Compuestos biológicos
  • 9. Instrumentación en HPLC             
  • 10.        
  • 11. Columnas                                               
  • 12.  
  • 13.  
  • 14. Características de los detectores   Detector Límite de detección(masa)     Absorbancia 100 pg-1ng Fluorescencia 1-10 pg Electroquimico 10 pg- 1ng Indice de refracción 100 ng-1  g Conductividad 500 pg-1ng Espectrometría de masas 100 pg-1 ng FT-IR 1  g Dispersión de luz 10  g
  • 15. ACOPLAMIENTO HPLC-EA   - La conexión entre CL y un ICP es bastante fácil - El caudal de aspiración de las muestras es compatible con el caudal de los eluyentes cromatográficos líquidos - W. SLAVIN: formación de una gota la salida del eluyente cuando éste alcanza un determinado tamaño (100 mL) se desprende y cae sobre un micro-embudo de teflón conectado directamente al nebulizador .
  • 16.  
  • 17. INTERFASES              Conexión sencilla              Dilución del analito.              Los ompuestos termolábiles, se descomponen              Posible obturación de la interfase.   Interfase con cinta transportadora móvil Interfase con formación de un termospray Interfase con ionización a presión atmosférica Introducción directa  
  • 18.  
  • 19.  
  • 20.  
  • 21.