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Guia VII-VIII: Aislamiento, observación e identificación de hongos
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Guia VII-VIII: Aislamiento, observación e identificación de hongos

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  • 1. UNIVERSIDAD CATÓLICA SANTO TORIBIO DE MOGROVEJO Facultad de Medicina Escuela de Medicina MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Práctica N°07-08 Aislamiento, observación e identificación de hongos - Aislamiento de Hongos Patógenos, Observación eidentificación de sus estructuras. Jesús Alonso Custodio Marroquín Código: 062ac03464 Ciclo 2009 – IV
  • 2. Estructura general de los hongos Las hifas son elementos filamentosos cilíndricos característicos de la mayoría de los hongos. Están constituidos por una fila de células alargadas envueltas por la pared celular que, reunidas, forman el micelio. Las hifas pueden ser de dos tipos.1 Hifas no septada: también llamadas hifas cenocíticas que se caracterizan por la ausencia de tabiques que separan las células. Hifas septadas: Presentan tabiques que separan cada una de las células.
  • 3. Levaduras Hongo unicelular, redondo o elipsoidal que se reproduce por gemación o fisión binaria. La gemación es la protrusión externa de parte del protoplasma materno (gema o yema), que va creciendo progresivamente, hasta que se desprende produciendo un nuevo individuo. Cada uno de estos elementos se denomina blastosporo y a este tipo de división blastospórica. La célula progenitora queda con las cicatrices de las distintas gemaciones. Es frecuente que exista el fenómeno del "dimorfismo". Esto es, que una levadura forma parte de la evolución morfológica de un hongo filamentoso y al revés. Una levadura que fuese capaz de producir hifas, sería un hongo dimórfico. Las colonias que crecen en un sustrato pueden ser cremosas o mucoides, lisas o plegadas, limitadas circulares, blancas o rojas. Características generales Las levaduras se clasifican en base a sus caracteres morfológicos, aunque para algunos microbiólogos, sus propiedades fisiológicas tienen mayor importancia. La mayoría de las levaduras son hongos unicelulares sencillos microscópicos, la mayoría se reproducen asexualmente por gemación, y otras especies lo hacen por fisión múltiple. Las levaduras que pueden reproducirse sexualmente se conocen como “verdaderas”, este proceso implica la formación de ascosporas, sirviendo la propia levadura como asca, de aquí que ellas se clasifican como Ascomicetos; por el contrario las “falsas” que no producen ascosporas, pertenecen a los hongos imperfectos. Características morfológicas Los caracteres morfológicos de las levaduras se determinan mediante su observación microscópica. Además, los criterios morfológicos se basan en el modo de reproducción vegetativa de la morfología celular, de la formación de pseudomicelio y de micelio. La forma de la levadura puede ser desde esférica a ovoide, en forma de limón, piriforme, cilíndrica, triangular, e incluso alargada formando un verdadero micelio o un falso micelio. También se diferencían en cuanto a su tamaño, miden de 1-10 um ancho por 2-3 um de longitud. Son partes observables de su estructura, la pared celular, el citoplasma, las vacuolas, los glóbulos de grasa, y los gránulos, los cuales pueden ser metacromáticos, de albúmina o de almidón. Para poder observar el núcleo es preciso utilizar tinciones especiales. La estructura celular es de tipo eucariótico, pero sin sistema fotosintético. La pared rígida, se caracteriza por la presencia, en su composición, de dos polisacáridos: manano y glucano. Algunas levaduras producen una cápsula constituida por fosfomanos. El núcleo está rodeado de una membrana que persiste durante la división celular. El número de cromosomas es variable de unas a otras. Las levaduras en ningún caso son móviles.
  • 4. Reproducción La mayoría de las levaduras se reproducen por gemación multicelular o por gemación polar, que es el mecanismo en el cual una porción del protoplasma sobresale de la pared de la célula y forma una protuberancia, la cual aumenta de tamaño y se desprende como una nueva célula de levadura. En las levaduras que forman película, la yema crece a partir de una prolongación tubuliforme de la célula madre. El material nuclear replicado se reparte entre la célula madre y la célula hija (Frazier y Weathoff, 1998). La reproducción sexual de las levaduras verdaderas (Ascomycotina) da lugar a la producción de ascosporas, desempeñando la función de asca, la propia célula de la levadura. En la mayoría de las especies de levaduras verdaderas, la formación de ascosporas tiene lugar tras la conjugación de dos células, aunque algunas pueden producir ascosporas sin que exista conjugación previa, teniendo lugar después la conjugación de las ascosporas. Tanto el número y el aspecto de esporas por asca, son típicos de cada especie de levadura, y se pueden diferenciar por su color, rugosidad o lisura de su pared y por su forma (redondeada, ovalada, arriñonada, falciforme, forma de saturno o de sombrero, hemisférica, angular). Las células de algunas levaduras se transforman en clamidosporas mediante la formación de una gruesa pared alrededor de la célula, tal como ocurre, por ejemplo, en las especies de los géneros Candida, Rhodotorula y Cryptococcus.2
  • 5. Sabouraud Glucosado Agar Medio utilizado para el aislamiento, identificación y conservación de hongos patógenos y saprófitos. También es útil para el cultivo de levaduras. Fundamento Medio de cultivo recomendado para el aislamiento y desarrollo de hongos, particularmente los asociados con infecciones cutáneas (piel, pelo, etc.). En el medio de cultivo, la pluripeptona y la glucosa, son los nutrientes para el desarrollo de microorganismos. El alto contenido de glucosa, la presencia de cloranfenicol y el pH ácido, favorecen el crecimiento de hongos por sobre el de bacterias. Además, al medio de cultivo, pueden agregarse otros agentes selectivos de crecimiento.3 Características Fisológicas Las distintas especies de levaduras pueden ser muy diferentes en cuanto a su fisiología, la mayoría necesitan más humedad para crecer y desarrollarse. El intervalo de temperatura de crecimiento de las levaduras es en general, parecido al de los hongos, con una temperatura óptima en torno a los 25 a 30ºC y una temperatura máxima en torno a los 35 a 47ºC. Una reacción ácida del medio, próxima a un pH de 4 a 4.5, estimula el crecimiento de la mayoría de las levaduras, mientras que en medios básicos, no crecen bien a no ser que se hayan adaptado a los mismos, crecen mejor en aerobiosis, aunque las especies de tipo fermentativo son capaces de crecer, aunque lentamente, en anaerobiosis. En general, los azúcares son la fuente energética más apropiada para las levaduras, aunque en las oxidativas, por ejemplo, las formadoras de película oxidan los ácidos orgánicos y el alcohol, y también contribuyen en la producción de los sabores o “bouquet” de los vinos.2
  • 6. Hongos Ambientales Organismos saprofitos, omnipresentes, en domicilios y exterior. Producen esporas aerotransportadas, que actúan como alergenos inhalatorios. Principales hongos alergénicos: • Altermaria • Prenicilium • Cladosporium • Mucor • Aspergillus • Rhizopus4 Aspergillus La estructura microscópica del Aspergillus es única. Tienen hifas tabiculares y conidioforas cuya cabeza está localizada en el extremo de un hifa, compuesta por una vesícula rodeada por una corona de fiálides en forma de botella directamente insertadas sobre la vesícula.8 De las fiálides se desprenden las esporas (conidios). La conidiófora o conidióforo es una estructura microscópica especializada en la producción asexual de miles de esporas llamadas conidias. Se localizan al extremo de hifas las cuales levantan la conidiofora en el aire con el fin de esparcir las esporas con más eficiencia. Algunas conidioforas (en el Geotrichum candidum, por ejemplo) son de un filamento, mientras que otras (en el Trichoderma viride, por ejemplo) son ramificadas.5
  • 7. Sporothrix schenckii • Es un hongo dimórfico • Crece de forma filamentosa a temperaturas de 25ºC y en forma de levadura a 37ºC en medios enriquecidos y en los tejidos parasitados. • La forma filamentosa presenta colonias de crecimiento lento (3-5 días) inicialmente claras, húmedas o levaduriformes, que posteriormente se convierten en colonias duras y arrugadas de color marrón o negro en su totalidad o por zonas, debido a la producción de conidias pigmentadas. • En el examen microscópico, se observan hifas delgadas de 1-2 mm de diámetro • A medida que el cultivo envejece, la conidiación aumenta y aparecen conidias sésiles a lo largo de los conidióforos e incluso hifas no diferenciadas. • A 25ºC crecen en forma filamentosa con hifas hialinas y septadas y se observan conidióforos y conidias, las cuales tienden a agruparse en forma de margarita. • A 37ºC, la forma de levadura es ovalada o de forma de cigarro o de lágrima. Factores de patogenicidad: • Dimorfismo: es la capacidad que tiene este hongo para presentar dualidad fenotípica asociada a un proceso de diferenciación celular • Melalina: pigmento negro que está en conidio y levaduras de este hongo y no son esenciales para su crecimiento y desarrollo. • Enzimas: fosfatasa alcalina y proteinasas I y II. • Temperatura • Sideróforos: moléculas que enlazan al hierro, facilitando solubilización y transporte del mismo, son biosintetizados bajo un control negativo de hierro o condiciones de estrés férrico.
  • 8. Trichophyton • Desarrollan micro y macroconidios. • Las macroconidias (frecuentemente ausentes) tienen dos o más células generalmente de pared fina y lisa, hialinas con forma cilíndrica, de clava o de cigarro. • Las microconidias son hialinas y de pared lisa y fina, unicelulares con forma ovoide, piriforme, de clava o de lágrima • hongo cosmopolita, de distribución mundial. Macroconidias en forma puro o cigarro. Las microconidias son hialinas y de pared lisa y fina, unicelulares con forma ovoide, piriforme, de clava o de lágrima
  • 9. V. CUESTIONARIO GUIA VII 1. ¿Qué es una hifa, cual es su función, cuántas clases existen? Las hifas son elementos filamentosos cilíndricos característicos de la mayoría de los hongos. Están constituidos por una fila de células alargadas envueltas por la pared celular que, reunidas, forman el micelio. Las hifas pueden ser de dos tipos: • Hifas no septada: también llamadas hifas cenocíticas que se caracterizan por la ausencia de tabiques que separan las células. • Hifas septadas: Presentan tabiques que separan cada una de las células. 2. ¿Cuántas clases de reproducción presentan los hongos, anote las principales características de cada una de ellas? Durante la reproducción, el talo completo del hongo puede convertirse en una o mas estructuras reproductivas, es decir, no coinciden en el mismo individuo las fases reproductiva y somática. Los hongos que siguen este esquema se nombran holocárpicos y se consideran formas más primitivas. En los hongos están presentes los dos tipos generales de reproducción, la sexual y la asexual. Esta última, denominada también somática o vegetativa, no involucra la unión de núcleos, células sexuales u órganos sexuales y es la de mayor importancia para estos organismos, pues da lugar a un mayor número de individuos y tiene lugar muchas veces durante una estación, mientras la sexual transcurre una vez por año. Los métodos de reproducción asexual que se presentan en los hongos son: • Fragmentación del soma, cuando cada fragmento da origen a un nuevo individuo. • Fisión de células somáticas en células hijas. • Gemación de células o esporas somáticas, donde cada yema produce un nuevo organismo. • Producción de esporas que dan lugar a un tubo germinativo y posteriormente a un micelio. Las células formadas producto de la fragmentación se denominan artrosporas u oidios (del griego oidion, huevo pequeño), pero si se rodean de una gruesa pared antes de la separación, se le nombran clamidosporas (del griego chlamys, capa impermeable). La fisión, simple división de una célula en células hijas por constricción, es característica de las bacterias, pero se presenta en las levaduras, que son verdaderos hongos. La gemación es la producción de pequeñas excrecencias (yemas) a partir de una determinada célula; estas yemas crecen y pueden soltarse o quedar adheridas a la célula madre. La reproducción por medio de esporas, es la más común en los hongos; las esporas pueden variar sustancialmente por su color, tamaño o aspecto, en el número y en la forma en que se producen. Pueden originarse en una especie de sacos denominados esporangios (del griego sporos, espora, semilla y angeion, vaso), por lo que se nombran esporangiosporas o en los extremos o lados de ciertas hifas que se llaman conidióforos, reconociéndoseles entonces como conidios. La reproducción sexual en los hongos, como en muchos organismos, tiene lugar casi siempre en presencia de condiciones adversas e implica la unión en una célula de dos juegos de cromosomas para
  • 10. formar un cigoto. Los órganos sexuales se denominan gametangios y el proceso de unión implica plasmogamía, cariogamía y meiosis. En los hongos encontramos 5 tipos de reproducción sexual: • Copulación planogamética: Cuando tiene lugar la fusión de dos gametos descubiertos, planogametos (del griego planetes, ambulante y gamete, conyuge), uno de los cuales puede ser móvil. • Contacto gametangial: Si los gametangios , masculino y femenino, se ponen en contacto y uno o más núcleos migran desde el primero hacia el segundo. No se efectúa una total fusión entre los dos gametos. • Copulación gametangial: Si tiene lugar una fusión de todo el contenido de dos gametangios en contacto, por el paso del contenido de uno a otro o por fusión directa de células gametangiales en una, al disolverse las paredes de contacto. • Espermatización: Cuando las estructuras masculinas, denominadas espermacios, que asemejan esporas, son transportadas por insectos, el viento o el agua hasta los gametangios femeninos. En el punto de contacto se desarrolla un poro y el contenido del espermacio pasa a la estructura receptiva. • Somatogamía: Si no se producen órganos sexuales y las células somáticas asumen la función sexual. Este proceso es característico de las levaduras. Algunos hongos no tienen un verdadero ciclo sexual que concuerde con lo que acabamos de definir, pero obtienen muchos beneficios de la sexualidad a través de la parasexualidad. Esto es un proceso donde tienen lugar plasmogamia, cariogamia y haploidización (división reductiva), pero que no tiene puntos específicos en el talo ni en el ciclo de vida. En los hongos de la clase Deuteromycetes este ciclo parasexual tiene gran importancia. Sobre la base del sexo los hongos se pueden agrupar en tres categorías: • Hermafrodítica, cuando el talo produce órganos masculinos y femeninos. • Dioica, si unos talos producen órganos masculinos y otros los órganos femeninos. • Indiferenciada sexualmente, cuando las estructuras con función sexual son morfológicamente indistinguibles como masculinas o femeninas. Los hongos de las categorías antes mencionadas, pertenecen a uno de los siguientes grupos atendiendo a la compatibilidad de sus talos: • Hongos homotálicos: Son aquellos cuyos talos son sexualmente fértiles y pueden reproducirse sin la ayuda de otro talo. • Hongos heterotálicos: Donde el talo es sexualmente autoestéril y requiere la ayuda de otro talo compatible para la reproducción sexual.6
  • 11. CUESTIONARIO GUIA VIII 1. ¿Cuáles son los signos y síntomas de las micosis cutáneas y subcutáneas? Micosis Cutáneas: Síntomas Tiña asintomática (microsporia oculta) Tiña seca (tiña tonsurante) - Áreas alopécicas visibles, descamación e inflamación moderada; ausencia de prurito. - Pelos rotos al ras de la piel (tiña microspórica) o completamente arrancados (tiña tricofítica). - Localización en cualquier parte del cuerpo, pero con mayor frecuencia en la cabeza (en el testuz y debajo de los ojos) Querión (tiña inflamatoria) - Zonas de inflamación intensa en las que se observa una lesión redondeada, rosada y exudativa, debida probablemente a un fenómeno de hipersensibilidad a las esporas. - Pocas lesiones (incluso una sola), localizadas generalmente en la cabeza. Onicomicosis (tiña de las uñas) Micosus Subcutáneas Síntomas: Malestar Fiebre Dolor en la espalda Cefalea Tos Dolor Pleural Artralgia y tumefacción periarticular de rodillas y tobillos. Las micosis profundas o sistémicas, que afectan los tejidos del interior del organismo, son las más graves y, además, resulta difícil su diagnóstico. Su área de influencia se reduce a las zonas tropicales, y la forma de infección es casi siempre a través de una herida o, con menor frecuencia, a través de los pulmones. Las enfermedades más graves de origen fúngico profundo son la histoplasmosis y la coccidioidomicosis, que causan una infección pulmonar lenta y crónica. Algunas afecciones producen abscesos que causan una destrucción importante de los tejidos, en tanto que otras formas de micosis pueden originar un tipo de meningitis.7 2. ¿Qué son hongos dermatofitos, que géneros comprenden? Los dermatofitos son hongos filamentosos que afectan a la epidermis y anejos cutáneos. La principal característica de ellos es que invaden las capas superficiales queratinizadas de la piel, pelos y uñas. Algunos atacan la queratina, allá donde esté en la Naturaleza; otros son altamente especializados y, por tanto, restringen su patogenicidad a ciertos huéspedes y tejidos. Producen manifestaciones clínicas muy variables, desde síntomas leves, hasta lesiones supuradas e inflamatorias intensas, que reciben el nombre genérico de dermatofitosis o tiñas. Tres géneros principales: Microsporum, Trichophyton y Epidermophyton Microsporum: • Presenta colonias algodonosas o pulverulentas, de color blanco o parduzco. • Las macroconidias son de mayor tamaño multicelulares (5 a 8 celulas por conidia) de pared gruesa y rugosa. • Son puntiagudas en ambos extremos y con pared celular gruesa, equinulada, y divididas en compartimentos que varían desde 2 a 15 por septos transversales.
  • 12. Trichophyton • Desarrollan micro y macroconidios. • Las macroconidias (frecuentemente ausentes) tienen dos o más células generalmente de pared fina y lisa, hialinas con forma cilíndrica, de clava o de cigarro. • Las microconidias son hialinas y de pared lisa y fina, unicelulares con forma ovoide, piriforme, de clava o de lágrima • hongo cosmopolita, de distribución mundial. Epidermophyton: • Presenta solamente macroaleuricoconidias en forma de bastos o clavas, que miden entre 15 a 30 µm de ancho, de paredes gruesas y lisas, con 3 a 4 tabiques transversales.3
  • 13. 3. A qué se denomina micosis oportunistas? Especies fúngicas que las producen. El paciente comprometido que se caracteriza por déficit de distintas magnitudes en sus mecanismos de defensas específicos o inespecíficos desarrollan cuadros infecciosos de elevada mortalidad ocasionadas por especies micóticas que habitualmente forma parte de la flora intestinal, cutánea, orofaringe y genital, o que son contaminantes atmosféricos que presentan bajo nivel de patogenicidad. Esta micosis es cosmopolita. Algunas de las alteraciones principales que llevan a padecer micosis oportunistas son: • Alteración de la flora normal • Alteración cuali y cuantitativa de los neutrofilos (disminución del numero 'neutropenia' o ausencia 'agranulositosis'). • Exposición a cuerpos extraños contaminados ( procedimientos invasivos como venopuncion, cateterizacion, endoscopia). • Alteración inmunológica (desnutrición, HIV, corticoterapia). • Enfermedades intermitentes. • Intoxicaciones crónicas. Las especies micóticas oportunistas más frecuentes son: Candidiasis, Aspergilosis, Criptococosis. Las menos frecuentes son: Zigomicosis, Hialomicosis, Fehomicosis.8 4. Defina: Aflatoxina, Micetismo, Micetoma Aflatoxina: Las aflatoxinas son micotoxinas producidas por muchas especies del género de hongos Aspergillus, como metabolitos secundarios. Pertenecen al grupo de las micotoxinas. los más notables Aspergillus flavus, Aspergillus niger y Aspergillus parasiticus. Pero también pueden ser producidas por hongos del género Penicillium, como P. verrucosum. Las aflatoxinas son tóxicas y carcinogénicas para animales, incluyendo humanos. Luego de la entrada al cuerpo, las aflatoxinas se metabolizan por el hígado con un reactivo intermedio, la aflatoxina M1. Actualmente se conocen unos 20 compuestos químicamente similares, de elevada toxícidad y carcinogenicidad. Son de gran importancia en la industria de cereales almacenados, ya que su potencial de toxicidad es muy elevado, pueden provocar la muerte de cualquier ser vivo que consuma algún cereal infectado con alguna de las toxinas conocidas. Micetismo: Intoxicación por hongos o por setas.
  • 14. Micetoma: El micetoma es una enfermedad local, crónica y progresiva de la piel, tejidos subcutáneos y óseos, que se caracteriza por una tumefacción que en muchas ocasiones es grotesca y desfigurante, con fístulas que drenan un exudado serosanguinolento o purulentos que contiene gránulos. Estos son ocasionados por diversas especies de hongos (eumicetomas) o de actinomicetos (actinomicetomas) que se organizan en agregados de hifas o filamentos bacterianos, respectivamente, constituyendo los gránulos que pueden ser de diferente tamaño, color y consistencia dependiendo de la especie causante del micetoma. Existen por lo menos 20 especies de actinomicetos y hongos superiores que pueden provocar micetomas, siendo los más frecuentes Actinomycetos, Nocardia brasiliensis y Actinomadura. Su distribución es mundial, aunque la mayor frecuencia e importancia histórica de la enfermedad se halla en la provincia de Madura en la India, por lo que también se conoce con los nombres de "pie de madura" y maduromicosis; aunque es en la región de Sudán, en el noreste de África, donde se ha reportado el mayor número de casos. La lesión se presenta con gran frecuencia en la piel, relacionada con la costumbre de las personas de andar descalzos, sobre todo en zonas tropicales; hábito también frecuente en nuestro país, habiéndose reportado algunos casos aislados. 9 5. ¿Cuál es la importancia médica del estudio de los hongos dermatofitos, qué géneros comprenden? Permite conocer las enfermedades que éstos pueden provocar, y el diagnóstico diferencial de dichas enfermedades. Los dermatofitos son hongos filamentosos que afectan a la epidermis y anejos cutáneos. La principal característica de ellos es que invaden las capas superficiales queratinizadas de la piel, pelos y uñas. Algunos atacan la queratina, allá donde esté en la Naturaleza; otros son altamente especializados y, por tanto, restringen su patogenicidad a ciertos huéspedes y tejidos. Producen manifestaciones clínicas muy variables, desde síntomas leves, hasta lesiones supuradas e inflamatorias intensas, que reciben el nombre genérico de dermatofitosis o tiñas. Tres géneros principales: Microsporum, Trichophyton y Epidermophyton
  • 15. VII. CONCLUSIONES • Los hongos pueden ser de dos tipos: mohos y levaduras. • Las hifas pueden ser: septadas o no septadas. • Sabouraud Glucosado Agar, medio utilizado para el cultivo de levaduras. • Tres géneros principales de dermatofitos: Microsporum, Trichophyton y Epidermophyton VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Maceda A, Gonzáles I. Generalidades de los hongos [Sede Web].España: AlaquaIrum; 2009 – [acceso el 10 de octubre de 2009]. Disponible en: http://www.alaquairum.net/generalidades_hongos.htm 2. Zamora A. Levaduras [Sede Web]. España: Galeon; 2009 – [acceso el de 10 de octubre de 2009]. Disponible en: http://alezamora.galeon.com/aficiones1893538.html 3. Britanialab.com. Sabouraud Glucosado Agar [Sede Web]. Argentina: Britanialab.com; 2009- [acceso el 10 de octubre 2009] Disponible en: http://www.britanialab.com.ar/esp/productos/b02/sabouraudgluagar.htm 4. García J. Hongos Ambientales [Sede Web]. España: Sección de Alergología del H.U “Virgen de la Arrixaca”; 2009 – [acceso el 10 de octubre del 2009]. Disponible en: http://alergomurcia.com/pdf/Alergia_el_enemigo_en_casa.pdf 5. Wikipedia.org. Aspergillus [Sede Web]. España: Wikipedia.org; 2009- [actualizado el 28 de agosto de 2009; acceso el 10 de octubre de 2009]. Disponible en:http://es.wikipedia.org/wiki/Aspergillus 6. Ferato.com. Reproducción de Hongos [Sede Web]. España. Ferato.com; 2009 – [acceso el 10 de octubre de 2009]. Disponible en: http://www.ferato.com/wiki/index.php/Hongo 7. Schroeder S, Krupp M, Tierney L, McPhee S. Diagnóstico Clínico y Tratamiento. 41ed. México: Manual Moderno; 2006. 8. Farmacología2. Micosis oportunistas [Sede Web]. España: Famarcalogía; 2009 – [acceso el 10 de octubre de 2009]. Disponible en: http://www.farmacologia2.com.ar/micosis- oportunistas.htm 9. Guevara M, Navarro A, Aranzamendi C, Quispe N, Chávez V. Micetoma. Revista Peruana de Medicina Experimental y Salud Pública [Revista en Internet] 2003-[acceso el 10 de octubre de 2009]; 20(3). Disponible en: http://www.scielo.org.pe/scielo.php? script=sci_arttext&pid=S1726-46342003000300009