Guia IV: Métodos de diagnóstico e identificación para ETS

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  • 1. UNIVERSIDAD CATÓLICA SANTO TORIBIO DE MOGROVEJO Facultad de Medicina Escuela de Medicina MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Práctica N°04 Métodos de diagnóstico e identificación para ETS Jesús Alonso Custodio Marroquín Código: 062ac03464 Ciclo 2009 - IV
  • 2. Neisseria gonorrhoeae Las especies de Neisseria son cocos gramnegativos aerobios de diámetro comprendido entre 0,6 y 1 µm y que generalmente se disponen en parejas (diplococos) cuyos lados se aplanan para adoptar una morfología semejante a la de un grano de café. Las bacterias son inmóviles y no forman esporas. Todas las especies son oxidasa-positivas y casi todas sintetizan catalasa: propiedad que, junto a la morfología en la tinción Gram, hacen posible la identificación rápida de sospecha de una cepa clínica. Fabrican ácido a través de la oxidación de la glucosa. El desarrollo de las cepas de N. gonorrhoeae requiere cistina, y muchas cepas han de ser complementadas con medios con aminoácidos, purinas, pirimidinas y vitaminas. Se añade almidón soluble a los medios con el fin de neutralizar el efecto tóxico de los ácidos grases. La temperatura óptima de crecimiento oscila entre 35°C y 37°C, y la supervivencia de los microorganismos es escasa a temperaturas inferiores. Una atmósfera complementada con dióxido de carbono (CO2 ) es necesaria para su crecimiento. Aunque la naturaleza exigente de este microorganismo hace difícil su recuperación de las muestras clínicas, su transmisión por vía sexual de una persona a otra es sencilla. La estructura de N. gonorrhoeae es la habitual en las bacterias gramnegativas, ya que incluye una delgada capa de peptidoglucano entre las membranas citoplasmáticas interna y externa. La membrana externa posee múltiples antígenos: proteínas pilli; proteínas Por; proteínas Opa; proteínas Rmp; receptores proteicos de transferrina, lactoferrina y hemoglobina; lipooligosacárido; proteasa de la inmunoglobulina; β-lactamasa.
  • 3. Factores de virulencia de Neisseria gonorrhoeae Factor de virulencia Efecto biológico Proteína que interviene en la adhesión inicial a las células humanas no Pilina ciliadas (p. ej., epitelio vaginal, trompa de Falopio y cavidad oral); interfiere en la muerte producida por neutrófilos. Proteína que facilita la supervivencia intracelular al evitar la fusión de los Proteína Por fagolisosomas en los neutrófilos. Proteína de opacidad que interviene en la adhesión firme a las células Proteína Opa eucariotas. Proteína de reducción modificable que protege a otros antígenos de Proteína Rmp superficie (proteína Por, LOS) de los anticuerpos bactericidas. Proteínas que se unen a la Intervienen en la adquisición de hierro para el metabolismo bacteriano. transferrina Proteínas que se Intervienen en la adquisición de hierro para el metabolismo bacteriano. unen a lactoferrina Proteínas que se Intervienen en la adquisición de hierro para el metabolismo bacteriano. unen a hemoglobina LOS Lipooligosacárido que tiene actividad de endotoxina. Proteasa del IhA1 Destruye la inmunoglobulina A1 β-lactamasa. Hidroliza el anillo β-lactámico de la penicilina. Epidemiología La gonorrea afecta exclusivamente al ser humano; no existe ningún otro reservorio conocido. Es la segunda enfermedad de transmisión sexual más frecuente en USA.( las infecciones por Chlamydia ocupan el primer lugar. Las tasas de infección iguales en hombres y mujeres, son desproporcionadamente más altas en los sujetos de raza negra que en los hispanos y los caucasianos, y son más elevadas en el sudeste estadounidense. La incidencia máxima de la enfermedad se registra en el grupo de de edades comprendidas entre 15 y 24 años. Los portadores pueden ser asintomáticos, en especial las mujeres.
  • 4. Enfermedades Gonorrea Caracterizado por secreción purulenta en la localización afectada (p. ej., uretra, cuello del útero, epidídimo, próstata, ano) tras un período de incubación de 2 a 5 días. Infecciones diseminada Diseminación de la infección desde el aparato urinario a través de la sangre hasta la piel o las articulaciones; se caracteriza por exantema pustular con base eritematosa y artritis supurativa en las articulaciones afectadas. Oftalmia neonatal Infección ocular purulenta adquirida por el neonato durante el nacimiento. Patogenia e Inmunidad Los gonococos se adhieren a las células mucosas, penetran en las células y se multiplican, y posteriormente pasan a través de ellas al espacio subepitelial, donde se produce la infección. Los pilli, las proteínas PorB y Opa intervienen en la fijación y penetración en las células anfitrionas. El LOS gonocócico estimula la respuesta inflamatoria y la liberación del factor de necrosis tumoral – α (TNF – α), que es el responsable de la mayoría de los síntomas que se asocian a la enfermedad gonocócica. Diagnóstico de Laboratorio Microscopía La tinción Gram es muy sensible (más del 90%) y específica (98%) para detectar las infecciones gonocócicas en el hombre con uretritis purulenta. Sin embargo, su sensibilidad para detectar la infección en los hombres asintomáticos es igual o menor al 60%. Cultivo N. gonorrhoeae se puede aislar fácilmente a partir de muestras genitales cuando se obtienen y procesan de manera cuidadosa. Debido a que otros microorganismos comensales colonizan normalmente las superficies mucosas, todas las muestras genitales, rectales y faríngeas se deben inocular tanto en medios selectivos (medio de Thayer –Martin modificado) como en medios no selectivos (Agar chocolate).
  • 5. Prueba RPR Resultados Grupo: 1A Muestra: Paola Casa Bocángel. La prueba es negativa, ya que al mezclar 1 gota de suero con el reactivo RPR no se dio aglutinación. (Área 4) Se compara con la muestra positiva del Área 5, donde sí se dio aglutinación. Grupo: 1B Muestra: María José Chunga Aparicio. La prueba es negativa, ya que al mezclar 1 gota de suero con el reactivo RPR no se dio aglutinación. (Área 1) Se compara con la muestra positiva del Área 6, donde sí se dio aglutinación.
  • 6. Fundamento: Es una prueba de detección para sífilis, que busca anticuerpos presentes en la sangre de personas que tengan esta enfermedad. La prueba de reagina plasmática rápida (RPR) puede usarse para diagnosticar sífilis. Se usa para examinar personas que tengan síntomas de enfermedades de transmisión sexual y de manera rutinaria para examinar mujeres embarazadas en búsqueda de la enfermedad. Varios estados igualmente exigen que las parejas se deben practicar un examen para sífilis antes de concederles una autorización de matrimonio. La prueba también usa para ver cómo está funcionando el tratamiento para la sífilis. Después del tratamiento con los antibióticos, los niveles de anticuerpos para sífilis deben disminuir. Estos niveles pueden vigilarse con otra prueba de reagina plasmática rápida. Los niveles inalterados o crecientes pueden significar que la infección persiste. 2 El RPR es una prueba diseñada para detectar reagina en el suero de manera rápida, no requiere inactivación por calor La muestra se mezcla con una suspensión que posee cardiolipina, lecitina y colesterol en partículas de carbón.3 La determinación rápida de las reaginas plasmáticas se efectúa ensayando el antígeno –una asociación de lípidos complejos y carbón- frente a las muestras problema. La presencia o ausencia de una aglutinación visible es indicativa de la presencia o ausencia e reaginas luéticas en las muestras ensayadas.4 Si la muestra es positiva se observa pequeños grumos negros (floculación). El resultado se reporta como reactivo o no reactivo; todos aquellos reactivos deben ser diluidos seriadamente para realizar la titulación, y se reporta la dilución más alta que exhibe reacción.3
  • 7. VDRL En individuos infectados por treponema Pallidum, se desarrollan un tipo de anticuerpos denominados “reaginas” que reaccionan con suspensiones de un Antígeno NO TREPONEMICO preparado con cardiolipina, lecitina y colesterol. La presencia de reaginas en muestras de pacientes infectados produce la floculación de la suspensión antigénica cuya aparición se observa al microscopio. La incorporación de un colorante de contraste favorece la observación de las partículas.5 En la prueba de VDRL, el suero del paciente es inactivado a 56° C por 30 minutos, si se usa liquido cefalorraquídeo (LCR) sólo se debe centrifugar Luego la muestra se mezcla con un antígeno, que es una solución buffer salina de cardiolipina y lecitina adosadas a partículas de colesterol. Esta prueba se puede realizar en lámina y ser observada al microscopio como un precipitado de partículas finas (floculación), o se puede realizar en un tubo de ensayo y ser leída macroscópicamente. Los resultados de VDRL en lámina son comunicados como no reactivos (no hay floculación, débilmente reactivos (ligera floculación, y reactivos floculación definitiva. Todos los sueros reactivos se diluyen seriadamente, a cada dilución se le realiza la prueba de VDRL y se registra el titulo máximo obtenido. Rara vez se tiene un paciente con título elevado en las diluciones y con VDRL no reactivo en la muestra sin diluir (fenómeno de prozona), si ocurriera es más frecuente en la sífilis secundaria. Se obtiene falsos negativos en ciertas condiciones, tales como fenómeno de prozona, bajo título de anticuerpos, presencia de sustancias inhibidoras en el suero del paciente, VIH, la temperatura ambiental fuera del rango de 23-29° C o error técnico. Los falsos positivos pueden llegar a 10 a 30%, y han sido reportados en casos de síndrome de anticuerpos antifosfolípidos, lupus eritematoso sistémico (LES), fiebre reumática, neumonía vira, neumonía neumocócica, mononucleosis infecciosa, hepatitis infecciosa, lepra, malaria, artritis reumatoide, infecciones por otros treponemas, embarazo, ancianos, y muestras hemolisadas o contaminadas.6
  • 8. V. CUESTIONARIO. 1. ¿Cuál es el fundamento de la prueba de Aminas? La prueba de liberación de aminas positiva (trimetilamina, putresina y cadaverina) se realiza mezclando la muestra vaginal con algunas gotas de hidróxido de potasio (KOH) al 10% (prueba de Whiff o prueba de aminas); al alcalinizar el medio se liberan aminas y ácidos grasos, dando un olor típico a "pescado". No se produce olor en ausencia de VB2,13,21.7 2.- ¿Cuáles son las características de las colonias de Neisseria en agar Thayer Martin o Agar Chocolate?
  • 9. VI. CONCLUSIONES Neisseria gonorrhoeae • Diplococos gramnegativos con requerimientos exigentes de crecimiento. • Crecen mejor a 35°C – 37°C en atmósfera húmeda suplementada con CO • Oxidasa y catalasa-positivos; producción de ácidos a partir de glucosa en forma oxidativa. • La membrana externa posee múltiples antígenos: proteínas pilli; proteínas Por; proteínas Opa; proteínas Rmp; receptores proteicos de transferrina, lactoferrina y hemoglobina; lipooligosacárido; proteasa de la inmunoglobulina; β-lactamasa. El test de RPR resultó negativo evidenciado en la no aglutinación, por lo que se descarta la presencia de sífilis. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1. Murray P. Microbiología Clínica. 5ed. España: Elsevier; 2006. 2. Medline Plus. RPR [Sede Web]. USA: Medline; 2009 –[ actualizado el 27 de agosto de 2009; acceso el 11 de septiembre de 2009] Disponible en: http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003533.htm 3. Sanguineti-Díaz C. Pruebas de Laboratorio en el diagnóstico de la sífilis: RPR. Anales de Medicina de la UNMSM [Revista en Internet] 2000[acceso el 11 de septiembre de 2009]; 10(1). Disponible en:http://sisbib.unmsm.edu.pe/BVrevistas/dermatologia/v10_sup1/pruebas_lab.htm 4. Linear Chemicals. RPR [Sede Web]. España: Linear Chemicals; 2009-[acceso el 11 de septiembre de 2009]. Disponible en: http://www.linear.es/ficheros/archivos/2510010_cas_.pdf? PHPSESSID=agfqp8t92mpdg5bpc1k319coa2 5. GTLab. VDRL [Sede Web]. Argentina: GTLab; 2009-[acceso el 11 de septiembre de 2009]. Disponible en: http://www.gtlab.com.ar/ManualesInstruccion/VDRLfastUSR.pdf 6. Sanguineti-Díaz C. Pruebas de Laboratorio en el diagnóstico de la sífilis: VDRL. Anales de Medicina de la UNMSM [Revista en Internet] 2000[acceso el 11 de septiembre de 2009]; 10(1). Disponible en:http://sisbib.unmsm.edu.pe/BVrevistas/dermatologia/v10_sup1/pruebas_lab.htm 7. Méndez M, Calderón J. Vaginosis bacteriana: diagnóstico y prevalencia en un Centro de Salud. Anales de Medicina de la UNMSM [Revista en Internet] 2001-[acceso el 11 de septiembre de 2009]; 47(1). Disponible en:http://sisbib.unmsm.edu.pe/BVRevistas/ginecologia/Vol_47N1/vaginosis.htm