Guia I: Principales Métodos de Diagnóstico Inmunológico

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Guia I: Principales Métodos de Diagnóstico Inmunológico

  1. 1. UNIVERSIDAD CATÓLICA SANTO TORIBIO DE MOGROVEJO Facultad de Medicina Escuela de Medicina MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA Práctica N°01 Principales Métodos de Diagnóstico Inmunológico. Jesús Alonso Custodio Marroquín Código: 062ac03464 Ciclo 2009 - IV
  2. 2. Determinación de grupo sanguíneo y factor Rh. Muestra 1: MariaJosé Chunga Aparicio. Lámina A + Anti-A (Azul) = No aglutinó Lámina B + Anti-B (Amarillo) = Aglutinó Lámina Rh + Anti-D (Transparente) = Aglutinó Resultado : Grupo: B / Factor: Rh+
  3. 3. Muestra 2: Jesús A. Custodio Marroquín. Lámina A + Anti-A (Azul) = No aglutinó Lámina B + Anti-B (Amarillo) = No aglutinó Lámina Rh + Anti-D (Transparente) = Aglutinó Resultado : Grupo: O / Factor: Rh+
  4. 4. Fundamentación: Grupo Sanguíneo Grupo sanguíneo es cada uno de los diversos tipos en que se ha clasificado la sangre de las personas en relación con la compatibilidad de los hematíes y suero de otro individuo donador de sangre con los hematíes y suero de otro individuo que la recibe. La determinación de estos grupos, que al principio se limitaban a la sección de donantes y receptores para la transfusión sanguínea se ha extendido a la determinación de la paternidad y a la identificación en criminología. Estos grupos son cuatro, según la clasificación que hizo Landsteiner, clasificación hoy universal y se denominan: O, A, B, AB. Se caracterizan por las diferentes combinaciones de dos aglutinógenos existentes en los glóbulos rojos y de dos aglutininas contenidas en el suero.1 Factor Rh El Factor Rh es un aglutinógeno encontrado en 1940 por Landsteiner y Weiner, en los glóbulos rojos en uno primates (Macacus rhesus) y que también existe normalmente en el 85% de los humanos, que por esta causa se denomina Rh positivos. La sangre de estos transfundida a los Rh negativos (15%), provoca en el suero de éstos últimos la formación de anticuerpos, que en sucesivas transfusiones pueden destruir los glóbulos rojos del donante Rh +, invalidando así la transfusión y creando efectos adversos. También en el embarazo un feto Rh + puede provocar en la madre Rh - la producción de aglutininas que podrán ser la causa de la enfermedad hemolítica de los recién nacidos. El factor Rh está constituido por un complejo de seis antígenos fundamentales, formado por tres pares de genes alelos: Cc, Dd, Ee. El antígeno de mayor poder sensibilizante es el D, le siguen en importancia el e y el E. 1 Esquematización de los grupos sanguíneos y posibilidades de transfusiones entre ellos. POSIBLE NO POSIBLE o o, A, B, AB AB A, B, 0 A A, AB A B, 0 B B, AB B A, 0 AB AB Esquematización del factor Rh y posibilidades de transfusiones entre ellos. POSIBLE NO POSIBLE Rn (-) Rh (+) Rh (+) Rh (-) Rh (-) Rh (-) Rh (+) Rh (+) Aglutinación
  5. 5. Agrupamiento en pequeños cúmulos de cuerpos formes (microbios, hematíes) portadores de un antígeno y en suspensión en un líquido originado cuando se introduce el anticuerpo correspondiente en el líquido. Se observa en los caldos de cultivo de ciertos microbios cuando se añaden algunas gotas de suero de un sujeto vacunado contra la enfermedad causada por este microbio o de un individuo afectado por dicha enfermedad. Los bacilos, inmóviles, forman acumulaciones que descienden al fondo del tubo. Los cultivos esterilizados presentan la misma propiedad (concepto relacionado: serodiagnóstico) y su manipulación carece de peligro. La aglutinación ha sido observada igualmente en los hematíes. Esta reacción de aglutinación permite identificar un antígeno (por ejemplo de un microbio, o de glóbulos rojos: grupo sanguíneo) o comprobar la presencia de un anticuerpo (serodiagnóstico) que se busca con el anticuerpo o el antígeno correspondiente.2 Determinación de gonadotropina coriónica humana en orina (Test de embarazo)
  6. 6. La formación de grumos evidencia la aglutinación, por lo cual se demuestra la presencia de la hormona gonadotropina coriónica humana en la muestra de orina. Fundamentación La gonadotropina coriónica humana (HCG) se produce durante el primer trimestre de la gestación. La prueba más utilizada para el diagnóstico de la gestación se basa en la determinación de la presencia de esta hormona en el suero sanguíneo o en la orina. La HCG puede detectarse en sangre a partir de los 10 días y en orina a partir de los 20 días post-fecundación, hasta las 14 semanas de gestación. Cuando las pruebas son realizadas en condiciones adecuadas tienen un fiabilidad hasta del 99%, y para ello se recomienda recoger la orina de la primera micción de la mañana.3 La molécula de HCG está constituida por dos subunidades, unidas no covalentemente, denominadas α y β. La subunidad α de HCG es similar a la subunidad α de varias hormonas secretadas por la hipófisis: la tiroidea estimulante (hTSH), la folículo estimulante (hFSH) y la hormona leuteinizante (hLH). 4 La diferencia entre ellas se encuentra en la secuencias aminoácido de la subunidad β, la cual les confiere la especificidad biológica e inmunológica. La subunidad β es la que se detecta al momento de hacer la prueba. Por lo tanto cuando se determina la HCG lo que realmente se mide es la subunidad β de la HCG.5 El test de embarazo sobre la placa (látex monoclonal directo) está basado en la aglutinación rápida de partículas de látex sensibilizadas por anticuerpos monoclonales con la HCG presente en la muestra. La presencia de HCG en las muestras urinarias conduce a una aglutinación se que se diferencia visualmente de la no aglutinación del control negativo. 6
  7. 7. Determinación de los valores de Proteína C reactiva, Factor Reumatoideo y ASO. Proteína C Reactiva (PCR) La formación de grumos evidencia la aglutinación, por lo cual se demuestra la presencia de la Proteína C reactiva en la muestra sanguínea. Fundamentación La proteína C reactiva es producida por el hígado y su nivel se eleva cuando hay inflamación en todo el cuerpo La proteína C-reactiva es un examen general para verificar si hay una inflamación en todo el cuerpo. No es un examen específico; es decir, puede revelar que usted tiene una inflamación en alguna parte del cuerpo, pero no puede señalar la localización exacta. El médico puede ordenar este examen para: • Verificar exacerbaciones de enfermedades inflamatorias como artritis reumatoidea, lupus o vasculitis. • Determinar si un antinflamatorio está funcionando para tratar una enfermedad o afección. 7 Como un fenómeno no específico, el incremento en la concentración de Proteína C Reactiva se puede presentar en cualquier proceso inflamatorio agudo (ya sea infeccioso o no infeccioso). La concentración de Proteína C Reactiva generalmente se encuentra por debajo de 6 mg/L en el suero de adultos sanos y en enfermedades inflamatorias estos valores frecuentemente se incrementan en un lapso de 4 a 8 horas después de presentarse un evento agudo alcanzando niveles aproximadamente de 20 a 500 mg/L. Varios métodos de inmunoprecipitación se han desarrollado para la detección de Proteína C Reactiva. El principio del procedimiento presentado involucra una reacción inmunológica entre la Proteína C Reactiva (como antígeno) y el anticuerpo correspondiente adsorbido a las partículas de látex (látex sensibilizado con anti-Proteína “C” Reactiva. Resultado Positivo Presencia de agregados macroscópicos (aglutinación comparable al control positivo). Resultado Negativo Ausencia de agregados macroscópicos (sin aglutinación, comparable al control negativo).8 Factor Reumatoideo
  8. 8. Esta prueba detecta y mide la presencia de Factor Reumatoide (FR) en la sangre. El FR es un autoanticuerpo, una inmunoglobulina (proteína) de tipo IgM producida por el sistema inmune del organismo. Los autoanticuerpos suelen atacar tejidos del propio individuo, ya que los reconocen como si se tratara de estructuras extrañas. No se conoce con certeza la función del FR, aunque sí se sabe que no actúa directamente sobre las articulaciones lesionándolas, sino que favorece las reacciones inflamatorias en el organismo y éstas son las responsables de la destrucción tisular de causa autoinmune. La prueba del FR es sensible aunque no específica. Si bien su presencia se asocia mayoritariamente con la Artritis Reumatoide (AR), también puede estar presente en diversos trastornos de tipo auto inmune, como el síndrome de Sjögren, y en algunas infecciones víricas y bacterianas; es posible que se encuentre FR en un porcentaje pequeño de individuos sanos. 9 El factor reumatoide está constituido por inmunoglobulinas con especificidad para el fragmento Fc de la IgG. La mayoría de los métodos de los laboratorios detectan el factor reumatoide IgM 19S, pero también se observan propiedades de factor reumatoide tanto en las inmunoglubulinas IgM e IgG 7S como en la IgA. El factor reumatoide está presente en enfermos con artritis reumatoide, lupus eritematoso generalizado, artritis reumatoide juvenil, Sindrome de Sjogren esclerosis generalizada progresiva, mononucleosis infecciosa y en algunos pacientes con poliomielitis. La prueba de aglutinación con partículas de látex es hoy en día el método más comúnmente empleado para la detección del factor reumatoide, la gammaglobulina agregada es absorbida sobre partículas de látex, que se aglutinan en presencia del factor reumatoide, la prueba de aglutinación con partículas de látex no es específica, pero sí muy sensible. Resultados: • La aglutinación de las partículas de látex indica una reacción positiva. • La no aglutinación o una ligera aparición de granulosidad que no exceda a la observada en el control negativo, indica un resultado negativo. • La sensibilidad del reactivo de látex es de 3ul/mL. Antiestreptolisina (ASO)
  9. 9. La no formación de grumos evidencia la no aglutinación, por lo cual la prueba es negativa, ya que no hay presencia de ASO en la muestra sanguínea. Fundamentación Es un examen de sangre para medir los anticuerpos contra estreptolisina O, una sustancia producida por las bacterias estreptococos del grupo A. La anti-estreptolisina O es el conjunto de anticuerpos específicos frente a la estreptolisina O, una enzima extracelular producido por estreptococos del grupo A de Lancefield b-hemolítico (Streptococcus pyogenes). La anti-estreptolisina puede detectarse desde una semana a un mes después de la infección del estreptococo. Streptococcus pyogenes causa una amplia variedad de infecciones en las vías respiratorias altas tales como la faringitis aguda. Otras manifestaciones de infección por Streptococcus pyogenes incluyen glomerulonefritis, fiebre reumática, endocarditis bacteriana y fiebre escarlata. El Control Positivo (C +) provoca la aparición de una aglutinación visible de las partículas de látex. El Control Negativo (C -) no provoca la aparición de una aglutinación visible de las partículas de látex.10 V. CUESTIONARIO.
  10. 10. 1. ¿Cuáles son los niveles de bioseguridad en el trabajo de laboratorio y porqué es importante su aplicabilidad? El centro para el control y prevención de enfermedades (CDC) de los Estados Unidos, especifica cuatro niveles de bioseguridad para el manejo de agentes biológicos, los cuales son conocidos como Niveles de bioseguridad del 1 al 4, la clasificación de cada laboratorio identifica el riesgo biológico que representan para la salud los agentes que ahí se manejan. Son importantes para conocer las medidas de seguridad que se deben tomar para el trabajo en el laboratorio y así prevenir y evitar cualquier tipo de accidentes. Nivel de Bioseguridad 1 En este nivel se trabaja con agentes que presentan un peligro mínimo para el personal del laboratorio y para el ambiente. El acceso al laboratorio no es restringido y el trabajo se realiza por lo regular en mesas estándar de laboratorio. En este nivel no se requiere equipo especial ni tampoco un diseño específico de las instalaciones. El personal de estos laboratorios es generalmente supervisado por un científico con entrenamiento en microbiología. Nivel de Bioseguridad 2 Es similar al nivel 1 y en él se manejan agentes de peligro moderado hacia el personal y el ambiente, pero difiere del nivel 1 en las siguientes características: 1. El personal de laboratorio tiene entrenamiento específico en el manejo de agentes patógenos 2. El acceso al laboratorio es restringido cuando se está realizando algún trabajo 3. Se toman precauciones extremas con instrumentos punzocortantes contaminados 4. Ciertos procedimientos en los cuales pueden salpicar los agentes o aerosoles se llevan a cabo en gabinetes de trabajo biológico Nivel de Bioseguridad 3 Este nivel es el que se encuentra en los laboratorios clínicos, de diagnóstico, algunos laboratorios universitarios y también de investigación, en el cual se realiza trabajo con agentes exóticos o que pueden causar un daño serio y potencialmente mortal como resultado de la inhalación o exposición a los mismos (por ejemplo, el Ántrax). El laboratorio cuenta con un diseño y con características especiales y todos los materiales son manipulados utilizando vestimenta y equipo de protección. Sin embargo, se reconoce que no todos los laboratorios llegan a cumplir con las normas recomendadas para este nivel de bioseguiridad. En estas circunstancias, es aceptable el realizar las siguientes prácticas para poder seguir operando de una manera segura: 1. Ventilar el aire del laboratorio al exterior 2. La ventilación del laboratorio se tiene que hacer con un flujo de aire direccional controlado 3. El acceso al laboratorio está restringido 4. Seguir el estándar de prácticas microbiológicas y equipamiento de seguridad impuesto para el nivel de bioseguridad 2.
  11. 11. Nivel de Bioseguridad 4 Este nivel es el que se utiliza para trabajar con agentes biológicos que representan un alto riesgo individual de contagio y que además son un riesgo para la vida. Los agentes nuevos que tienen un cierto parecido con los antígenos de los agentes conocidos que operan en el nivel 4, son confinados a este nivel hasta que se tiene suficiente información para confirmar que pertenecen a este nivel o bien pasarlos al nivel adecuado. El personal de estos laboratorios cuenta con entrenamiento específico y extensivo en el manejo de agentes infecciosos y cuentan con entrenamiento para trabajar en el ambiente estéril y controlado de los mismos. Por lo regular los científicos que laboran aquí, utilizan trajes especiales que cubren la totalidad de sus cuerpos y que además tienen una leve sobrepresión para evitar que entren partículas infecciosas al mismo si es que éste llega a desgarrarse. Los laboratorios se mantienen con una presión de aire negativa, lo cual ayuda a impedir que los agentes nocivos escapen al ambiente. 2. ¿Qué utilidad tiene la prueba de antiestreptolisina? Explica el fundamento de la prueba Es un examen de sangre para medir los anticuerpos contra estreptolisina O, una sustancia producida por las bacterias estreptococos del grupo A. La anti-estreptolisina O es el conjunto de anticuerpos específicos frente a la estreptolisina O, una enzima extracelular producido por estreptococos del grupo A de Lancefield b-hemolítico (Streptococcus pyogenes). La anti-estreptolisina puede detectarse desde una semana a un mes después de la infección del estreptococo. Streptococcus pyogenes causa una amplia variedad de infecciones en las vías respiratorias altas tales como la faringitis aguda. Otras manifestaciones de infección por Streptococcus pyogenes incluyen glomerulonefritis, fiebre reumática, endocarditis bacteriana y fiebre escarlata. El Control Positivo (C +) provoca la aparición de una aglutinación visible de las partículas de látex. El Control Negativo (C -) no provoca la aparición de una aglutinación visible de las partículas de látex. 10 3. ¿Qué es la proteína C reactiva y qué sentido tiene el diagnóstico de esta? La proteína C reactiva es producida por el hígado y su nivel se eleva cuando hay inflamación en todo el cuerpo La proteína C-reactiva es un examen general para verificar si hay una inflamación en todo el cuerpo. No es un examen específico; es decir, puede revelar que usted tiene una inflamación en alguna parte del cuerpo, pero no puede señalar la localización exacta. El médico puede ordenar este examen para: • Verificar exacerbaciones de enfermedades inflamatorias como artritis reumatoidea, lupus o vasculitis. • Determinar si un antinflamatorio está funcionando para tratar una enfermedad o afección. 7
  12. 12. El principio del procedimiento presentado involucra una reacción inmunológica entre la Proteína C Reactiva (como antígeno) y el anticuerpo correspondiente adsorbido a las partículas de látex (látex sensibilizado con anti-Proteína “C” Reactiva. Resultado Positivo Presencia de agregados macroscópicos (aglutinación comparable al control positivo). Resultado Negativo Ausencia de agregados macroscópicos (sin aglutinación, comparable al control negativo).8 Un examen positivo significa que la persona tiene inflamación en el cuerpo, lo cual puede deberse a una variedad de afecciones diferentes, incluyendo: • Cáncer • Enfermedad del tejido conectivo • Ataque cardíaco • Infección • Enfermedad intestinal inflamatoria • Lupus • Neumonía neumocócica • Artritis reumatoidea • Fiebre reumática • Tuberculosis 4. ¿Qué tipos de pruebas inmunológicas se utilizan con mayor frecuencia para el diagnóstico de cuadros infecciosos? Las principales pruebas inmunológicas para el diagnóstico de cuadros infecciosos son: • Aglutinación sobre látex. • Coaglutinación sobre S. aureus • Inhibición de hemaglutinación. • Hemaglutinación inmunoadherente. • Doble inmunodifusión • Contrainmunoelectroforesis • Radioinmunoanálisis • Enzimoinmunoensayo VI. CONCLUSIONES. • Las pruebas inmunológicas son importantes para el diagnóstico de enfermedades media la reacción antígeno-anticuerpo. • Los Grupos sanguíneo pueden ser O, A, B, AB., y el factor Rh puede ser + o -. • El test de embarazo sobre la placa (látex monoclonal directo) está basado en la aglutinación rápida de partículas de látex sensibilizadas por anticuerpos monoclonales con la HCG presente en la muestra. • La proteína C-reactiva es un examen general para verificar si hay una inflamación en todo el cuerpo. • ASO: Es un examen de sangre para medir los anticuerpos contra estreptolisina O, una sustancia producida por las bacterias estreptococos del grupo A.
  13. 13. • El factor reumatoide está presente en enfermos con artritis reumatoide, lupus eritematoso generalizado, artritis reumatoide juvenil, Sindrome de Sjogren esclerosis generalizada progresiva, mononucleosis infecciosa y en algunos pacientes con poliomielitis. VII. BIBLIOGRAFÍA. 1. Universidad de Alicante. El grupo sanguíneo [Sede Web]. España: UA; 2006-[acceso el 20 de agosto de 2009]. Disponible en: http://www.semanasalud.ua.es/semana_3/elgrupo.htm 2. García M. Aglutinación [Sede Web]. España: Protales Médicos; 2008-[actualizado el 2 de noviembre de 2008; acceso el 20 de agosto de 2009]. Disponible en: http://www.portalesmedicos.com/diccionario_medico/index.php/Aglutinacion 3. Seguramyes G y Costa D. Enfermaría maternal. España: Elsevier; 2003. 4. Bios Chile Ingeniería Genética SA. Reactivos para Diagnóstico de Enfermedades Infecciosas: Elisa hCG [Sede Web]. Chile: Grupo Rios; 2008-[acceso el 20 de agosto de 2009].Disponible en: http://www.grupobios.cl/2a_4a.html 5. Quesada-Chanto A. Diagnóstico de laboratorio. Costa Rica: Lehman; 2003. 6. Reactivos Bilbao. hCG-Látex [Sede Web]. Francia: Bilbao SA; 2008-[actualizado el 28 de agosto de 2008; acceso el 2º de agosto de 2009] Disponible en: http://www.biolabo.fr/pdfs/noticesSP/SerologieSP/ES%20085100%20HCG %2028%2008%202008.pdf 7. Medline Plus. Proteína C Reactiva [Sede Web]. USA: Medline; 2009-[actualizado el 22 de febrero de 2009; acceso el 20 de agosto de 2009] Disponible en: http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003356.htm 8. LinconLaboratorios. Proteína C Reactiva [Sede Web]. México: Lincon Lab; 2009-[acceso el 20 de agosto de 2009]. Disponible en: http://www.licon.com.mx/insertos/licon/pcr_103.pdf 9. Lab Test Online. Factor Reumatoideo [Sede Web]. España: LabTest; 2009-[actualizado el 27 de marzo de 2009; acceso el 20 de agosto de 2009]. Disponible en: http://www.labtestsonline.es/tests/RheumatoidFactor.html?lnk=2 10. BioSystems. Anti-Estreptolisina[ Sede Web]. España: BioSystems; 2007-[actualizado el 20 de agosto de 2007; acceso el 20 de agosto de 2009]. Disponible en: http://www.biosystems-sa.com/Methods/31019c.pdf

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