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Apareamiento perras
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    Apareamiento perras Apareamiento perras Document Transcript

    • In: Recent Advances in Small Animal Reproduction, P.W. Concannon, G. England, J. Verstegen and C. Linde-Forsberg (Eds.)Publisher: International Veterinary Information Service (www.ivis.org), Ithaca, New York, USA.Determinación del momento de apareamiento óptimo en la perra: consideracionesbásicas (2-Jun-2002)G. England1 and P. W. Concannon21Department of Farm Animal and Equine Medicine and Surgery, Royal Veterinary College, University of London, HatfieldHerts, UK .2Department of Biomedical Sciences, College of Veterinary Medicine, Cornell University, Ithaca, NY, USA.Traducido por: Y. Corrada y C. Gobello, Instituto de Teriogenología, Facultad de Ciencias Veterinarias, UniversidadNacional de La Plata, La Plata, Argentina., (5-Jun-2003).IntroducciónHay una variación considerable en el momento de la ovulación en relación al comienzo del edema vulvar y la descargaserosanguinolenta del proestro temprano. Esto no es entendido a menudo por los criadores de perros e imponen confrecuencia regímenes de apareamientos estándares para sus perras. Estos regímenes implican generalmente un plan paraaparear en un número predeterminado ó definido de días después del comienzo del "sangrado" vulvar, es decir, de la descargaserosanguinolenta. Como resultado de esto, muchas perras se aparean a menudo en un momento inadecuado, y ésto constituyela causa más común de infertilidad aparente en las perras. Sin embargo, a menudo hay una necesidad de programar losmomentos de apareamiento con varios días de anticipación a fin de planificar el traslado de la perra al lugar donde seencuentra el macho reproductor. El manejo del apareamiento como un servicio veterinario a menudo se limita a aconsejarsobre cuándo transportar la perra para aparearla, dadas las restricciones de los horarios personales y posiblemente ladisponibilidad limitada de los machos reproductores elegidos.Hay varios métodos de investigación para identificar el momento de servicio óptimo, incluyendo la medición de lasconcentraciones de hormonas en el plasma, el examen de las células vaginales exfoliadas, y la endoscopía vaginal. La falla enla detección del momento de la ovulación y alcanzar la preñez durante un ciclo ovárico particular puede ser un problemasignificativo en esta especie. Las perras son monoéstricas, y si bien el intervalo interestro promedio es aproximadamente de 7meses (es decir, 31 semanas) puede ser muy variables, extendiéndose en perras con ciclos normales de 4,5 a 13 meses ó más.La literatura sobre la cual se basa esta revisión se enumera en la sección de Referencias [1-11]. Los siguientes tópicos seincluyen en la revisión.Fisiología reproductivaEl período de fertilizaciónEl período fértilEvaluación del momento ótimo de servicioEvaluaciones clínicasFalta de confiabilidad del día predeterminadoComienzo variable y expresión del comportamiento estral (aceptación del macho)Ablandamiento vulvarMedición de LH ó progesterona plasmáticaPruebas de ELISA para medición de progesterona en clínicaCitología vaginalEndoscopía vaginalExamen ovárico por ultrasonidoExamen de la secreción cérvico-vaginalRevisión de la secuencia normal de eventosAdvertencia: estro normal versus estro falsoConclusión
    • Fisiología reproductivaLos oocitos de la perra son ovulados en un estado inmaduro, como oocitos primarios, y no pueden ser fertilizadosinmediatamente. La fertilización puede ocurrir sólo después de la maduración del oocito primario, es decir, extrusión delprimer cuerpo polar y la culminación de la primera división meiótica para formar el oocito secundario. Mientras que estoseventos de maduración ocurren previos a la ovulación en la mayoría de las otras especies, éstos no se completan hasta por lomenos 48 horas después de la ovulación en la perra. Esto también es verdadero en la zorra.La ovulación es causada por un pico de las concentraciones de hormona luteinizante en plasma (LH). En perras, la ovulaciónocurre dos días después del pico de LH, y los oocitos permanecen viables dentro del tracto reproductivo durante cuatro ócinco días más antes de comenzar a experimentar degeneración. Los períodos de comportamiento de proestro y de estro sedefinen basados en la aceptación del macho, y uno le sigue al otro. La transición del comportamiento de proestro al de estropuede ser rápida ó lenta, y puede ocurrir un poco antes, en coincidencia con, ó aún algunos días después del picopreovulatorio de LH.En la figura acompañante (Fig. 1), el comportamiento de proestro y estro (es decir., clínico) se indican como los componentesdel período de "calor". Los períodos individuales de proestro y de estro han sido redefinidos en términos endocrinológicos, esdecir, con el "proestro endocrino" terminando en el momento del pico de LH, y con el "estro endocrino" comenzando cercadel momento del pico de LH (Fig. 1). La transición del comportamiento de proestro al comportamiento de estro ocurregeneralmente en el momento del pico de LH; el tiempo medio es aproximadamente 1 día después del pico de LH, y el rangonormal va desde 3 días antes hasta 5 días después del pico de LH.Figura 1. Representación esquemática del proestro y del estro canino, mostrando los períodos defertilidad, de máxima fertilidad y de fertilización para el servicio natural y su relación con los momentosdel pico preovulatorio de LH, de la ovulación y de la maduración del oocito. - Para ver esta imagen en sutamaño completo, diríjase al sitio www.ivis.org . -Una manera muy útil de ver el ciclo durante el proestro tardío y el estro es considerar el "período de fertilización" y el"período fértil".La fertilización en la perra requiere alguna definición. Aquí, consideramos que la fertilización significa la fusión delpronúcleo masculino (del espermatozoide) con el pronúcleo femenino del oocito secundario maduro para formar el cigote de1 célula. Sin embargo, el espermatozoide puede penetrar el oocito primario inmaduro en cualquier momento luego de laovulación. En estos casos, el curso de tiempo de la formación del pronúcleo masculino no se ha definido bien. Asimismo, enestos casos, el tiempo desde la subsiguiente maduración del oocito (por la extrusión del primer cuerpo polar) hasta laculminación de la meiosis (extrusión del segundo cuerpo polar) y la fusión los pronúcleos no se conoce. Cuando ocurre lamaduración del oocito (2 días después de la ovulación) sin la penetración del espermatozoide, los oocitos permanecen en unsegundo arresto meiótico (metafase II); la culminación de la meiosis y la extrusión del segundo cuerpo polar no se producehasta que ocurre la penetración del espermatozoide, como sucede en otras especies.El Período de fertilizaciónEl período de fertilización en la perra es el momento en el cual los oocitos viables se encuentran disponibles en los oviductosy están suficientemente maduros como oocitos secundarios para ser fertilizados por los espermatozoides. Bajo circunstanciastípicas en la mayoría de las perras se extiende desde cuatro días después del pico preovulatorio de LH hasta cerca de siete díasdespués del pico de LH (es decir, desde dos días después de la ovulación hasta cerca de cinco días después de la ovulación).Como extremo (Fig. 1), se puede extender hasta el día 8 ó 9 (y aún hasta el día 10) después del pico de LH, no obstante confertilidad reducida. La fertilidad generalmente declina muy rápidamente a partir del día 7 después del pico de LH, pues losoocitos experimentan degeneración y la cérvix se cierra en un período de 1 a 2 días. La terminación del período defertilización puede deberse primariamente a la degeneración de los oocitos ó al cierre de la cérvix y la prevención de laentrada de espermatozoides al tracto reproductivo en números suficientes. Ambos fenómenos contribuyen significativamenteal rápido descenso en la fertilidad. Los servicios naturales solo raramente resultan en preñez cuando ocurren en los días 8, 9 y10 después del pico de LH, y lo hacen con muy baja frecuencia, e involucran tamaños reducidos de camada. Pero, en gruposde perras que experimentaron inseminación intrauterina en 8, 9 y 10 días después del pico de LH [11,12], las tasas de preñezfueron más altas (60, 60 y 20% respectivamente), comparadas a los apareamientos naturales en esos días (todos del 0%).Por lo tanto, la optimización de la posibilidad para que una perra quede preñada requiere que sea apareada ó inseminadadurante el período de fertilización en el momento en que este se superpone con el período de máxima fertilidad (Fig. 1),preferiblemente los días 4 a 7 después del pico de LH.
    • El Período fértilEl período fértil es el tiempo durante el cual un servicio ó una inseminación puede dar lugar una preñez. Este período noincluye solamente al período de fertilización, sino también unos pocos días precedentes, debido al hecho de que losespermatozoides caninos pueden permanecer fértiles durante varios días dentro del tracto reproductivo de la hembra. Losespermatozoides pueden sobrevivir en el tracto por hasta 5 ó 6 días antes de la ovulación y tener la oportunidad de penetrar unoocito recientemente ovulado, y entonces formar un pronúcleo masculino viable y dar lugar a la fertilización 7 u 8 díasdespués de la deposición del semen. El período fértil se puede considerar que se extiende desde tres días antes del picopreovulatorio de LH hasta 7 días después del pico preovulatorio de LH, y puede ser incluso más largo cuando se usan perrosreproductores con una calidad de semen excepcional ó perras en las cuales los oocitos pueden sobrevivir uno ó dos días másde lo normal.Es importante destacar que para muchos perros reproductores, sus espermatozoides no pueden sobrevivir más de 1 ó 2 días enel tracto femenino. Los apareamientos tempranos respecto del pico de LH tienen tasas de preñez reducidas, sugiriendo que enla mayoría de los casos los espermatozoides no son capaces de penetrar oocitos después de 2 días en el tracto femenino.La sincronización del período de fertilidad y del período de fertilización se resume en la Tabla 1, abajo.Valoración del momento óptimo de servicioEl período de máxima fertilidad para el servicio natural en animales experimentales altamente fértiles fue determinadoempíricamente, y se extiende desde el día del pico de LH hasta seis días después del pico de LH. Es decir, desde 2 días antesde la ovulación hasta 4 días después de la ovulación. No hubo diferencia en las tasas de preñez ó tamaños de camada seguidosa un solo apareamiento en cualquiera de esos días. Los apareamientos anteriores ó tardíos resultan en bajas tasas de preñez, ylos servicios tardíos cuando son exitosos típicamente resultan en camadas más pequeñas. El momento óptimo para el servicioen una perra individual es temprano en el período de fertilización, en los días 4 a 5 de la LH, ó aún poco más adelante de estemomento, en el día 3 de LH, para permitir la capacitación de los espermatozoides dentro del tracto reproductivo femenino.Cuando los servicios múltiples son posibles, el primero se debe hacer 1 ó 2 días más temprano, para compensar la posibilidadque el momento estimado del pico de LH y ovulación estuviera errado y "tarde". Dos servicios, separados por dos días,pueden compensar un error de dos días en estimar el momento de los eventos. La determinación del momento óptimo paraservicio puede hacerse por determinación del pico de LH, y por métodos de examen clínico directo que puedenrazonablemente estimar el momento de la ovulación ó indicar el comienzo del período fértil ó del período de fertilización.Cuando se contempla el uso de semen criopreservado, la inseminación se debe realizar sólo durante el período defertilización, para aumentar la posibilidad de éxito. Así, si el momento del pico preovulatorio de LH puede estimarserazonablemente, entonces el momento de los servicios ó inseminaciones puede ser optimizado a los períodos siguientes(Tabla 2).Tabla 1. Sincronización de los períodos de fertilidad, de la maduración de los oocitos, y de la fertilización de los oocitos conespermatozoides previamente depositados en relación al día del pico de LH y al día de la ovulación en la perra doméstica.PeríodoDías desde el Picode LHDías desde laOvulaciónPeríodo de fertilidad potencial, el "Período Fertil" -3 a +7 (ó más) -5 a +5 (ó más)Período de fertilidad reducida con apareamientos tempranos -3 a -1 -5 a -3Período de máxima fertilidad dentro del período fértil en perras con alta fertilidad(apareamiento natural)0 a +6 -2 a +4Momento preferido dentro del "Período Fértil" para apareamiento programado porservicio natural ó inseminación artificial con semen fresco+2 a +6 0 a +4Momento de maduración del oocito (estimado) + 4 a +5 +2 a +3El "Período de Fertilización" - período de fertilización potencial de oocitos maduros +4 a +6, ó más +2 a +4, ó másMomento dentro del "Período de Fertilización" para el manejo crítico del servicio óinseminación artificial con semen congelado+ 4 a +6 +2 a +4Período de reducida fertilidad con servicios ó inseminaciones en estro tardío +7 a +9, y más +5 a + 7, y más
    • Estos momentos para el servicio se pueden estimar con base en la evaluación clínica incluyendo la palpación vulvar seriada,la citología vaginal, y la endoscopía vaginal, ó en base a mediciones de los cambios hormonales durante el proestro y el estro,especialmente el ascenso preovulatorio de las concentraciones de progesterona en muestras de suero ó plasma colectadas enforma seriada. El momento exacto de los eventos periovulatorios durante el manejo del servicio también permite ladeterminación exacta de la mejor época para diagnosticar una posible preñez por ultrasonido ó por palpación, y de la fechaprobable de parto de 64 a 66 días después del pico de LH.Valoración clínicaEL uso exitoso de las evaluaciones clínicas en el manejo de servicio requiere de una apreciación de la transición normal desdeel proestro al estro, la mal informada visión del día del ciclo que tienen muchos propietarios y criadores, y los cambiosnormales en el comportamiento sexual. También se necesita una comprensión de las limitaciones así como una buenavaloración de las técnicas disponibles - citología vaginal, grado de turgencia vulvar, y exámenes vaginoscópicos, e incluso deanálisis de progesterona sérica - estimando el día la ovulación y el período subsecuente en el cual la fertilización puedeocurrir. Las características principales en los parámetros de interés, divididas en cuatro momentos seleccionadas en la primeraparte del ciclo se indican en la Tabla 3.(a) típicamente 95 - 100% de cornificación por 2 a 8 días antes del pico de LH(b) Típicamente ninguno, los leucocitos se espera que estén ausentes en los frotis desde 4 - 10 días antes del pico hasta 7 - 10días después del pico de LH.Tabla 2. Días sugeridos del ciclo para inseminación en la perra dependiendo del tipo de manejo de servicio que selleva a caboTipo de Manejo del Servicio Días de Apareamiento ó InseminaciónServicio Natural ó IA con semen fresco3 a 6 días después del pico de LH(es decir, 1 a 4 días después de la ovulación)Semen fresco enfriado4 a 6 después del pico de LH(es decir, 2 a 4 días después de la ovulación)Semen congelado-descongelado5 a 6 después del pico de LH(es decir, 3 a 4 días después de la ovulación)Tabla 3. Estado de varios parámetros clínicos en perras fértiles normales en tiempos seleccionados antes y después del picopreovulatorio de LHParámetroDía 7 antes del picode LHDía del Pico de LHDía 4 - 5 después del picode LH, cuando los oocitosmaduranDías 8 - 11 despuésdel pico de LHIndice de cornificación dela citología vaginal30% al 100% 80% al 100% (a) 80% al 100% (a) 0 al 80%Leucocitos en frotis Pocos Ninguno ó pocos (b) Ninguno ó pocos (b) MuchosTurgencia vulvarIncrementándoseprogresivamenteMáxima ó apenasdisminuyendoEvidentemente disminuidaVulva blanda perotodavía agrandadaPliegues de la mucosavaginalLisa, redondeada,blanca, edematosaBlanca ligero encogimientoy arrugamientoBlancos, notoriamentearrugados y anguladosBlancos y rosados órojos, manchados,casi planosProgesterona sérica < 0.5 ng/ml 0.9 - 3.0 ng/ml 3.5 - 12 ng/ml 8 - 25 ng/mlDescargaserosanguinolenta óeritrocitos en frotis vaginal+ + +/- +/-Estado Reproductivo InfértilComienzo del período demáxima fertilidad, 2 díasantes de la ovulaciónComienzo del período defertilización, 2 - 3 díasdespués de la ovulaciónInfértil ó raramentefértil
    • Falta de confiabilidad en el día predeterminadoMuchos criadores confían en el conteo del número de días desde el inicio del proestro, y creen que las perras ovulan siempreen un número determinado de días desde el inicio de este evento. Este no es el caso, para ninguna raza. La duración delproestro es variable entre perras. Mientras que la "perra media" puede ovular 12 días después del inicio del proestro (y debepor lo tanto ser servida los días 14 y 16), algunas perras ovulan tan temprano como el día 5, y otras tan tarde como el día 30después del inicio del proestro. Por lo tanto, el apareamiento en el 12bo y 14to días, que es lo común en la prácticareproductiva, a menudo no resulta en concepción. El término "calor" no es particularmente útil, pero es utilizado comúnmentepara referirse a los períodos combinados de proestro y estro. El "Día 0" fisiológico y endocrinológico del ciclo es el día delpico preovulatorio de LH, evento que desencadena la ovulación de los folículos ováricos 2 días más tarde. Puede ó nocoincidir cercanamente con una transición distintiva del comportamiento del proestro al estro.Comienzo variable y expresión del comportamiento estral (aceptación del macho)En ciertas especies domésticas el inicio de los signos conductuales de estro se puede utilizar para determinar el momentoóptimo del servicio. En la perra sin embargo hay a menudo una correlación pobre entre los eventos endocrinos y los eventosconductuales. Estudios en perras de laboratorio sugirieron que el inicio del comportamiento de estro ocurrió, en promedio, enel momento del pico de LH en algunos ensayos y al día siguiente del pico de LH en otros. Usando estos datos, 3 ó 4 díasdespués del comienzo del comportamiento de estro podría ser conveniente para aparear a muchas perras. Sin embargo, enmuchas perras los eventos de comportamiento han demostrado correlacionarse pobremente con los eventos hormonalessubyacentes, y este método por lo tanto tiene poco valor, a menos que los servicios se continúen hasta el estro tardío y amenos que haya exámenes para determinar que de hecho la perra no necesita ser apareada con anterioridad a su primeraexhibición de comportamiento completo de estro. Otra complicación es el hecho de que el inicio del comportamiento de estropuede ser rápido y muy obvio, y en otros casos puede ser lento, intermitente, y confuso por varios días. Incluso en perras enlas cuales el momento del inicio del estro parece ser clara y bastante distintiva, esto puede ocurrir tan temprano como 3 díasantes de la ovulación y tan tarde como 5 días después de la ovulación, en el otro extremo, en perras fértiles normales. En unafamilia de Whippets, el comienzo del comportamiento de estro era rutinariamente 1 a 2 días antes del final del período fértil,basado en la citología vaginal y vaginoscopía (F. Lindsay, comunicación personal, 1990). Es también importante considerarque en la preparación para ciertos apareamientos programados, un macho celador a menudo no está fácilmente disponiblepara probar a la perra para el estro. Y, cuando hay uno disponible, la prueba para el estro puede resultar en un servicio nodeseado con el macho incorrecto. Finalmente, las perras pueden ser receptivas a algunos machos y no a otros en el mismomomento durante el estro, y una falla de la perra para "estar parada" ante un macho en particular puede estar relacionada conel macho y no con el estado reproductivo de la perra. Cuando el manejo del servicio se basa solamente en la receptividad de laperra, ella debe ser apareada desde el día más temprano posible (para cubrir la posibilidad que el inicio del estro sea tardío enrelación a la ovulación) y cada dos días hasta 3 apareamientos consecutivos (para cubrir la posibilidad que el inicio del estrosea temprano en relación a la ovulación).Ablandamiento vulvarUn asesoramiento clínico que puede ser útil en el monitoreo de la perra es el momento del ablandamiento vulvar. Durante elproestro el tracto reproductivo se pone edematoso y la vulva y los tejidos perineales se agrandan y se ponen cada vez másturgentes en respuesta al aumento de los estrógenos (Fig. 2 y Fig. 3). En el momento del pico de LH hay un cambio en elestrógeno sérico desde muy altas concentraciones a concentraciones progresivamente bajas, combinadas con el ascensoconcomitante de las concentraciones de progesterona. Con este cambio hormonal hay una reducción en el edema del tractoreproductivo con la consecuencia del ablandamiento distintivo de la vulva. Esto puede ser monitoreado por la valoraciónsubjetiva del grado de turgencia vulvar una vez ó dos veces al día por la palpación delicada de la vulva y del perineo.Figura 2. Fotografía de una perra en proestro que muestra agrandamiento edematoso del perineo y de lavulva. La descarga vaginal de fluido serosanguinolento que contiene células sanguíneas de origen uterinono es evidente externamente, debido al lamido fastidioso de la vulva por la perra, pero es evidente en lainspección del vestíbulo. - Para ver esta imagen en su tamaño completo, diríjase al sitio www.ivis.org . -Figura 3. Fotografía de una perra en proestro que muestra agrandamiento edematoso del perineo y de lavulva. La descarga vaginal de fluido serosanguinolento conteniendo células sanguíneas de origen uterinoes visible en la superficie ventro-caudal del labio vulvar. - Para ver esta imagen en su tamaño completo,diríjase al sitio www.ivis.org . -
    • En casos donde solamente es posible el asesoramiento clínico para la determinación del momento óptimo para aparear, sepuede utilizar una combinación del inicio del comportamiento de estro y el momento del ablandamiento vulvar. Cada uno deestos eventos ocurre en promedio 1 ó 2 días antes de la ovulación. Por lo tanto los servicios deben planearse para comenzaraproximadamente al día siguiente para servicio natural ó con semen fresco, y en tres a cuatro días después de su detección sise usa semen enfriado ó si el número de los servicios que se proporcionarán es limitado. Donde los servicios pueden serrepetidos, se puede continuar día por medio hasta que la apariencia de la superficie de la mucosa vaginal y/o el frotis vaginalno sea más del estro-típico (véanse las secciones debajo de y Citología Vaginal).Medición de concentraciones de progesterona ó LH en plasma ó en sueroAnálisis de LH - La medición de la concentración de LH en plasma periférico es un método confiable y exacto paradeterminar el momento óptimo del servicio. En la mayoría de los países no hay análisis comercial fácilmente disponible paraLH sérica canina, y la medición requiere actualmente de un radioinmunoensayo. Este método consume tiempo, es costoso yfrecuentemente hay un retraso en la obtención de los resultados, porque las muestras son procesadas en tandas en los serviciosde laboratorio. Si se mide la concentración de LH, los apareamientos críticos ó inseminaciones se pueden planear entre cuatroy seis días después del pico de LH. Por lo menos un kit de análisis de ELISA para medir LH en suero canino esta disponiblecomercialmente para detectar el momento de ovulación (Status-LH, Synbiotics), según lo revisado por Root-Kustritz (2001),y se ha utilizado con éxito. Una preocupación es que debe ser utilizada diariamente para detectar el día del pico de LH.Progesterona plasmática y ensayos de progesterona - En la perra hay una luteinización preovulatoria significativa durante ydespués del pico de LH tal como ocurre en muchas especies de roedores y en primates. La concentración de progesteronaplasmática comienza a incrementarse rápidamente desde el valor basal aproximadamente 2 días antes de la ovulación, duranteel pico de LH (Fig. 1). Este rápido incremento es distintivo y detectable, mientras que el ascenso muy lento y pequeño enprogesterona que se informa que ocurre en la semana previa es más sutil y típicamente cerca ó debajo del límite de detecciónpara la mayoría de los ensayos. El monitoreo seriado de las concentraciones de progesterona plasmática por lo tanto permitela anticipación de la ovulación en aproximadamente 1 a 2 días, y si es continuada permite la confirmación de la ovulación y ladetección del período de fertilización. Puesto que el ascenso inicial de la progesterona es progresivo, es solamente necesariocolectar muestras sanguíneas cada segundo ó aún tercer día, a diferencia del régimen diario requerido para detectar el pico deLH. Sin embargo, cuanto menos frecuente es la medición, menos exacta la valoración del momento del pico de LH,ovulación, e inicio y terminación del período de fertilización. Los ensayos diarios pueden determinar el día de la ovulacióndentro de 1 ó 2 días en la mayoría de los casos, y se deben utilizar para los apareamientos y las inseminaciones muy críticos.Asumiendo que ocurrirán los servicios dos veces, en dos días seguidos ó 2 días separados, se puede establecer los serviciosplanificados basados en las consideraciones siguientes. Los servicios ó las inseminaciones críticas se deben planear entrecuatro y seis días después de que la concentración de progesterona del plasma excede, ó probablemente exceda, 2,0 ng/ml(6,5 nmol/L) - concentración observada típicamente al momento del pico de LH ó en el día siguiente. Algunos informessugieren que los servicios deben comenzar preferiblemente un día después de que los valores excedan 8 a 10 ng/ml (25,0 a32,0 nmol/L), que se ven típicamente al principio del período de fertilización. La progesterona se puede medir lo másexactamente posible por radioinmunoensayo (RIA), ensayo cuantitativo inmunoabsorbente enzima-ligado (ELISA), ó ensayoinmuno-quimioluminiscente. Muchos laboratorios de diagnóstico veterinarios tienen un tiempo de procesamiento de 1 díapara estos análisis exactos. El RIA de LH en muestras séricas diarias puede establecer claramente el día del pico de LH en lamayoría de las perras, y ser exacto en 1 día sobre el 90% de casos. Varios kits semi-cuantitativos de ensayos de ELISA paraprogesterona están comercialmente disponibles para el uso en la clínica, y pueden identificar exactamente el día del pico deLH en el plazo de 1 ó 2 días en la mayoría de los casos.Kits de ELISA para medición de progesterona para uso en clínicaEstos kits permiten que las concentraciones de progesterona sean determinadas cualitativamente (usando métodos demicropocillos ó microtazas) ó semi-cuantitativamente. Los resultados se obtenienen generalmente en el plazo de 45 a 60minutos de la colección de la muestra. La medición de la progesterona del plasma usando ELISAs ha tenido una ampliaaceptación clínica y ha producido un incremento significativo de la tasa de preñez. Estos deben ser utilizados seguiendo lasrecomendaciones de los fabricantes.Varios kits comerciales de progesterona para uso en clínica para determinación del momento de ovulación en perras hanestado disponibles en años recientes, e incluyen los siguientes. La mayoría son modificaciones de los kits fabricados para losensayos de progesterona en la leche usados en la industria lechera.- Premate (Vetoquinol, Europa; Camelot Farms, College Station Texas, USA);- K9-Proges-Check (Endocrine Technologies, Inc., Newark CA, USA);- Status-Pro (Synbiotics, San Diego, CA USA);
    • - Target Canine Ovulation Test Kit (Biometallics, Princeton, NJ, USA).Se describen en otra parte los detalles sobre el uso de tales ensayos (Root-Kustritz, 2001).Citología vaginalLa colección seriada, tinción y examen microscópico de las células exfoliadas del epitelio vaginal es un método simple paramonitorear la etapa del ciclo estral. Las células vaginales se pueden colectar usando un hisopo de algodón humedecido consolución salina deslizado suavemente sobre la superficie de la mucosa vaginal, ó por la aspiración de la cavidad vaginalusando un catéter plástico. Al usar el método anterior es importante no permitir el contacto del hisopo con el vestíbulo, puestoque la colección de estas células puede dar resultados variables sino erróneos. Los hisopos se deben introducir utilizando unpequeño espéculo ó protector [3]. Una vez colectadas, las células son puestas sobre un portaobjetos de vidrio haciendo girarligeramente el hisopo de algodón, ó por aplicación del líquido aspirado que entonces se esparce en una película fina.El frotis puede ser teñido usando una tinción modificada simple de Wrights-Giemsa stain, (Harleco´s Diff Quik, EM Science,Gibbstown, NJ, USA; Merck, Darmstadt, Europa) ó una tinción tricrómica. La tinción modificada de Wright es fácilmentedisponible y tiene la ventaja que la preparación de las muestras requiere menos de un minuto (Fig. 4a). La tinción tricrómicatiene la ventaja de la identificación de las células queratinizadas basadas en un índice eosinófilo, pero la técnica de tinción eslaboriosa (Fig. 4b).Figura 4a. Transferencia del material del hisopado vaginal al portaobjetos en preparación para la tinciónde la citología vaginal con un conjunto de tinción para hematología de Wright Giemsa modificada(Harleco Dif-Quik). La secuencia incluye 5 a 10 inmersiones de un segundo cada una, en fijador,colorante naranja, colorante azul y aclaración en agua. - Para ver esta imagen en su tamaño completo,diríjase al sitio www.ivis.org . -Figura 4b. Microfotografía en menor aumento de frotis vaginales obtenidos en proestro tardío ó estrotemprano, teñidos con la coloración de hematología de Wright Giemsa modificada (izquierda) ó con unatinción tricrómica (derecha). La coloración roja de las células teñidas con coloración tricrómica indicaque todas estas células se encuentran cornificadas, teniendo un índice eosinófilo de 100%. - Para ver estaimagen en su tamaño completo, diríjase al sitio www.ivis.org . -Durante el proestro, las concentraciones periféricas de estrógeno plasmático se incrementan y causan el engrosamiento de lamucosa vaginal, y un aumento en el número de capas celulares. La mucosa cambia de un epitelio bajo, cuboidal a un epitelioestratificado, queratinizado escamoso. Durante esta transición, las células superficiales cambian de forma, tamaño ycaracteres de tinción, llegando a ser más grandes, de forma irregular, y células (escamosas) nucleadas planas ("célulasintermedias"), y en última instancia llegan a ser células escamosas anucleadas cornificadas ("células superficiales") [3]. Lasúltimas se caracterizan por no tener ningún núcleo visible, ó un remanente nuclear picnótico débil y/o pequeño. Lasproporciones relativas de los diversos tipos de células epiteliales recogidos de la superficie y vistos en frotis vaginales duranteel proestro se pueden utilizar como marcadores de los cambios en el ambiente endocrino, es decir, concentraciones crecientesde estrógenos (Fig. 5). Se han utilizado varios índices de cornificación y de queratinización; en general, el período fértil puedeser crudamente predecido calculando el porcentaje de células epiteliales que corresponde a células superficiales (con losnúcleos ausentes, tenues ó picnóticos) al usar tanto la tinción modificada de Wright-Giemsa como la Diff-Quik. El servicio sedebe procurar realizarlo durante el período en que más del 80% de las células epiteliales son células "superficiales" pues éstees típicamente coincidente con el período fértil. Sin embargo, hay gran variación, y el porcentaje de las células cornificadaspuede sobrepasar el 80 a 90% y alcanzar casi el 100% (Fig. 6a y Fig. 6b) tan temprano como 9 días antes de la ovulación ótan tarde como 2 días después de la ovulación [4]. Por lo tanto, los cambios en la citología vaginal no se pueden utilizar parapredecir prospectivamente el momento exacto de la ovulación. Sin embargo, la citología vaginal permite la supervisión de laprogresión normal del proestro, y esperar el valor de cornificación del 80% permite evitar pruebas innecesarias, el transporteó apareamientos hasta que el pico de estrógenos del proestro sea casi completo.Figura 5. Microfotografía de un frotis vaginal recogido durante el proestro, mostrando un númerocreciente de células epiteliales incluyendo células intermedias pequeñas, intermedias grandes ysuperficiales. Hay algunos eritrocitos, que se presentan por diapédesis uterina estrógeno-dependiente ydescargan en la vagina. No hay leucocitos porque los estrógenos han estimulado suficiente hiperplasiaepitelial vaginal como para prevenir la migración natural de los leucocitos a través de la mucosa vaginal,lo que es visto normalmente en anestro, proestro temprano y metaestro. Coloración: tinción para hematología de Dif-Quik. -
    • Para ver esta imagen en su tamaño completo, diríjase al sitio www.ivis.org . -Figura 6a. Microfotografía de un frotis vaginal recogido durante el estro temprano, conteniendo unnúmero incrementado de células epiteliales, que son células "superficiales" con ningún núcleo, núcleostenues, ó núcleos densos pero picnóticos y pequeños. Hay numerosos eritrocitos, que se presentan pordiapédesis uterina estrógeno-dependiente de larga duración y que descargan en la vagina. - Para ver estaimagen en su tamaño completo, diríjase al sitio www.ivis.org . -Figura 6b. Microfotografía de un frotis vaginal colectado durante el estro temprano, conteniendosolamente células epiteliales superficiales cornificadas y algunas bacterias. Tales bacterias se consideranflora normal de la vagina cuando se observadan en número pequeño a moderado. - Para ver esta imagenen su tamaño completo, diríjase al sitio www.ivis.org . -La citología vaginal se debe supervisar durante y después del período de cornificación máxima, y después de servicios ó deinseminaciones, como la manera de estimar retrospectivamente el momento de servicio en lo referente a la época de laovulación y del período de fertilización, según lo explicado abajo.En el final del período de fertilización, los estrógenos del plasma han descendido a niveles bajos en la semana previa, y lasconcentraciones de progesterona del plasma continúan aumentando a altos valores. Como resultado mucho del epiteliovaginal se descama y se pierde. El número de capas celulares disminuye, se desprenden células más profundas y el porcentajede células grandes, irregulares y cornificadas y enucleadas decrece. Los leucocitos polimorfonucleares están ausentes en elfrotis vaginal durante el período fértil porque la mucosa engrosada es una barrera para su migración a la superficie. Estasreaparecen, a menudo en números grandes, en el final del período de la fertilización debido a la descamación de la mucosapues las concentraciones de la progesterona del plasma son altas y las de estrógeno son reducidas (Fig. 7). En este tiempo, elfrotis vaginal muestra un aumento en las células epiteliales intermedias pequeñas y grandes, células parabasales, y leucocitospolimorfonucleares. Este momento se ha referido como el "fin del estro vaginal", "inicio del metastro vaginal", ó "inicio deldiestro" [3]. El servicio natural ó la inseminación vaginal es raramente fértil cuando se realiza después de que una perraalcanzó esta etapa, típicamente en 7 - 8 días después del pico de LH (y 5 - 8 días después de la ovulación). Sin embargo se hainformado que tales apareamientos tardíos han reportado que pueden dar lugar a preñeces y a camadas pequeñas en algunoscasos. El conteo hacia atrás del final del estro vaginal a los días del servicio ó de inseminación puede servir para estimarretrospectivamente si ocurrieron ó no durante el período de fertilización. Idealmente, las inseminaciones tendrían que haberocurrido 2 a 4 días antes del final del estro vaginal. En un estudio el mayor éxito de la IA con semen congelado fue cuando lainseminación se realizó 3 días antes del inicio del metaestro, es decir, en el diestro. El índice de células superficiales con losnúcleos tenues ó picnóticos declina drásticamente durante los varios días siguientes, y las células parabasales se convierten enla célula epitelial predominante (Fig. 8). El frotis entonces progresivamente cambia rápidamente para convertirse en un frotisde una perra en anestro.Figura 7. Microfotografía de un frotis vaginal colectado 8 - 9 días después del pico de LH, después delfinal del estro vaginal, y en el comienzo del metaestro vaginal (diestro). El frotis contiene un grannúmero de distintos tipos de células epiteliales involucra una disminución precipitada del porcentaje decélulas superficiales cornificadas, y un aumento en el porcentaje de células parabasales e intermedias. Enesta vista, hay sobre todo células superficiales, algunas superficiales grandes, y lo que parece ser unacélula parabasal oval ó una intermedia pequeña. Obsérvese la gran afluencia de leucocitos, que es característica pero nopatognomónica. Esto ocurre debido al adelgazamiento de áreas de la mucosa vaginal asociado a la descamación del epiteliocornificado en este momento. - Para ver esta imagen en su tamaño completo, diríjase al sitio www.ivis.org . -Figura 8. Frotis vaginal obtenido de una perra 4 días después del inicio del metaestro. Esta vista muestracélulas parabasales y leucocitos (incluyendo leucocitos intactos, remanentes nucleares, y estrias deremanente nucleares). - Para ver esta imagen en su tamaño completo, diríjase al sitio www.ivis.org . -La citología vaginal es claramente una técnica fácil y útil, aunque en casos raros los leucocitos polimorfonucleares se puedenencontrar a través del período fértil y se ha reportado en algunos casos valores máximos alcanzados de solamente 60% decélulas anucleares. En los últimos casos, es importante reconocer cuando está ocurriendo la cornificación máxima, aunquetodas las células exfoliadas no sean anucleares.
    • Endoscopía vaginalLa endoscopía vaginal (vaginoscopía) es el examen de la superficie de la mucosa vaginal, usando generalmente unendoscopio rígido de fibra óptica (Fig. 9). Los endoscopios flexibles también se pueden utilizar. La vaginoscopía se puedetambién realizar por la visualización directa sin la amplificación, usando un proctoscopio pediátrico humano, rígido. Elprocedimiento se tolera bien en la perra parada no sedada. El examen puede tomar tan poco como 2 minutos, y conexperiencia la información valiosa se puede recoger rápidamente y con costo mínimo. El asesoramiento vaginoscópico para elmanejo del servicio se basa en la observación de los contornos y de los perfiles de la mucosa, el color de la mucosa y decualquier fluido presente, y los cambios en éstos durante el proestro y el estro. Durante el anestro la mucosa vaginal esrelativamente plana, seca y roja en apariencia [4]. Esto representa una mucosa muy delgada, frágil y friable, y fácilmentetraumatizable por la manipulación ó la instrumentación.Figura 9. Equipo de vaginoscopía canina incluyendo una fuente de luz y un cable de fibras ópticas, untelescopio de 3 mm de diámetro, una selección de fundas histeroscópicas de 5 y 6 mm, y un bulbo degoma para insuflación con aire. También se muestran algo del equipo usado para las inseminacionesintrauterinas, incluyendo catéteres de metal con las vainas plásticas, y un catéter flexible que se puedeintroducir a través del histeroscopio. - Para ver esta imagen en su tamaño completo, diríjase al sitiowww.ivis.org . -En el comienzo del proestro los pliegues de la mucosa aumentan mucho, son edematosos, y color rosa ó rosa/blanco, conlíquido serosanguinolento en los surcos formados por lo pliegues. Estos cambios son debidos al engrosamiento del epitelio dela mucosa, y a la acumulación de edema dentro de la submucosa, efectos producidos por las concentraciones crecientes deestrógenos en este momento (Fig. 10). El fluido serosanguinolento es de origen uterino y escapa a través de la cervix. Lasuperficie de la mucosa se hace progresivamente menos rosada y típicamente color blanco ó blanco-crema, porque elengrosamiento de la mucosa oculta de la vista los capilares subyacentes que habían sido visibles durante el anestro y elproestro temprano. En proestro muy tardío ó estro temprano, en aproximadamente el mismo momento del pico de LH,comienza una progresiva contracción de los pliegues que se acopaña de palidez. Estos efectos son el resultado de un retiroabrupto del efecto edematoso de "retención de agua" de los estrógenos. Las concentraciones de estrógenos desciendenrápidamente durante y después del pico de LH. Posteriormente, durante los días siguientes, ocurre el encogimiento de lamucosa que causa su arrugamiento leve y después marcado de los pliegues de la mucosa que para el día 3 ó 4 después delpico LH se vuelve distintivamente angulada mientras que conserva un color crema denso a blanco (Fig. 11). El arrugamientotambién se ha referido como crenulación de los pliegues de la mucosa [4].Figura 10. Vista cercana a de unos escasos centímetros cuadrados de mucosa vaginal canina obtenidodurante el proestro usando un endoscopio de fibra óptica. La hiperplasia inducida por los estrógenos hanengrosado la mucosa suficientemente para dar a la superficie un aspecto color crema debido a laobliteración de los capilares visibles. El edema inducido por los estrógenos ha expandido "los pliegues"de la mucosa vaginal para darle un aspecto edematoso redondeado, liso. El fluido serosanguinolento delútero descargado en la vagina se ubica en los surcos ó las grietas entre los dobleces epiteliales. - Para veresta imagen en su tamaño completo, diríjase al sitio www.ivis.org . -Figura 11. Vista cercana de unos escasos centímetros cuadrados de la mucosa vaginal canina obtenidacon un endoscopio de fibra óptica durante el estro, cerca de 1 a 2 días después de la ovulación (es decir,cerca de 3 a 4 días después del pico de LH). La hiperplasia inducida por los estrógenos ha engrosado lamucosa suficientemente para dar a la superficie un aspecto blanco debido a la obliteración de capilaresvisibles. La declinación reciente de los estrógenos ha reducido el edema de los "pliegues" de la mucosavaginal para causar un arrugamiento obvio y marcado de la superficie. - Para ver esta imagen en sutamaño completo, diríjase al sitio www.ivis.org . -El comienzo del pico de período fértil puede ser detectado por el inicio de la contracción de la mucosa sin formas angularesexcesivas, mientras que la contracción notoria de la totalidad de pliegues de la mucosa con obvia angulación es característicadel período de fertilización. Los apareamientos ó las inseminaciones se deben planear para que coincidan con el período defertilización, cerca de cuatro días después de la primera detección de la contracción de la mucosa, y en el inicio del período deangulación obvia de los pliegues de la mucosa. La terminación del período de la fertilización puede ser detectada observandouna declinación ó una cesación de la contracción de la mucosa, un aplanamiento y adelgazamiento de la mucosa y,relacionado con desprendimiento de muchas de las capas superficiales de células epiteliales, del desarrollo de una superficiemucosa que se ha descrito como manchada ó jaspeada [4]. Algunas áreas son blancas y aún gruesas, mientras que otras áreas
    • llegan a ser rojizas y algo finas (Fig. 12). Esto ocurre simultáneamente con el inicio del metaestro ó del diestro vaginal, segúnlo definido por citología vaginal.Figura 12. Vista cercana de unos escasos centímetros cuadrados de la mucosa vaginal canina obtenidacon un endoscopio de fibra óptica durante el metaestro temprano, cerca de 9 días después del pico de LH.El descenso continuo de los estrógenos que comienza 0 a 2 días antes del pico de LH ha dado lugar a unadelgazamiento de la mucosa tal que las áreas de descamación epitelial muestran parches rojos de"visibilidad capilar" entremezclados con áreas blancas de mucosa moderadamente engrosada. Estosparches de mucosa fina son la base de la reaparición simultánea de los leucocitos en el frotis vaginal. -Para ver esta imagen en su tamaño completo, diríjase al sitio www.ivis.org . -Vaginoscópicamente los cambios observados en la mucosa son de utilidad en la práctica clínica porque son progresivos, y porlo tanto no se hace necesario examinar la perra todos los días.Examen ovárico por ultrasonidoSe ha demostrado claramente que los ovarios de una perra se pueden identificar usando diagnóstico por ultrasonido en tiemporeal en modo B. Con el examen cuidadoso y repetido es posible supervisar el crecimiento folicular y detectar el momento dela ovulación. En general sin embargo, la ovulación es difícil de identificar porque los folículos no colapsan, los cambios deecogenicidad no son siempre constantes, y los cuerpos lúteos nuevos tienen también unas cavidades centrales llenas de fluidosimilares a las de los folículos. En los ultrasonogramas, los folículos antrales ováricos aparecen como esferas negras,anecoicas que aumentan de tamaño durante el proestro [1]. Tienen cerca de 2 - 3 mm de diámetro en el principio y a la mitaddel proestro, cerca de 5 mm de diámetro en el proestro tardío, y alcanzan el tamaño máximo de 7 a 10 mm entre el día delpico de LH y el día de la ovulación (Fig. 13). Para estudios experimentales de reproducción canina, el momento de laovulación se puede determinar durante exámenes sonográficos diarios por la detección de una disminución aparente delnúmero de folículos anecoicos grandes, ó su desaparición completa, debido a un aumento en la ecogenicidad y/o unadisminución evidente relacionada al tamaño del folículo (Fig. 14). Esta disminución ó ausencia de estructuras anecoicas en elovario persiste por 1 a 3 días alrededor del momento de la ovulación [1]. Esto es seguido a menudo por la reaparición deestructuras anecoicas en los ovarios. Éstos son los cuerpos lúteos tempranos en desarrollo que contienen fluido central porvarios días a 2 semanas. Sin embargo, la técnica parece tener poca aplicación clínica actualmente.Figura 13. Ultrasonograma trans-abdominal de una perra que muestra un ovario con tres folículosanecoicos, grandes 1 día antes de la ovulación. Las flechas blancas indican el folículo de 6 mm dediámetro a la izquierda. - Para ver esta imagen en su tamaño completo, diríjase al sitio www.ivis.org . -Figura 14. Ultrasonograma trans-abdominal de una perra que muestra un ovario 1 día después de laovulación, sin la evidencia de estructuras anecoicas esféricas distintivas presentes 1 a 2 días antes. - Paraver esta imagen en su tamaño completo, diríjase al sitio www.ivis.org . -Examen de la secreción cervico-vaginalEn un número pequeño de perras se ha demostrado que la resistencia eléctrica de las secreciones vaginales, según lo medidopor una prueba comercial de resistencia vaginal, aumenta durante el proestro y el estro temprano, y disminuye durantemediados a fines del estro. Estos cambios pueden por lo tanto ser útiles para indicar el período fértil. La técnica se hainvestigado pobremente en la perra doméstica, aunque se utiliza extensamente para detectar la época óptima de inseminaciónen la zorra.Algunos investigadores han examinado cambios en la concentración de glucosa de la descarga vaginal de la perra, y estemétodo es utilizado a veces por los criadores de perros para la predicción del momento del servicio. Sin embargo la técnica noestá amparada por investigación científica, y parece ser casi inútil.La cristalización ó la formación de helechos del moco recogido de la vagina anterior y su observación microscópica han sidodescritas en la perra y ocurre después del pico en la concentración de estrógenos del plasma [6]. La evaluación del moco, quese origina del tejido glandular cervical, puede ser útil conjuntamente con la citología vaginal para determinar el momentoóptimo del servicio [6].
    • Revisión de la secuencia normal de eventosLa Tabla 4 enlsita varios de los acontecimientos que se pueden identificar por exámenes clínicos en un cierto plazo y surelación al período fértil, a la ovulación y al período de fertilización.Tabla 4. Secuencia típica de eventos durante el proestro y estro canino, incluyendo los períodos de fertilidad paraservicio natural, y reconociendo la considerable variación en el momento del comienzo del comportamiento del estro.Cambios en el estado clínico, fisiológico ó fertilidadDía desde el pico deLHComienzo de las concentraciones de estrógenos séricos incrementadas Día -40 a -6Comienzo de signos obvios de proestro (agrandamiento vulvar, descarga serosanguinolenta) Día -28 a -3Incremento de hiperplasia vaginal, cornificación y edemaIncremento del agrandamiento y turgencia vulvar observadaIndice de cornificación máximo observado en frotis vaginal Día -10 a -3Máxima hiperplasia vaginal y cornificación observada Día -3 a 0Máxima concentración de estrógeno sérico y turgencia vulvar Día -3 a -1Comienzo de fertilidad potencial y del "período fértil" Día -3Disminución del estrógeno sérico Día -2 a 0Ocurre el mayor componente del pico de LH.La progesterona del suero ó plasma se incrementa de 0.9 a 3 ng/ml.Comienzo del período de "máxima fertilidad" para servicio natural en perras de alta fertilidadDía 0Disminución de la turgencia vulvar puede ser detectada.Disminución del edema vaginal y comienzo del arrugamiento vulvar.Día 0 a 1Comienzo del comportamiento de estro (variable, rango de Día –3 a +7)Día 0 a 1 en promedio, y en muchas perrasVariableOcurre ovulación/es.La progesterona se incrementa de 2 a 8 ng/mlDía 2Mayor disminución del edema vaginal, incrementado arrugamiento vaginal Día 3 a 6Maduración de los oocitos en el oviducto Día 4 a 5Comienzo del período de fertilización Día 4 a 5Máximo arrugamiento vaginal y angulación de los pliegues vaginales Día 3 - 5Máxima descamación de las células epiteliales cornificadas de la mucosa vaginal Día 4 a 6Alisamiento de los pliegues de mucosa vaginal Día 5 a 6Progesterona aumentada de 8 - 20 ng/ml Día 6Fin del período de "máxima fertilidad" Día 6Indice de cornificación disminuido, apariencia parcheada y desnuda de la mucosa vaginal, primerovisto en muchas perrasDía 7 a 10Fin del período de fertilización y período de fertilidad Día 7 a 10Afluencia de leucocitos en la vagina y reaparición en frotis vaginales Día 7 a 10Fin del "estro vaginal ó citológico", primer día del metaestro/diestro Día 7 a 10Cese de la descarga serosanguinolenta (muy variable) VariableTerminación del comportamiento de estro (aproximadamente el día 9 en promedio) Variable
    • Advertencia: estro normal versus estro falsoSegún lo repasado arriba, el manejo del servicio y los esfuerzos para estimar el momento de la ovulación típicamente implica:1. El examen de frotis vaginales colectados cada 1 a 3 días para monitorear el grado, porcentaje ó índice de cornificaciónde las células del epitelio vaginal, y la presencia versus ausencia de leucocitos en el frotis.2. La caracterización del grado de edema y turgencia vulvar inducida por estrógenos, y el momento de la disminución dela turgencia asociado con la disminución periovulatoria de los estrógenos;3. En lo posible, las evaluaciones vaginoscópicas del edema y la hipertrofia causados por el ascenso de los estrógenos, yel momento y extensión del subsecuente arrugamiento y contracción de la mucosa vaginal causado por la declinaciónde los estrógenos poco antes y después de la ovulación; y,4. Una consideración de los cambios normalmente previstos en el comportamiento sexual de las perras, incluyendo elmomento y el grado de receptividad sexual durante el período periovulatorio normal.5. En lo posible, la medición de las concentraciones de la progesterona del suero ó plasma, y estimación del día del picode LH como el momento en que la progesterona primero excedió muy probablemente 1 a 2 ng/ml.Sin embargo, es importante apreciar que todos los cambios físicos, clínicos y de comportamiento esperados en ciclosovulatorios normales se pueden observar en las perras que experimentan un "estro falso", es decir, una falla para tener el picode LH y así una falla para ovular seguidamente a la máxima concentración de estrógenos en el final del proestro. Esto pasaporque todo el cambio normal en los órganos genitales, vagina y el comportamiento reflejan principalmente el ascenso ydescenso normal de los estrógenos. En el "estro falso" el inicio del comportamiento del estro puede ser lento e intermitenteporque no hay un ascenso concomitante de la progesterona para facilitar el comportamiento del estro pero, no obstante, lareceptividad sexual puede ser casi normal después de que las concentraciones de estrógenos experimenten un descensoespontáneo por varios días durante la atresia de los folículos no ovulados. La única manera de distinguir el estro falso de unciclo normal es determinando si hay ó no un aumento normal de la progesterona después de la ovulación. Y no es tan sencillocomo se puede esperar. A menudo no hay aumento de la progesterona. Pero a veces, estos casos de "estro falso" exhiben unascenso transitorio casi normal de la progesterona por 1 a 2 días. Esto es seguido por una disminución de la progesterona envez del aumento normal y continuo hasta a los máximos niveles en un período de alrededor de 2 a 3 semanas. Así, elmonitoreo de la progesterona hasta que las concentraciones alcancen 10 ng/ml ó más deben ser considerado. Si tal aumento enla progesterona es abortado espontáneamente, u ocurre en respuesta a una liberación de LH en cantidades inadecuadas paracausar la ovulación, no se conoce. Alternativamente, la perra debe ser examinada para los niveles normalmente elevados deprogesterona en el momento de diagnosticar la preñez a las 3 - 4 semanas después del servicio en los casos donde la perra nopuede estar presente. El estro falso es seguido a menudo por un retorno al proestro en el plazo de 1 a 10 semanas.ConclusiónLa mayoría de las perras presentadas para la investigación de la fertilidad y el manejo del servicio son animales normales,sanos, fértiles cuya infertilidad aparente se relaciona con un desconocimiento de la fisiología reproductiva de la perra.Muchas perras se aparean en momentos inadecuados. El monitoreo exacto de cada perra durante cada ciclo estral permite laestimación del momento adecuado para el servicio ó la inseminación. En la perra, los oocitos maduran 2 a 3 días después dela ovulación, y así 4 a 5 días después del pico de LH. El o los servicios se deben planear para que ocurran durante el "períodofértil", de 0 a 6 días después del pico de LH, ó preferiblemente en el "período de fertilización" (4 a 6 días después del pico deLH). Estos períodos se pueden detectar fácilmente con exactitud considerable usando la medición de la progesterona en elplasma, asesoramiento por citología vaginal y turgencia vulvar, ó endoscopía vaginal. Idealmente, todos estos métodos seutilizan conjuntamente uno con otro. En la mayoría de las perras, es suficiente comenzar a monitorear a partir deaproximadamente 7 días después del inicio del proestro, si éste se detectó suficientemente temprano en su curso. Sinembargo, algunos dueños pueden no notar signos de proestro hasta bastante tarde en el proestro y cerca del momento de laovulación, y la educación del dueño sobre qué esperar y buscar puede ser importantes antes del comienzo inminente del ciclo.Así, el monitoreo temprano para la aparición de un índice de cornificación del 80% en el frotis vaginal puede evitar perder elperíodo fértil en las perras que se presentan tarde en el curso del proestro a la primer consulta. Después de esta estrategia paraprogramar apareamientos naturales ó inseminaciones con semen fresco durante el "período fértil", preferiblemente dos vecesImplantación Día 21 a 22Ultrasonido para preñez a través de latidos cardíacos fetales Día 25 a 28Parto Día 64 a 66
    • entre 2 y 6 días después del pico de LH, dará lugar a un aumento significativo en la tasa de preñez y tamaño de camada.Cuando es necesario utilizar semen de una calidad subóptima, por ejemplo donde hay un factor de infertilidad del macho, ócuando el semen ha sido criopreservado, es esencial que el apareamiento ó la inseminación ocurra durante el "período defertilización", preferiblemente 5 - 6 días después del pico de LH. La preñez rara vez ocurre después de los apareamientos ó lasinseminaciones vaginales que ocurren después del final del estro citológico, aunque la inseminación intrauterina ha tenidocierto éxito durante los primeros 2 ó 3 días del metaestro, es decir, en el diestro.El momento exacto de los acontecimientos periovulatorios durante el manejo del servicio también permite la determinaciónexacta del mejor momento para diagnosticar preñez y puede permitir la predicción exacta del día de parto que ocurre 64 a 66días después del pico de LH.Bibliografía1. Yeager AE and Concannon PW. Ovaries. In: Green RW, ed. Small Animal Ultrasound. Philadelphia: Lippincott-Raven,1996; 293-303.2. Concannon PW and Lein DH. Hormonal and clinical correlates of ovarian cycles, ovulation, pseudopregnancy andpregnancy in dogs. In: Kirk RW, ed. Current Veterinary Therapy, Small Animal Practice, Vol. X. Philadelphia: Saunders,1989; 1269-1282.3. Concannon PW and DiGregorio GB. Canine vaginal cytology. In: Burke T, ed. Small Animal Reproduction and Infertility.Philadelphia: Lea and Febiger, 1986; 96-111.4. Lindsay FEF and Concannon PW. Normal canine vaginoscopy. In: Burke T, ed. Small Animal Reproduction andInfertility. Philadelphia: Lea and Febiger, 1986; 112-120.5. England GCW. ELISA determination of whole blood and plasma progestogen concentration in bitches. Vet Rec 1991;129:221-222.6. England GCW. Vaginal cytology and cervico vaginal mucus arborisation in the breeding management of bitches. J SmallAnim Pract 1992; 33:577-582.7. Jeffcoate IA and Lindsay FEF. Ovulation detection and timing of insemination based on hormone concentrations, vaginalcytology and the endoscopic appearance of the vagina of domestic bitches. J Reprod Fert Suppl 1989; 39:277-287.8. Concannon P, Morton D and Weir B. Dog and Cat Reproduction, Contraception and Artificial Insemination. In:Proceedings of the 1st Int Symp Canine Feline Reprod. Cambridge: J Reprod Fert Suppl 1989; 39:350.9. Concannon P, England G, Verstegen J et al. Fertility and Infertility of Dogs, Cats and Non-domestic Carnivores. In:Proceedings of the 2nd Int Symp Canine Feline Reprod. Cambridge: J Reprod Fert Suppl 1993; 47:569.10. Concannon P, England G, Verstegen J et al. Reproduction of Dogs, Cats and Exotic Carnivores. In: Proceedings of the3rd Int Symp Canine Feline Reprod. Cambridge: J Reprod Fert Suppl 1997; 51.11. Concannon P, England G, Verstegen J et al. Advances in Dog, Cats and Exotic Carnivore Reproduction. In: Proceedingsof the 3rd Int Symp Canine Feline Reprod. Cambridge: J Reprod Fert Suppl 2001; 57.12. Verstegen JP, Silva LD, Onclin K. Determination of the role of cervical closure in fertility regulation after mating orartificial insemination in beagle bitches. J Reprod Fertil Suppl 2001; 57:31-4.Derechos Reservados. Este documento está disponible en www.ivis.org. Documento No. A1231.0602.ES.