Método para la cuenta de bacterias aerobias en placa

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  • 1. Método para la cuenta de Bacterias Aerobias en Placa (NOM-092)Objetivo.- Estimar la cantidad de microrganismos viables en un alimento, agua potable,pozo, purificada y leches, por la cuenta de colonias en un medio sólido, incubandoaeróbicamente.Fundamento.- Contar las colonias, que se desarrollen en el medio de elección despuésde cierto tiempo y temperatura de incubación, presuponiendo que cada colonia provienede un microrganismo de la muestra bajo estudio. El método admite numerosas fuentes devariación, algunas de ellas contables, pero sujetas a la influencia de varios factores.Generalidades.- Definición de UFC e interpretación de resultados.Material Matraz Erlenmeyer de 250 ml Agitador Mechero Bunsen Pipetas de 1,2,5 y 10 ml. Propipeta Gradilla 6 Tubos de Ensaye Cerillos Plumón Algodón FranelaReactivos Agar triptona extracto de levaduraEquipo Baño María Estufa Cuenta colonias Microscopio Balanza DigitalTécnica 1. Prepara tu medio de cultivo 2. Esteriliza 3. Enfría el medio a una temperatura de 45°C aproximadamente (si puedes introdúcelo en el baño maría para que permanezca a esa temperatura). 4. Sanitiza el área de trabajo. 5. Distribuye las cajas Petri en el área alrededor del mechero Bunsen.
  • 2. 6. Etiqueta las cajas por duplicado indicando la dilución primaria y adicional que se esté realizando. No olvides la caja testigo.7. Coloca el tubo de dilución primaria y adicional frente a ti y rotúlalos con cinta masking según la dilución que realices.8. Mide 10 ml de la muestra e introdúcelo en el frasco (dilución primaria), agítalo.9. Mide un ml de esta solución y colócala en la primera caja Petri que rotulaste (inóculo).10. Agrega el medio de cultivo que preparaste (aproximadamente entre 10 y 15 ml)11. Mezcla el agar con la solución de la siguiente manera: 6 movimientos de derecha aizquierda, 6 movimientos en sentido de las manecillas del reloj, 6 movimientos en contra de las manecillas del reloj y 6 de atrás a adelante.12. Cuida que el medio no moje la cubierta de la caja.13. Deja solidificar.14. Nuevamente mide 1ml de la solución (dilución primaria) e introdúcela en el primer tubo de dilución adicional, agita. Toma 1 ml de ésta y pásalo a un segundo tubo de dilución y así sucesivamente.15. Toma de cada dilución 1ml de la sustancia y colócala en la caja Petri respectiva, repitiendo el procedimiento desde el punto 10 al 1316. Incuba las cajas en posición invertida de 24 a 48 horas a 35°C ± 2°C.17. Pasado este tiempo contar las colonias con desarrollo.18. Hacer uso del microscopio en caso de dadas colonias muy pequeñas.