1. O documento descreve métodos para determinar a concentração de hemoglobina no sangue através de colorimetria. 2. A hemoglobina é transformada em compostos estáveis como oxihemoglobina ou ciametahemoglobina antes da leitura. 3. Os resultados são expressos em g% de hemoglobina no sangue total comparados a uma curva de calibração padrão.

1. HEMOGLOBIMETRIA
Antonio Altair M. Oliveira
Domênio H.G.P.Barbieri
Lúcia Helena M. Bruneri
Primavera Borelli
1.PRINCÍPIO
É a determinação da concentração do pigmento hemoglobínico no
sangue total. O resultado é expresso em g% de sangue. Em cumprimento a um
antigo hábito, a hemoglobina do sangue pode também ser expressa em “ % do
normal”, dado este arbitrário, visto que o valor “ normal” , da hemoglobina não
deve ser considerado fixo, pois depende de uma série de variáveis, como idade e
sexo. Não obstante, considera-se, em termos médios, como “ normal”, 16 g% para
o homem e 15% para a mulher.
Existem vários métodos de dosagem, devendo-se proferir os
colorimétricos. Nos diferentes métodos de dosagem, a hemoglobina é
transformada em um composto estável (oxihemoglobina, cianometahemoglobina,
hematina ácida, etc).
Os aparelhos, fotocolorimétrico e espectrofotômetro, devem estar
calibrados.
2. CURVA DE CALIBRAÇÃO
Para se determinar a concentração de hemoglobina utilizam-se
padrões comerciais de boa qualidade ou prepara-se uma solução padrão de
hemoglobina, na qual a hemoglobina tenha sido determinada através de um
método rigoroso (por ex.: pela determinação do ferro hemoglobínico). A partir
destes padrões, a curva de calibração ou fator de calibração são estabelecidos
pelas técnicas usuais de colorimetria.
3. MÉTODO DA OXIHEMOGLOBINA
As hemácias hemolisadas com água destilada, liberam
oxihemoglobina; a amônia acrescentada lisa os estromas resultantes. Este método
não dosa compostos anormais que possam estar presentes como a
metahemoglobina e a sulfahemoglobina.
a) 0,020 ml de sangue (oxalatado ou capilar) são colocados em 5 ml
de água destilada, lavando-se a pipeta na mesma. Adicionam-se 2 gotas de
amônia a 50%. Homogeneizar.
b) Ler no fotocolorimétrico (filtro verde) ou espectrofotômetro (540
nm) contra um branco de água destilada contendo 2 gotas de amônia a 50%.

2. c) Cálculo: absorbância x fator de calibração = concentração de
hemoglobina no sangue (g de Hb/100 ml de sangue).
4. MÉTODO DA CIANOMETAHEMOGLOBINA
Neste método os compostos de hemoglobina, com exceção da
sulfahemoglobina, são rapidamente convertidos a ciametahemoglobina sob a ação
do cianeto de potássio e do ferricianeto de potássio.
a) 0,020 ml de sangue são colocados em 5 ml de solução de Drabkin
(modificada)* Homogeneizar. Leitura após 3 minutos.
b) Leitura de fotocolorimétro (filtro verde) ou espectrofotômetro (540
nm) contra solução de Drabkin, modificada.
c) Cálculo: absorbância x fator de calibração = g% Hb no sangue
total.
5. CÁLCULO DA HEMOGLOBINA EM “ % DO NORMAL “
Determinada a Hb g%, estabelece-se por uma regra de três,
considerando-se como 100% de Hb: 16 g para o homem e 15 g para a mulher.
Ex: paciente do sexo masculino: apresentou 8g% de hemoglobina,
portanto:
100% = 16 g
x = 50% do normal
x% = 8 g
(* ) Solução de Drabkin, modificada:
Ferricianeto de potássio ......................................... 200 mg
Cianeto de potássio ......................................... 50 mg
Fosfato diácido de potássio..................................... 140 mg
Sterox ......................................... 0,5 ml
Água destilada q.s.p. ........................................ 1000 ml