Análisis cualitativo de carbohidratos

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Principales reacciones para caracterizar cualitativamente un carbohidrato

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  • 1. Análisis cualitativo deCarbohidratosHarold Andrés Salamanca Ortíz 20101150054Andrea Catalina Rodríguez Murcia 20101150049
  • 2. Carbohidratos• Moléculas con CHO (hidratos de carbono.• Son aldehídos o cetonas con múltiples grupos hidroxilo.• Almacenamiento de energía, síntesis de moléculas más complejas.
  • 3. EnsayoGeneral
  • 4. Fundamento• Los polisacáridos, disacáridos o trisacáridos se hidrolizan y formanmonosacáridos (calentamiento con ácido mineral concentrado):
  • 5. Fundamento• Estos monosacáridos se convierten en furfural o 5-hidroxi metil furfural(calentamiento y ácido sulfúrico o fosfórico):
  • 6. Fundamento• Los furfurales formados son volatilizados con vapor y reaccionan con p-toluidinao anilina para formar bases de Shiff coloreadas:
  • 7. Procedimiento5-10 mg del compuestoO unas gotas de solucióndel compuesto a sequedadGotas de ácido fosfóricoCubrir con un papel filtro mojado con 2 gotas de reactivo (sln 10%de toluidina en HAc al 10%)
  • 8. Ensayo deMolish
  • 9. Fundamento• Identifica monosacáridos (pentosa o hexosa)• Convierte el monosacárido en furfural (o sus derivados), el cual reacciona conalfa naftol formando un compuesto de coloración púrpura – violeta:•
  • 10. Procedimiento20 mg del compuesto1 mL de agua2 gotas reactivo deMolish Ácido sulfúricoPor lasparedes deltubo
  • 11. Procedimiento
  • 12. Consideraciones• Algunos carbohidratos complejos pueden dar ensayosnegativos, especialmente los insolubles en agua. Algunospolialcoholes como las hexitas pueden dar ensayo positivo.
  • 13. Diferenciación entre azúcaresreductores-no reductores
  • 14. Ensayo deFehling
  • 15. Fundamento• Identifica azúcares reductores de no reductores.• Los carbohidratos reductores se oxidan a sales de ácidos aldónicos cuando elCu 2+ del reactivo de fehling se reduce a Cu 1+.
  • 16. Procedimiento10 mg de compuesto1 mL de sln A1 mL de sln BDebido a la formación deóxido de cobre
  • 17. Ensayo deBenedict
  • 18. Fundamento• Tiene el mismo fundamento del ensayo de Fehling:
  • 19. Procedimiento10 mg de compuesto2 mL de reactivobenedictDebido a la formación deóxido de cobreCalentamiento a baño Maríadurante 3 minutos
  • 20. Diferenciación entre monosacárido-disacárido
  • 21. Ensayo deBarfoed
  • 22. Fundamento• Los monosacáridos se oxidan más fácilmente que los disacáridos.• El acetato de cobre cristalizado oxida al monosacárido reduciendo al Cu 2+ aCu 1+. El precipitado se forma en 2 minutos. En disacáridos se forma en mástiempo:
  • 23. ProcedimientoEn 2 minutos10 mg del compuesto2 mL del reactivo
  • 24. Diferenciación entre monosacáridos
  • 25. Ensayo deSeliwanoff
  • 26. Fundamento• Identificación de cetohexosas, diferenciándolas de las aldohexosas.
  • 27. El calentamiento a más de 15minutos produce la isomerizaciónde la D-Glucosa (aldosa) en D-Fructosa (cetosa), por lo que laglucosa da prueba positivaLa sacarosa siendo disacárido daprueba positiva debido a suhidrólisis ácida, dando la D-glucosa y D-Fructosa
  • 28. ProcedimientoEn 2 minutos1 mL de sln de azúcar al 5%1 mL del reactivoA baño María
  • 29. Ensayos para pentosas
  • 30. Ensayo deBial
  • 31. Fundamento• El HCl del reactivo de Bial convierte a la pentosa en furfural, la cual reaccionacon orcinol para formar un complejo de color verde
  • 32. ProcedimientoSolucióncarbohidrato al 5%1 mL reactivo bial
  • 33. Ensayo deTollens
  • 34. Fundamento• La pentosa se convierte en furfural con calentamiento en HCl, y se hacereaccionar con un fenol (floroglucinol) para formar un complejo rojo:
  • 35. Procedimiento10 mg delcompuesto+ 5mL deHCl 6N10 mg defluoroglucinolCalentar abaño Maríax 1 minutoColoraciónroja
  • 36. Prueba de laBencidina deTauber
  • 37. Fundamento Característico para identificación de pentosas. Trabaja de forma similar que en la prueba de Tollens, peroen este caso, el ácido es acético y el compuesto con elque se condensa el furfural es una bencidina.
  • 38. Procedimiento• 1 mL de sln de bencidina + 2 gotas de solución de carbohidrato• Calentar a ebullición• Enfriar rápidamenteColor violeta
  • 39. Caracterizaciónde azúcares porformación deosazonas
  • 40. Fundamento
  • 41. Fundamento• Las osazonas de diferentes azúcares tienen punto de fusión y característicasdiferentes:• Hidrazona• Color blancoManosa• Al formarse se separa alprincipio como un aceiteArabinosa• Se separa de forma cristalina• No precipita en calienteLactosa
  • 42. ProcedimientoEn un tubo deensayo0,2 g decarbohidrato0,4g declorhidrato defenilhidracinapuro0,6g de acetatode sodiocristalizado4 mL de aguaTapar con uncorcho sinajustarBaño maría a100°CAgitar el tuboocasionalmentesin retirar delbañoAnotar el tiempode formación dela osazona
  • 43. Procedimiento alternativo0,5 g decarbohidrato +2mL de agua1 mL HAc glacial+ 3 mL agua + 1mL fenilhidracinapuraAgitar hastaobtener una slnclaraAgregar la 2sln asln de azúcarAgitarcuidadosamenteColocar el tuboen baño maríaAnotar el tiempode formación dela osazonaEn cada tubopor separado
  • 44. ResultadosAzúcar Osazonat de formación (min) Pto de fusión (°C)Manosa 0,5 205Fructosa 2 205Glucosa 4 205Xilosa 7 164Ramnosa 9 185Arabinosa 9 166Galactosa 15-19 196Sacarosa 30 205Lactosa - 200Maltosa - 208