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Diagnostico De Tbc Por El Laboratorio 3
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Diagnostico De Tbc Por El Laboratorio 3

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METODOS DIAGNOSTICO PARA TUBERCULOSIS

METODOS DIAGNOSTICO PARA TUBERCULOSIS

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  • 1. DIAGNOSTICO DE LA TUBERCULOSIS POR EL LABORATORIO ORIANA RIVERA LOZADA BACTERIOLOGA ESPECIALISTA EN MICROBIOLOGIA
  • 2. EPIDEMIOLOGIA TBC
  • 3. DIAGNOSTICO DE MICOBACTERIAS POR EL LABORATORIO
    • En el departamento del Cauca la tasa de notificados en el 2004 fue de 26.92 por 100.000 habitantes incrementándose en comparación con la de 1994
    • 17.94 por 100.000
  • 4. DIAGNOSTICO DE MICOBACTERIAS POR EL LABORATORIO
    • COLOMBIA : 42 MILLONES HTS
    • 1/3 INFECTADOS: 14 MILLONES.
    • 5% ENFERMARAN: 700.000 HTS
    • LA MITAD EN 5 AÑOS: 350.000 HTS.
    • 70.000 CASOS NUEVOS POR AÑOS!!!!!!
  • 5. DIAGNOSTICO DE MICOBACTERIAS POR EL LABORATORIO
  • 6. ESQUEMA DE LA PARED DE LAS MICOBACTERIAS
  • 7. DIAGNOSTICO DE TBC POR METODOS TRADICIONALES 50-55 DIAS Pbas bioquímicas tradicionales (Niacina, Catalasa, Reducción de Nitratos etc) IDENTIFICACIÓN DE LA ESPECIE 20-25 DÌAS Lowestein-Jensen Ogawa- Kudoh DETECCION DE CRECIMIENTO 24 HORAS Coloración de Kinyoun Coloración de Ziehl-Neelsen EXAMEN DIRECTO TIEMPO PROMEDIO DEL REPORTE DESDE EL DIA EN QUE SE PROCESA LA MUESTRA TECNICAS PROCEDIMIENTO
  • 8. DIAGNOSTICO DE TBC POR METODOS TRADICIONALES 60 DIAS Método de las proporciones múltiples PRUEBAS DE SENSIBILIDAD TIEMPO PROMEDIO DEL REPORTE DESDE EL DIA EN QUE SE PROCESA LA MUESTRA TECNICAS PROCEDIMIENTO
  • 9. DIAGNOSTICO DE TBC POR METODOS RECOMENDADOS POR EL CDC 18 días BACTEC, Sondas de ADN, HPCL IDENTIFICACIÓN DE LA ESPECIE 15 días BACTEC, DETECCION DE CRECIMIENTO 24 horas Coloración Auramina/Rodamina EXAMEN DIRECTO TIEMPO PROMEDIO DEL REPORTE DESDE EL DIA EN QUE SE PROCESA LA MUESTRA TECNICAS PROCEDIMIENTO
  • 10. DIAGNOSTICO DE TBC POR METODOS RECOMENDADOS POR EL CDC 30 días BACTEC PRUEBAS DE SENSIBILIDAD TIEMPO PROMEDIO DEL REPORTE DESDE EL DIA EN QUE SE PROCESA LA MUESTRA TECNICAS PROCEDIMIENTO
  • 11. BACILOSCOPIA CON TINCIONES ACIDORRESISTENTES
    • Es muy útil en tuberculosis pulmonar, donde con tres baciloscopias del esputo se puede establecer la presencia de micobacterias en un 70% a 80%
  • 12. BACILOSCOPIA CON TINCIONES ACIDORRESISTENTES
    • Se utilizan dos tipos de coloraciones para microorganismos acidorresistentes:
    • Coloraciones con carbolfuscina:
    • Ziehl-Neelsen
    • Kinyoun
    • Coloración con fluorocromo: Auramina O, con o sin un segundo fluorocromo, la Rodamina.
  • 13. COLORACION DE ZIEHL-NEELSEN
  • 14. COLORACIÓN A AURAMINA-RODAMINA
  • 15. Comparación entre los tiempos requeridos para observar extendidos negativos coloreados con una coloración convencional y Auramina-Rodamina 15 Minutos 3 Minutos S:96.5% E: 98% TIEMPO TOTAL PARA OBSERVAR UN EXTENDIDO 300 30 MAXIMO DE CAMPOS OBSERVADOS 1000X 400X AUMENTO FUSCHINA AURAMINA-RODAMINA CONDICION
  • 16. Comparación entre los tiempos requeridos para observar extendidos negativos coloreados con una coloración convencional y Auramina-Rodamina 12 horas con 50 minutos 2 horas con 5 minutos TIEMPO TOTAL PARA 50 EXTENDIDOS FUSCHINA AURAMINA-RODAMINA CONDICION
  • 17. BACILOSCOPIA Y TINCIONES ACIDORRESISTENTES
    • Ulukanligil y col. compara dos métodos de tinción, la fluorescencia y Ziehl-Neelsen en un total de 465 muestras obtenidas de 295 pacientes con el fin de determinar la sensibilidad para detectar tuberculosis.
  • 18. BACILOSCOPIA Y TINCIONES ACIDORRESISTENTES 80% 66% 61% Ziehl-Neelsen 92% 83% 83% Fluorescencia TRES MUESTRAS DOS MUESTRAS UNA MUESTRA TIPO DE TINCION
  • 19. MEDIOS DE CULTIVO
  • 20. MEDIOS DE CULTIVO
    • Lowestein-jensen.
    • Kirchen.
    • Middlebrook (7H9, 7H10 Y 7H11).
    • Ogawa Kudoh. (OK).
    • Stonebrink modificado por Giraldo (STG).
  • 21. MÉTODO DE CULTIVO EN CAPA DELGADA MCD
  • 22. Porcentaje de detección de las muestras positivas comparando los dos cultivos (CIB) EN 761 MUESTRAS 76.2% 40.4% 14.6% 1.3% LJ 100% 95.2% 82.3% 65.3% MCD 4 SEMANA 3 SEMANA 2 SEMANA 1 SEMANA Medio de cultivo
  • 23. Tiempo (días) necesario para obtener el crecimiento en cada medio de cultivo CIB 28.5 +/-9.3 24.6+/- 7.3 26.5+/- 8.6 LJ 14+/-7.1 8.4+/- 3.2 11+/- 4.9 MCD Muestras extrapulmonares Muestras pulmonares Todas las muestras Medios de cultivos
  • 24. SISTEMA MGIT(Mycobacterial Growth indicator tube )
  • 25. COMPARACION DE MGIT CON OK Y MCD 5.6% 99.1% 71.1% 15.1% MCD 15.5% 94.1% 84% 24.3% MGIT 4.6% 24.7% OK SENSIBILIDAD EN MUESTRAS PAUCIBACILARES ESPECIFICIDAD SENSIBILIDAD PORCENTAJE DE POSITIVIDAD MEDIO DE CULTIVO
  • 26. SISTEMA BACTEC
  • 27. BACTEC 9000
  • 28. “ Evaluation of Nonradiometric System (BACTEC 9000 MB) for Detection of Mycobacteria in Human Clinical Samples.” 1997 PORCENTAJE DE RECUPERACION DE MICOBACTERIAS 95.1% 10.3 91.9% 10.0 69.3% 27.3 TOTAL DIAS + 82.3% 88.2% 52.9% Especimenes NO respiratorios 100% 93.3% 75.5% Especimenes respiratorios BACTEC 9000 BACTEC 460 LJ TIPO DE MUESTRAS
  • 29. II Difco ESP culture system
  • 30. “ Multicenter Comparison of ESP Culture System II with BACTEC 460 TB and with Lowenstein-Jensen Medium for Recovery of Mycobacteria from diferent Clinical Specimens including Blood” 1998 33.3% 27 66.6% 17 100%* 18 SANGRE TIME 64.8% 67.6% 90.5%* 85.3%* 77.0% 85.3%* Respiratorias NO Respiratorias 64.4% 89%* 78.9% TODAS LJ BACTEC ESP II MUESTRA
  • 31. BACTEC 960 MGIT
  • 32. “ Comparison of Recoveries of Mycobacterium tuberculosis using the automated BACTEC MGIT 960 System, The BACTEC 460TB System, and Lowenstein-Jensen Medium” 2000( ) 50% 81.8% 80.7% 36.2 LJ Tiempo 100% 92.7% 93.0% 16.8 BACTEC 460 Tiempo 100% 96.4% 96.5% 13.2 BACTEC MGIT 960 Tiempo MNT M. tuberculosis TODAS LAS MICOBACTERIAS MEDIO
  • 33. CROMATOGRAFIA LIQUIDA DE ALTA PRESION (HPCL)
  • 34. Identificación correcta por HPCL de M. tuberculosis según diferentes autores 100 98 319 80 319 82 3 Butler (1991) CIB 100 122 122 2 Guthertz (1993) 99 648 649 1 Glickman(1994) CONCOR. ( %) No. confir. HPCL NO CEPAS EVALUADAS REFERENCIA
  • 35. MAPIA (Prueba serológica multiantigénica )
    • La proteína de 38 Kd
    • El complejo antigénico 45/47 Kd
    • El antígeno de 16 Kd,
    • Las proteínas ricas en glicina PE_PGRS
    • El antígeno de 30 Kd o 85b .
  • 36. MAPIA (Prueba serológica multiantigénica)
  • 37. MAPIA (Prueba serológica multiantigénica
    • Su desventaja es que la sensibilidad puede variar ya que los pacientes responden a diferentes antígenos y no existe un antígeno dominante en tuberculosis .
  • 38. MAPIA (Prueba serológica multiantigénica
    • INS
    • 66 sueros pacientes con enfermedad tuberculosa comprobada
    • 47 sueros de individuos sin tuberculosos
    • anticuerpos para 8 antígenos :
    • 3 mezclas enriquecidos antígenos
    • 5 antígenos recombinantes.
    • SENSIBILIDAD 5%, y 83%
    • ESPECIFICIDAD 9% y 100%
  • 39. PCR REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA
  • 40. PCR REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA
    • Inmunología del Hospital San Juan Dios
    • 147 pacientes, la mayoría extrapulmonares.
    • Sensibilidad 100%
    • Especificidad 95.3%
  • 41. PCR
    • RELACTB
    • (Red Latinoamericana y del Caribe de investigación en tuberculosis).
    • Cada laboratorio recibió 30 muestras .
    • los resultados mostraron gran variabilidad en la sensibilidad y especificidad .
    • La sensibilidad y especificidad general obtenida fue 55% y 71.6% respectivamente.
  • 42. PCR LABORATORIO INMUNOLOGÌA, UNIVERSIDAD DEL CAUCA 66.6% 14 28 TBC CLINICA 92.5% 1 12 TBC ESTABLECIDA S ENSIBILIDAD PCR NEGATIVO PCR POSITIVO MUESTRA
  • 43. TÉCNICAS MOLECULARES RECIENTES Amplicor test
    • Esta tecnica detecta la presencia de mycobacterial 16 S ribosomal RNA (rRNA) gen por PCR amplificación seguido por una reacción de ELISA.
    • especificidad 99%
    • sensibilidad 80%-92%
  • 44. TÉCNICAS MOLECULARES RECIENTES el Enchanced M. tuberculosis Direct Test (E-MTD; Gen-Probe, San Diego).
    • Este ensayo es basado en la transcripción mediada por un sistema de amplificación (TMA). El mycobacterial rRNA.
    • EL RNA amplicon producido es detectado en solución usando luminometrico. Esta aprobado solo para muestras respiratorias
  • 45. MÉTODOS PARA DETERMINAR LA SUCEPTIBILIDAD DE Mycobacterium tuberculosis (MTB)
    • método de las proporciones múltiples .
    • BACTEC .
    • luciferasa
    • . sondas de acidos nucleicos .
    • Citometría de Flujo (CMF)
  • 46. CONCLUSIONES
    • El diagnóstico es la piedra angular dentro de la lucha de la TBC.
    • Las pruebas con alta tecnología son inviables en países pobres donde se concentra la mayoría de pacientes con TBC.
    • Deben existir programas que ayuden a instaurar las nuevas tecnologías.
  • 47. CONCLUSIONES
    • “ A Pesar de los grandes avances en los métodos diagnósticos contra la tuberculosis, hay muchos factores que limitan su aplicación a la población que mayormente lo requiere, por lo tanto falta mucho tiempo para decir que erradicamos a nuestra compañera de los últimos 10 mil años:”
    • La tuberculosis
  • 48. GRACIAS

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