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tecnica de la ck, fundamento de la prueba, metodologia,calculos, valores de referencia.

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  • 1. CREATINE KINASE-MB (CK-MB) COD 11566 20 x 2,5 mL COD 11574 10 x 10 mL CREATINA QUINASA-MB (CK-MB) CONSERVAR A 2-8ºC Inmunoinhibición Reactivos para medir la concentración de CK-MB Sólo para uso in vitro en el laboratorio clínico FUNDAMENTO DEL MÉTODO • Cod 11574 (10 x 10 mL): Reconstituir el liofilizado de un vial de Un anticuerpo específico inhibe las dos subunidades M de la CK-MM (CK- Reactivo B con 10 mL de Reactivo A. Agitar suavemente. 3) y la única subunidad M de la CK-MB (CK-2), lo que permite la medición Estable 15 días a 2-8ºC. de la subunidad B de la de la CK-MB (asumiendo la ausencia de CK-BB o CK-1)1,2. La concentración catalítica de CK-B, que corresponde a la mitad EQUIPO ADICIONAL de la actividad CK-MB, se determina empleando las reacciones acopladas − Analizador, espectrofotómetro o fotómetro con cubeta termostatizable a de la hexoquinasa (HK) y glucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G6P-DH), a 37ºC para lecturas a 340 nm. partir de la velocidad de formación del NADPH, medido a 340 nm3. − Cubetas de 1 cm de paso de luz. Fosfato de creatina + ADP CK -→ Creatina + ATP B ATP + Glucosa HK → ADP + Glucosa - 6 - fosfato  MUESTRAS Suero recogido mediante procedimientos estándar. Glucosa- 6 - fosfato + NADP+ G6P → Gluconato- 6 - fosfato + NADPH + H+  - DH La concentración de CK total en la muestra debe ser inferior o igual a 1000 U/L. Si es superior, diluir el suero con NaCl 150 mmol/L. La CK-MB en suero es estable al menos 7 días a 2-8ºC. CONTENIDO COD 11566 COD 11574 PROCEDIMIENTO A. Reactivo 1 x 55 mL 1 x 160 mL 1. Precalentar el Reactivo de Trabajo y el instrumento a 37ºC. B. Reactivo para 20 x 2,5 mL para 10 x 10 mL 2. Pipetear en un tubo de ensayo: (Nota 1) Muestra 40 µL COMPOSICIÓN Reactivo de Trabajo 1,0 mL A. Reactivo: Imidazol 104 mmol/L, EDTA 2,08 mmol/L, acetato de 3. Mezclar bien e incubar inmediatamente a 37ºC. Poner en marcha el magnesio 10,4 mmol/L, D-glucosa 20,8 mmol/L, pH 6,6. cronómetro. B. Reactivo: Anti-CK-M capaz de inhibir 1000 U/L de CK-M humana, 4. Leer la absorbancia (A) a 340 nm exactamente a los 10 minutos (A10) fosfato de creatina 31,2 mmol/L, ADP 2,08 mmol/L, AMP 5,2 mmol/L, y a los 15 minutos (A15) de incubación. P1, P5-di(adenosina-5'-)pentafosfato 10,4 mmol/L, NADP 2,08 mmol/L, N-acetilcisteína 20,8 mmol/L, hexoquinasa > 3120 U/L, glucosa-6-fosfato deshidrogenasa > 2080 U/L, una vez reconstituido. CÁLCULOS La concentración de CK-MB en la muestra se calcula a partir de la siguiente fórmula: CONSERVACIÓN Vt × 106 Conservar a 2-8ºC. (A15 - A10) × × 2 = U/L ε × l × Vs × 5 min Los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, siempre que se conserven bien cerrados y se evite la El coeficiente de absorción molar (ε) del NADPH a 340 nm es 6.300, el contaminación durante su uso. paso de luz (l) es 1 cm, el volumen total de reacción (Vt) es 1,04, el Indicaciones de deterioro: volumen de muestra (Vs) es 0,04, y 1 U/L equivale a 16,67 nkat/L. Se − Reactivos: Presencia de partículas, turbidez, absorbancia del blanco deducen los siguientes factores para calcular la concentración catalítica: superior a 0,300 a 340 nm (cubeta de 1 cm). x 1651 = U/L A15 – A10 x 27522 = nkat/L PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS Reactivo de Trabajo El índice de CK-MB se calcula utilizando la siguiente fórmula: • Cod 11566 (20 x 2,5 mL): Reconstituir el liofilizado de un vial de CKMB concentración Reactivo B con 2,5 mL de Reactivo A. Agitar suavemente. × 100 = % CKtotal concentración
  • 2. VALORES DE REFERENCIA CARACTERISTICAS DIAGNÓSTICAS Se han descrito valores discriminantes de alrededor de 9 U/L = 150 nkat/L La creatina kinasa esta compuesta de 2 cadenas polipeptídicas, para el infarto agudo de miocardio. No obstante, es preferible emplear el denominadas B (de cerebro) y M (de músculo), que dan origen a los tres límite del índice de CK-MB del 6% de la concentración de CK total4 como isoenzimas diméricos: MM (CK-1), MB (CK-2) y BB (CK-3). valor discriminante. Los porcentajes de la actividad de CK-MB sérica respecto a la actividad CK total suele ser inferior al 6%. Sin embargo, estos valores aumentan al 10 a 30% después de un infarto de miocardio dependiendo de la extensión CONTROL DE CALIDAD de tejido miocárdico afectado y de la localización del infarto. No obstante, Se recomienda el uso del Sueros Control de CK-MB (cod. 18024)) para pueden encontrarse índices bajos de CK-MB sérica tras un infarto de un verificar la funcionalidad del procedimiento de medida. Reconstituir el miocardio previamente sano. Por consiguiente, el diagnóstico de infarto de suero con 0,5 mL de agua destilada. Estable 7 días a 2-8ºC. Las miocardio debe basarse en la historia clínica y otros datos, junto con la concentraciones de CK y CK-MB vienen indicadas en la etiqueta del vial. magnitud de la elevación de CK-MB y su perfil en el tiempo4,7. Cada laboratorio debe establecer su propio programa de Control de El diagnóstico clínico no debe realizarse teniendo en cuenta el resultado Calidad interno, así como procedimientos de corrección en el caso de que de un único ensayo, sino que debe integrar los datos clínicos y de los controles no cumplan con las tolerancias aceptables. laboratorio. CARACTERÍSTICAS METROLÓGICAS NOTAS − Límite de detección: 3 U/L = 50 nkat/L 1. Estos reactivos pueden utilizarse en algúnos analizadores automáticos. Solicite información a su distribuidor. − Límite de linealidad: 330 U/L = 5504 nkat/L. Cuando se obtengan valores superiores, diluir la muestra 1/2 con agua destilada y repetir la medición. BIBLIOGRAFÍA − Repetibilidad (intraserie): 1. Würzburg U, Hennrich N, Lang H, Prellwitz W, Neumeier D and Knedel Concentración media CV n M. Bestimmung der aktivität von creatinkinase MB im serum unter 45 U/L = 750 nkat/L 2,8 % 20 verwendurng inhibierender antikörper. Klinische Wochenschrift 1976; 129 U/L = 2150 nkat/L 2,3 % 20 54: 357-360. − Reproducibilidad (interserie): 2. Gerhardt W and Waldenstrom G. Creatine kinase B-subunit activity in serum after immunoinhibition of M-subunit activity. Clin Chem 1979; Concentración media CV n 25: 1274-1279. 45 U/L = 750 nkat/L 3,5 % 25 3. IFCC methods for the measurement of catalytic concentration of 129 U/L = 2150 nkat/L 3,2 % 25 enzymes. Part 7: IFCC method for creatine kinase. JIFCC 1989; 1: − Sensibilidad: 0,606 ∆mA⋅L/U⋅min = 10,10 ∆mA⋅L/nkat⋅min 130-139. − Veracidad: Los resultados obtenidos con estos reactivos no muestran 4. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd edition. Burtis CA, Ashwood diferencias sistemáticas significativas al ser comparados con reactivos ER. WB Saunders Co., 1999. de referencia. Los detalles del estudio comparativo están disponibles 5. Urdal P and Landaas S. Macro creatine kinase BB in serum, and some bajo solicitud. data on its prevalence. Clin Chem 1979; 25: 461-465. − Interferencias: La hemólisis (hemoglobina > 2,5 g/L) y la lipemia 6. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory tests, 3th ed. AACC (triglicéridos >1,25 g/L) interfieren. La presencia en la muestra de Press, 1997. concentraciones por encima de lo normal de CK-BB o de adenilato 7. Friedman and Young. Effects of disease on clinical laboratory tests, quinasa, y de macro-CK o CK mitocondrial interfieren5. La bilirrubina 3th ed. AACC Press, 1997. (< 20 mg/dL) no interfiere. Otros medicamentos y sustancias pueden interferir6. Estos datos han sido obtenidos utilizando un analizador. Los resultados pueden variar al cambiar de instrumento o realizar el procedimiento manualmente. M11566c-0106

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