2. Biología Molecular
Estudia el ADN y los genes que contiene
El ADN muestra algunas similitudes entre
organismos debido a que han partido de un
ancestro común
La Biología Molecular permite estudiar las
relaciones evolutivas entre los organismos
3. Tecnología del ADN
recombinante
Permite obtener copias de un segmento específico
del ADN
Se introduce ADN foráneo en las células de un
microorganismo
Una secuencia de ADN es amplificada o clonada
El ADN es cortado mediante enzimas de restricción
4. Enzimas de Restricción
También llamadas endonucleasas
Enzimas bacterianas empleadas para
cortar el ADN en sitios específicos
En las bacterias actúan como mecanismo
de defensa para degradar el material
genético extraño que entra a la célula
5. Secuencias Palindrómicas
Son secuencias reconocidas por las enzimas de
restricción que se leen igual en ambas hebras del
ADN en la dirección 5'→3‘
El nombre de las endonucleasas proviene de la
bacteria de la cual fue aislada:
EcoRI→E= género Escherichia
co= especie coli
R= cepa RV 13
I= primera endonucleasa aislada
de esta cepa
6. HindIII: es derivada de Hemophilus
influenzae
Tipos de Corte:
Cohesivos (pegajosos): cortan la doble
hebra del ADN de manera escalonada
5‘-GAATTC-3‘ 5‘-GGATC-3‘
3‘-CTTAAG-5‘ 3‘-CCTAGG-5‘
EcoRI BamHI
7.
8. Abruptos: cortan las dos hebras del ADN en
la misma posición
5‘-AAT AAT-3‘ 5‘-CCC GGG-3‘
3‘-TTA TAA-5‘ 3‘-GGG CCC-5‘
SspI SmaI
9. Factores que afectan a las
enzimas de restricción
Pureza del ADN: proteínas y altas
concentraciones de sal
Temperatura y pH
Amortiguador (buffer) adecuado: provee el
ambiente necesario para que la enzima trabaje
adecuadamente
10. Electroforesis
Esta técnica permite
separar macromoléculas,
fragmentos de ADN o ARN)
a través de un flujo de
corriente eléctrico
Permite determinar el
tamaño de los fragmentos
de ADN
El ADN y el ARN migran
hacia el polo positivo del
campo eléctrico debido a
que están negativamente
cargado, debido sus
grupos fosfato
11. Los fragmentos del ADN se separan de acuerdo con:
El tamaño de la molécula o masa
Forma o conformación del ADN
Tamaño o poro del gel
Magnitud de la carga neta de la molécula
Los fragmentos del ADN migran inversamente
proporcional al logaritmo de su tamaño o peso
molecular
12. El movimiento de los fragmentos del ADN
genera un patrón de bandas
Cada banda corresponde a un fragmento de
ADN de un tamaño particular
El tamaño de cada fragmento se determina
por un marcador cuyos fragmentos tienen
pesos moleculares conocidos
13. Los fragmentos separados por electroforesis
pueden:
Analizarse empleando otras técnicas
Ser comparados con diferentes organismos
Insertarse en genomas de otros organismos
para crear un ADN Recombinante
