CLONACIÓN - VITA AIDELOSwww.vita-aidelos.com 1Clonación y células madre www.vita-aidelos.comCLONACIÓNClonación y células m...
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CLONACIÓN - VITA AIDELOSwww.vita-aidelos.com 9Clonación y células madre www.vita-aidelos.com Clonación y células madre www...
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Clonación - VITAIDELOS

  1. 1. CLONACIÓN - VITA AIDELOSwww.vita-aidelos.com 1Clonación y células madre www.vita-aidelos.comCLONACIÓNClonación y células madre www.vita-aidelos.comCLONACIÓNuso de métodos asexualespara producir copias exactasde un individuoClonación y células madre www.vita-aidelos.comProducción decopias de unorganismo cuyogenoma seaidéntico al delmodelo originalCLONAJE DEGENESCLONACIÓN DE INDIVIDUOSAmplificación deuna secuencia deADNClonación y células madre www.vita-aidelos.comLa clonación es un fenómenoque existe en la naturalezaReproducción idéntica de un organismo vivoGemelosmonocigóticosClonación y células madre www.vita-aidelos.comClonación de individuosNATURALESSólo el ADN nucleares idénticoARTIFICIALESGenomas igualesADN nuclear y mitocondrialClonación y células madre www.vita-aidelos.comTécnicas de clonaciónCélulas stemCélulas adultasOvocito enucleado
  2. 2. CLONACIÓN - VITA AIDELOSwww.vita-aidelos.com 2Clonación y células madre www.vita-aidelos.comOVOCITOSECUNDARIOMETAFASE IIMEIOSISSi tiene lugar laFECUNDACIÓN,continúa la meiosisy se origina elóvulo y el segundocorpúsculo polarClonación y células madre www.vita-aidelos.comEMBRIÓNClonación y células madre www.vita-aidelos.comTÉCNICAS DECLONACIÓN¿Qué tipos hay?¿Cómo surgieron las técnicas declonación actuales?Clonación y células madre www.vita-aidelos.com- A PARTIR DE CÉLULASEMBRIONARIAS O FETALES- A PARTIR DE CÉLULAS ADULTAS2. TRANSFERENCIA NUCLEARTécnicas de clonación1. PARTICIÓN DEEMBRIONES TEMPRANOSClonación y células madre www.vita-aidelos.com1. PARTICIÓN DEEMBRIONES TEMPRANOSTécnicas de clonaciónCada uno seintroduce en unazona pelúcida deotro ovocito o enuna cubiertaartificial y seimplantaPartición de unembrión o separaciónde blastómeros enembrionesGEMELACIÓNARTIFICIALClonación y células madre www.vita-aidelos.comPARTICIÓN DE EMBRIONESTEMPRANOSNO se consideraclonación ensentido extrictoOvejas, bovinos, ratones, primates, equinosIndividuosprácticamenteidénticos entre sípero diferentesa sus padres
  3. 3. CLONACIÓN - VITA AIDELOSwww.vita-aidelos.com 3Clonación y células madre www.vita-aidelos.com- A PARTIR DE CÉLULAS EMBRIONARIAS O FETALES- A PARTIR DE CÉLULAS ADULTAS2. TRANSFERENCIANUCLEARTécnicas de clonaciónClonación y células madre www.vita-aidelos.comTécnicas de clonaciónEnucleación del ovocitoFusión o introducción de un nuevo núcleoActivación del ovocitoDesarrollo embrionarioImplantaciónClonación y células madre www.vita-aidelos.comA) TRANSFERENCIA NUCLEAR A PARTIR DECÉLULAS EMBRIONARIAS O FETALESLos núcleos de blastómerosde células embrionarias ofetales en cultivo o losblastómeros enterosSe transfieren a ovocitos o zigotosenucleados. La fusión de ambascélulas se provoca por unadescarga eléctrica que ademásinicia el desarrollo embrionarioClonación y células madre www.vita-aidelos.comResultado: individuoscasi idénticos entre sípero diferentes de losprogenitores delembrión donanteOvejas y cabras, terneros, cerdos,ratones, primates, conejosTRANSFERENCIA NUCLEAR A PARTIR DECÉLULAS EMBRIONARIAS O FETALESPRODUCCIÓN ACTUAL DECLONES DE BÓVIDOSClonación y células madre www.vita-aidelos.comB) TRANSFERENCIA NUCLEAR APARTIR DE CÉLULAS ADULTAS- Transferencia denúcleos de células deindividuos ya nacidos aovocitos o zigotosenucleados.- Se originan individuos casi idénticos entre sí ymuy parecidos al donante (del que se diferencianen mutaciones somáticas y genoma mitocondrial)Ratones, ganado bovino y porcino, ovejas ycabras, mulos, gatos, conejos, perros…Clonación y células madre www.vita-aidelos.comTHE NUCLEAR TRANSFER (CLONING) PROCESS
  4. 4. CLONACIÓN - VITA AIDELOSwww.vita-aidelos.com 4Clonación y células madre www.vita-aidelos.comTHE NUCLEAR TRANSFER (CLONING) PROCESSClonación y células madre www.vita-aidelos.comTHE NUCLEAR TRANSFER (CLONING) PROCESSClonación y células madre www.vita-aidelos.comTHE NUCLEAR TRANSFER (CLONING) PROCESSClonación y células madre www.vita-aidelos.comANFIBIOSBriggs y King (1952): Producen clones de ranasintroduciendo núcleos de blastocistos en ovocitosenucleadosSpemann (1938):Primer experimento que originólas técnicas de transferencianuclearGurdon (1962): Obtuvo clones de renacuajos(Xenopus laevis) a partir de queratinocitosPRIMEROS EXPERIMENTOSSOBRE CLONACIÓNClonación y células madre www.vita-aidelos.comCLONACIÓN DEXenopus laevisLa célula donante es unqueratinocito de la pielSe introduce en un ovocitoenucleadoSe obtiene un renacuajo queno se desarrolla hasta lafase adultaClonación y células madre www.vita-aidelos.comque célulasespecializadaspodríanreprogramarseEl trabajo de Wilmut y Campbell(Instituto Roslin – Edimburgo)demostró por primera vez (1996)y llegar a una fase enla que fueran capacesde dar origen a todoslos tipos celularesNace Dolly (1996),el primer mamíferoclónico a partir deuna célula adulta
  5. 5. CLONACIÓN - VITA AIDELOSwww.vita-aidelos.com 5Clonación y células madre www.vita-aidelos.comBIOPSIA de una glándula mamaria de unaoveja gestante Finn DorsetCULTIVO durante 5 días en medio pobre ensuero bobino fetal. Entrada en fase Go.Obtención de ovocitos no fecundados deovejas Scottish Blackface y ENUCLEACIÓNClonación y células madre www.vita-aidelos.comIMPLANTACIÓNde los embriones(277) en ovejaBlackface (6 días)REIMPLANTACIÓNde las mórulas /blastocistos (29)recuperadas deloviducto, en úterosde otras 13 ovejasBlackfaceFUSIÓN de célula donante con ovocitoenucleado y ACTIVACIÓN del ovocitomediante pulsos eléctricosSólo un embrión se desarrolló: DOLLYClonación y células madre www.vita-aidelos.comLos intentos de clonación enmamíferos han tenido un altoíndice de fracasosClonación y células madre www.vita-aidelos.comAsincronía de losciclos celulares de lascélulas donantes yreceptorasdaba lugar aembriones inviablesNúcleosdonantesoocitosMOTIVOSClonación y células madre www.vita-aidelos.comObtener animales vivos no implica que seannormalesSíndrome del ternero grandeGENOMICIMPRINTINGTRATAMIENTOSDEL OVOCITODEFECTO EN LAREPROGRAMACIÓNNUCLEARPosiblescausasClonación y células madre www.vita-aidelos.comIMPRINTING
  6. 6. CLONACIÓN - VITA AIDELOSwww.vita-aidelos.com 6Clonación y células madre www.vita-aidelos.comIMPRINTINGClonación y células madre www.vita-aidelos.comClonación de animalesClonación terapéutica humanaClonación y células madre www.vita-aidelos.comCLONACIÓN DE ANIMALES TRANSGÉNICOSDiciembre de 1997:NACIMIENTO DE POLLYOveja clónica portadora delgen del factor IX humanoobtenida por transferencianuclearIntrodujo nuevo DNA en fibroblastos fetalesen cultivo, seleccionó las que habíanincorporado los nuevos genes y se llevó a cabola transferencia nuclear a ovocitos enucleadosClonación y células madre www.vita-aidelos.com1999- Se consiguió la inserción precisa en ellugar deseado de dos genes.CUPID y DIANAUno de ellosllevaba un genmarcador queservía detestigoEl otro llevaba el mismogen marcador + el de laalfa-1-antitripsinaSon dos ovejasclonadasClonación y células madre www.vita-aidelos.comSe necesitan almenos cuatrofetos viables enla matriz.PPL Therapeuticsdiseñó un nuevométodo (dobletransferencianuclear) y obtuvieronClonación de cerdoscinco lechones en los que se había insertadoun gen al azarHay que producir en undía varios embrionesviables para que laclonación tenga éxitoClonación y células madre www.vita-aidelos.com
  7. 7. CLONACIÓN - VITA AIDELOSwww.vita-aidelos.com 7Clonación y células madre www.vita-aidelos.comLa próxima etapa del equipo de PPLTherapeutics es modificar genéticamente lascélulas donantes para fabricar órganosporcinos más fácilmente tolerables por elsistema inmunitario humano, una etapa claveen el camino hacia los xenotransplantesClonación y células madre www.vita-aidelos.comClonación de otros animales1999- dos empresasanuncian la clonación decabras2000- Webster y Peterdos machos cabríosclonados portadores deun gen de arácnidoFecundaron dos hembras. Así la descendenciahembra daría leche con la proteína de laseda de araña(controla la síntesisde la proteína de laseda de araña)Clonación y células madre www.vita-aidelos.comDiciembre2000InstitutoRoslin yViragenGALLINASacuerdandesarrollar latransferencianuclear paraproducir enlos huevosanticuerposanti-cáncerClonación y células madre www.vita-aidelos.comLos conejos transgénicos producidos porclonación podrían convertirse en instrumentosmuy interesantes para el estudio deaterosclerosis y enfermedades cardiovascularesCONEJOS2002 – INRASe obtiene elprimer conejoclonadoClonación y células madre www.vita-aidelos.comRATONES Y RATAS1998-Wakayama yYanagimachi clonaronratones por 1ª vez- CumulinaSe obtuvieron ratonesclónicos inyectando elnúcleo en el ovocitoenucleado en vez defusionar las dos células2003-INRA: clonaciónde la rata RalphClonación y células madre www.vita-aidelos.comGATOSPERROSLa biología de lareproducción caninahace del perro unanimal difícil de clonar2000-Clon embrionarioa partir de una célulade piel de gato muertonuestrasmascotas?¿Podemosclonara2002- Copycat2004, 20072005- Snuppy
  8. 8. CLONACIÓN - VITA AIDELOSwww.vita-aidelos.com 8Clonación y células madre www.vita-aidelos.com Clonación y células madre www.vita-aidelos.comCLONACIÓN TERAPÉUTICA HUMANALa clonación es factible; pero las dificultades parael clonaje son mayores que en otros mamíferosOVEJAS HUMANOS Y RATONESLas células stem NO han podido serembrionarias han sido llevadas a la fase Gollevadas a fase GoDemora en inicio Comienzo de lade transcripción transcripción desde(desde 8-16 células) estadío de 2 célulasClonación y células madre www.vita-aidelos.comAdvanced Cell Technologies(ACT).Worcester (Massachusetts).Noviembre 2001PRIMERA CLONACIÓN DEUN EMBRIÓN HUMANOFinalidad: Conseguircélulas stemembrionarias (ES)humanas queproporcionen tejidospara transplantesCLONACIÓNTERAPÉUTICAClonación y células madre www.vita-aidelos.comTÉCNICAEMPLEADA ENLA CLONACIÓNDEL PRIMEREMBRIÓNHUMANOClonación y células madre www.vita-aidelos.com Clonación y células madre www.vita-aidelos.com
  9. 9. CLONACIÓN - VITA AIDELOSwww.vita-aidelos.com 9Clonación y células madre www.vita-aidelos.com Clonación y células madre www.vita-aidelos.comPLANTEAMIENTOÉTICO BÁSICOSe basa en elrespeto a laindividualidad eigualdad de losseres humanos LA FINALIDADDE LACLONACIÓNHUMANA ESTERAPÉUTICA

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