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Quale test per la diagnosi delle Allergie?
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Quale test per la diagnosi delle Allergie?

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Quale test per la diagnosi delle Allergie? Presentation Transcript

  • 1. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013Filippo FassioAOU CareggiSOD Immunologia e Terapie Cellulari(Direttore Prof. E. Maggi)ImmunoCAP vs ISAC
  • 2. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013Diagnostica allergologica: evoluzione…
  • 3. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013Prick test ImmunoCAP (ImmunoCAP)ISACDosaggio IgE sieriche• Test di diagnostica“tradizionale”• Anche diagnosticamolecolare, mapochissimi allergenidisponibili• Test di diagnostica“tradizionale”• Anche diagnosticamolecolare, con moltiallergeni disponibili,da indicaresingolarmente• Solo diagnosticamolecolare• Pannello standard(immodificabile) di112 molecoleallergenicheIntroduzione: metodiche…
  • 4. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013Allergologia molecolare: quale test?ImmunoCAPAllergeni singolida richiedere singolarmenteTest ISAC(Immuno Solid-phase Allergen Chip)Pannello standard di 112 molecole
  • 5. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013Allergologia molecolare: quale test?ImmunoCAPISAC
  • 6. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013Allergologia molecolare: test ISACTest ISAC(Immuno Solid-phase Allergen Chip)Pannello standard di 112 molecole• Test non automatizzato• Per l’esecuzione necessita di:• Vetrino• Scanner per microarray• Solo diagnostica molecolare
  • 7. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013Step 1.Reazione Antigene - AnticorpoGli anticorpi IgE presenti nel siero delpaziente riconoscono epitopispecifici creando immunocomplessicon le molecole allergeniche sullasuperficie del biochip.Dettagli pratici:Tempo di incubazione: 120 minLavaggio: 10 min in Sol A.5 min in acqua distillataImmunoCAP ISAC®: la reazioneimmunologica
  • 8. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013Step 2.Reazione con anticorpo secondarioGli anticorpi secondari anti-IgEvanno a legarsi allimmunocomplessoIgE-allergene fissato sulla superficiedel chip. La reazione viene evidenziatadalla presenza di un fluoroforo sullanticorposecondario.Dettagli pratici:Tempo di incubazione: 30 minLavaggio: 10 min in Sol A.5 min in distilled waterImmunoCAP ISAC®: la reazioneimmunologica
  • 9. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013Step 3.Acquisizione dellimmagineIl raggio laser dello scannereccita il fluoroforo cheriemette la radiazione luminosaa una diversa lunghezza donda.Il segnale viene poi elaborato dal softwareper la creazione dellimmagine.Dettagli pratici:Tempo di scansione: 2 minLunghezza donda di eccitazione: 532 nmLunghezza donda di emissione: 570 nmLaserImmunoCAP ISAC®: la reazioneimmunologica
  • 10. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013ImmunoCAP ISAC®Immuno Solid-phase Allergen ChipE’ un supporto solido sulquale differenti molecolenative e ricombinanti sonostate fissate in una precisadisposizione così daformare un arraymicroscopico.Questo permette ilmonitoraggio simultaneo ein parallelo delleInterazioni biologiche conpiccole quantità di campionee di reagenti.~ 100 picogrammi allergene / spot> 100 allergeni / cm²~ 200 µm dimensioni dello spot065.535112
  • 11. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013Microarray ISAC: referto…
  • 12. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013ImmunoCAP (ImmunoCAP)ISAC• Test di diagnostica“tradizionale”• Anche diagnosticamolecolare, con moltiallergeni disponibili,da indicaresingolarmente• Solo diagnosticamolecolare• Pannello standard(immodificabile) di112 molecoleallergenicheAllergologia molecolare: quale test?
  • 13. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013
  • 14. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013Nello studio sono stati arruolati:• Soggetti con allergie respiratorie• Polisensibili (almeno 2 positività dei testallergologici, non correlate tra loro)• Poliallergici
  • 15. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013Può sostituire i test di laboratorio attualmente in uso perla diagnosi delle allergopatie respiratorie?Quali vantaggi offre dal punto di vista dell’inquadramentodiagnostico e della gestione clinica del paziente allergico?Quali criticità sono emerse durante l’utilizzo del microarrayISAC?Allergologia molecolare: microarray ISAC
  • 16. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013Può sostituire i test di laboratorioattualmente in uso per la diagnosidelle allergopatie respiratorie?
  • 17. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013Allergologia molecolare: quale test?
  • 18. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013Allergologia molecolare: quale test?
  • 19. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013Allergologia molecolare: quale test?
  • 20. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013Allergologia molecolare: quale test?
  • 21. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013Allergologia molecolare: quale test?
  • 22. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013Può sostituire i test di laboratorioattualmente in uso per la diagnosidelle allergopatie respiratorie?
  • 23. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013Allergologia molecolare: quale test?
  • 24. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013Quali vantaggi offre dal punto divista dell’inquadramentodiagnostico e della gestione clinicadel paziente allergico?
  • 25. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013Allergologia molecolare: caratterizzazione12% Polisensibilicon sensibilizzazionepredominante29% Polisensibili “veri”25% Polisensibili concross-reattività88% Polisensibili “veri”29% Polisensibilicon sensibilizzazionead alimenti?
  • 26. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013Allergologia molecolare: caratterizzazione12% Polisensibilicon sensibilizzazionepredominante11% Polisensibilicon sensibilizzazionepredominante29% Polisensibili “veri”6%?88% Polisensibili “veri”25% Polisensibili concross-reattività29% Polisensibili consensibilizzazione adalimenti
  • 27. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013Allergologia molecolare: terapieNetto aumento delle prescrizioni di ITSper allergeni inalanti
  • 28. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013Allergologia molecolare: quale test?Quali criticità sono emerse durantel’utilizzo del microarray ISAC?
  • 29. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013Allergologia molecolare: costi
  • 30. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013Allergologia molecolare: criticità ISAC• Metodica attualmente non automatizzata (ma automatizzabile)• Time-consuming: durata complessiva circa 4 ore; almeno nelleprime 2 ore richiesta presenza dell’operatore• Risposte semi-quantitative (ISU)• Non possibile dosaggio delle IgE totaliSufficienti 30 μl di sangue(puntura capillare), utilespecialmente per pazientipediatrici
  • 31. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013ImmunoCAP vs ISAC: conclusioni…Può sostituire i test di laboratorio attualmente inuso per la diagnosi delle allergopatie respiratorie?per il pannello graminaceeper tutti gli altri allergeni inalanti
  • 32. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013ImmunoCAP vs ISAC: conclusioni…Quali vantaggi offre dal punto di vista dell’inquadramentodiagnostico e della gestione clinica del paziente allergico?migliore definizione diagnosticatest multiplexmigliore gestione terapeutica (?)ampio pannello di allergenirisultati inattesi (aspecifici?)
  • 33. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013ImmunoCAP vs ISAC: conclusioni…Molecole allergeniche Pazienti
  • 34. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013…ma in natura ce ne sono DI PIU’…89 allergeni(VBC genomics)103 allergeni(Phadia)112 allergeni(Thermo Fisher)Il microarray ISAC cresce…
  • 35. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013Conclusioni
  • 36. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013www.allergome.orgAllergome…in caso di bisogno
  • 37. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013ImmunoCAP vs ISAC: conclusioni…La diagnostica molecolare in campo allergologico è l’evoluzioneteorica ed applicativa più significativa dalla caratterizzazionedelle IgE.Aumenta il livello di complessità di interpretazione dei test, percui necessita di valutazione da parte di specialista allergologo,con specifica esperienza di allergologia molecolare.La metodica microarray ISAC, nella sua versione attuale,presenta limiti principalmente legati alla “giovinezza” dellatecnologia e dell’approccio allergologico molecolare stesso.Già oggi questa metodica, utilizzata congiuntamente ai testallergologici “tradizionali” (in vivo o in vitro) permette unamigliore definizione diagnostica, le cui potenzialità sono soloparzialmente esplorate.
  • 38. AOU Careggi SOD Immunologia e Terapie Cellulari Allergologia Molecolare – 18 Aprile 2013fassio.filippo@gmail.com