Presentazione Congresso CEFAR su allergologia molecolare e microarray ISAC

1. Corso di Aggiornamento Con il patrocinio di
XX^ Edizione Corso CEFAR SIBioC
LE PROTEINE: Società Italiana di Biochimica Clinica
e Biologia Molecolare Clinica
dal laboratorio alla clinica
20 ottobre 2011 Firenze
Valutazione della introduzione della diagnostica
Microarray in allergologia dal punto di vista tecnico-
analitico e possibili risvolti clinici
Maria Totaro Filippo Fassio
AOU-Careggi
Immunologia e Terapie Cellulari
Direttore Prof. E. Maggi

2. Diagnostica allergologica - Cronologia
Diffusione
Caratterizzazione Primi allergeni Pannelli con
mondiale
delle IgE clonati allergeni
ImmunoCAP
ricombinanti
ISAC ®
Provocation
test RAST* Primo biochip con
determinanti allerg.
1880 1967 1988-91 1995-1999 2000 2007
In-vivo testing
In-vitro testing
Component-resolved diagnosis

3. Cos'è un biochip ?
E’ un supporto solido sul quale
differenti molecole native e
ricombinanti sono state fissate in
una precisa disposizione così da
formare un array microscopico.
Questo permette il monitoraggio
simultaneo e in parallelo delle
Interazioni biologiche con
piccole quantità di campione e di
reagenti.
~ 200 µm
Array = disposizione, matrice
Micro = microscopica
~ 100 picogrammi allergene / spot
> 100 allergeni / cm²

4. Component Resolved Diagnosis
Gli estratti allergenici
contengono sia molecole
allergeniche che non
allergeniche e sono difficili da
standardizzare.
I cosidetti pan-allergeni sono
presenti in diverse fonti
allergeniche e inducono cross-
reattività tra gli estratti
allergenici.
Le singole molecole
allergeniche sono markers di
una reale sensibilizzazione nei
confronti di una fonte
allergenica.

5. Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
Il microarray: nella pratica…
Allergopatie respiratorie
Allergia al latex
Allergeni meno frequenti
Allergia alimentare

6. Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
CRD: allergopatie respiratorie…
Discriminare tra co-sensibilizzazione e cross-reazione
Identificare i pazienti più idonei all’immunoterapia

7. Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
CRD: allergopatie respiratorie…
Michele, 47 anni, soffre da alcuni anni di
rinocongiuntivite nel periodo primaverile. Il suo
medico lo invia all’allergologo, che effettua prick test.
Graminacee +++
Betulla ++
Olivo ++

8. Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
CRD: allergopatie respiratorie…
…co-sensibilizzazione o cross-reazione?

9. Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
CRD: questa “ovviamente” è…
Co-sensibilizzazione!
(Graminacee, Olivo, Betulla)

10. Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
CRD: oppure no?
Cross-reazione!
(solo Graminacee con Phl p 12: Profilina)

11. Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
Il microarray: nella pratica…
Allergopatie respiratorie
Allergia al latex
Allergeni meno frequenti
Allergia alimentare

12. Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
CRD: latex…
Marta, paziente di 38 aa, lavora come cuoca.
Soffre di asma bronchiale di grado lieve, con sporadici
attacchi d’asma in vari momenti della giornata, sia a casa
che al lavoro.
Marta sa già di essere allergica ad alcuni pollini ed
all’acaro della polvere, ma….

13. Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
CRD: latex…

14. Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
Il microarray: nella pratica…
Allergopatie respiratorie
Allergia al latex
Allergeni meno frequenti
Allergia alimentare

15. Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
CRD: allergeni meno frequenti…

16. Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
CRD: allergeni meno frequenti…
Franco, 44 anni, con rinite ed asma bronchiale, giunge all’osservazione per
recente peggioramento della sintomatologia
Continua la tp già in atto da 3 anni con CCS nasali ed associazione CCS +
beta2agonista inalatorio, che fino a pochi mesi prima aveva garantito un ottimo
controllo della sintomatologia
Il PT conferma le precedenti polisensibilizzazioni a pollini ed acari, senza
sostanziali modifiche
Il paziente nega sostanziali modifiche al proprio stile di vita
(casa,lavoro, sport, hobbies…)

17. Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
CRD: allergeni meno frequenti…
Sarebbe emersa la positività senza un test
multiplex?

18. Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
Il microarray: nella pratica…
Allergopatie respiratorie
Allergia al latex
Allergeni meno frequenti
Allergia alimentare

19. Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
CRD: allergia alimentare…
Una giovane paziente si rivolge allo specialista
allergologo a causa di episodi recidivanti di
angioedema...
gli episodi erano iniziati fin dall’infazia ed erano
scatenati dall’assunzione di frutta con guscio...

20. Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
CRD: allergia alimentare…
Il prick test è risultato positivo per:
• Nocciola (+++)
• Noce (+/-)
• Pinolo (+/-)

21. Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
CRD: allergia alimentare…
Dosaggio IgE totali (RIST): 37 kU/l
Dosaggio IgE specifiche per inalanti: tutte < 0.10 kUI/l
Dosaggio IgE specifiche per alimenti:
• Nocciola 3,07 kUI/l
• Noce 0,12 kUI/l

22. Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
CRD: allergia alimentare…
Cor a 1: Bet v 1-homologue (PR-10)
Cor a 2: profilina (omologo Bet v 2)
Cor a 8: LTP
Cor a 9: 11S globulin (omologo Ara h 3)

23. Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
CRD: allergia alimentare…
A cosa è allergica la paziente?
Cor a 1 Cor a 2
Cor a 8 Cor a 9

24. Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
CRD: allergia alimentare…
…ed il risultato esatto è…
Negativo!
…confermato su ImmunoCAP
(Cor a 1, Cor a 8, Bet v 2)

25. Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
CRD: allergia alimentare…
…perché 103 molecole sono molte…
…ma in natura ce ne sono DI PIU’…

26. Università degli Studi di Firenze SOD Immunologia e Terapie Cellulari
Ed alla fine…
…alla prossima puntata…

27. Università degli Studi di Firenze SOD Immunoallergologia Winter School SIAIC 20 Febbraio 2010
fassio.filippo@gmail.com
Grazie!