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Embrion de pollo
 

Embrion de pollo

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Presentación de Microbiología, Antecedentes y Metodoligia para la práctica de Embrión de Pollo, Fes Zaragoza, UNAM....

Presentación de Microbiología, Antecedentes y Metodoligia para la práctica de Embrión de Pollo, Fes Zaragoza, UNAM.
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    Embrion de pollo Embrion de pollo Presentation Transcript

    • UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO
      FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA
      Laboratorio de Microbiología General II
      Embrión de Pollo
      INTEGRANTES
      Luis Islas Jorge
      Martínez Rojas Hugo
      Ponce de León VeazNoemi
      Vargas Cisneros Berenice
      Vargas Olvera Mireya
      Equipo 3, 2752
    • OBJETIVOS
      • Adiestrar al alumno en el manejo de la técnica inoculación de embrión de pollo por las vías más utilizadas.
      • El alumno conocerá las diversas partes del embrión de pollo de 9 días de inoculación.
    • Efecto Citopático
    • Efecto citopático
      Se denomina efecto citopático a los cambios bioquímicos y moleculares, morfológicos y de viabilidad celular, visibles a microscopía óptica, causados durante el ciclo de replicación viral.
      Aunque todos los virus líticos producen efecto citopático, puede observarse una gran diversidad de manifestaciones
    • Efecto citopático
      La mayor parte de las observaciones del ECP se han realizado en células infectadas en cultivo, en las que se aprecia: pérdida de adherencia al sustrato, inhibición por contacto, redondeamiento celular, formación de sincitios, cuerpos de inclusión citosólicos, transformación celular, lisis, etc.
    • Lisis
      Es la conclusión del conjunto de alteraciones celulares que se producen, secuencial o simultáneamente en la célula infectada, liberando finalmente al medio las nuevas partículas virales.
    • Cuerpos de inclusión
      Muchos tipos de virus inducen la aparición de estructuras membranosas en el citoplasma, en algunos casos en forma de grandes vacuolas citoplasmáticas o pequeñas.
    • Sincicios
      Los sincicios son grupos de células fusionadas apreciables como una masa celular multinucleada
    • Transformación celular
      Es una alteración en el crecimiento normal de las células en cultivo con evidentes manifestaciones morfológicas.
      Se asocia a una serie de cambio moleculares y está especialmente ligada a virus que insertan su genoma en el de la célula infectada, pudiendo causar mutagénesis insercional al interrumpir antioncogenes o activar pro-oncogenes, o alterando la correcta regulación de la expresión génica celular.
    • Alteraciones bioquímicas
      Las alteraciones bioquímicas son muy diversas y específicas de cada virus, si bien pueden señalarse las más importantes a nivel general.
      Algunos virus son capaces de mostrar esta inhibición en etapas tempranas de la infección pero la mayoría de los virus animales lo hacen en etapas tardías. El efecto más drástico suele producirse en la inhibición de la expresión de proteínas celulares por traducción preferente o casi exclusiva de proteínas virales.
    • Alteraciones bioquimicas
      1.- Inhibición de la síntesis de proteínas celulares
      2.- Inhibición de la síntesis de DNA celular
      3.- Inhibición de la síntesis de RNA celular
    • Alteraciones de las membranas celulares
      Cambios en la actividad de enzimas presentes en las membranas.
      Modificaciones en la funcionalidad del sistema vesicular.
      Aumento de la permeabilidad de la membrana plasmática.
    • Técnicas de Cultivo
    • Técnicas para el cultivo de virus
      Los sistemas celulares utilizados para propagar los virus en el laboratorio son:
      1.Animales de experimentación
      2.Embriones animales
      3.Cultivos celulares artificiales
    • Animales de experimentación
      • La inoculación en animales de experimentación de muestras clínicas o de virus para su aislamiento o propagación.
      • Poco usada
      • Se emplea únicamente cuando se trata de propagar virus cuya replicación en los otros sistemas no es posible.
      • Los animales más utilizados:
      monos, los cobayos y los ratones
      lactantes
    • Embriones de animales 
      • Los más utilizados son los embriones de pollo
      • los huevos fecundados se incuban hasta el momento de su inoculación que suele oscilar entre 6 y 14 días.
      • Las inoculaciones, que pueden realizarse en diversas zonas del embrión (cavidad amniótica, saco vitelinol etc.).
    • Cultivos celulares
      Se cultivan células de mamífero en una sola capa (monocapa) sobre la superficie de un recipiente de plástico y son inoculadas con la muestra estudiada.
      Después se observan a diario los cambios inducidos por virus (efectos citopáticos), a veces tan característicos que no se requiere de más investigación para informarlos, sin embargo, a menudo son necesarias algunas pruebas confirmativas, como inmunofluorescencia.
    • Tipos de cultivos celulares
      • Líneas celulares semicontinuas : Estas células derivan de tejido fetal humano o animal. Poseen el cariotipo diplode normal y, por tanto, es posible utilizarlas en la producción de vacunas. Tienen un periodo de vida limitado y sólo es posible hacer subcultivos de unas 50 generaciones.
      • Líneas celulares continuas: Las más utilizadas para el diagnostico. Derivan de un tumor o de células normales que, después de cultivos repetidos, se transforman tanto que actúan como células derivadas de tumor, es decir, poseen un número anormal de cromosomas, Estas células pueden propagarse de manera indefinida.
      • Cultivos de linfocitos: Los linfocitos B se dividen y continúan la división de manera indefinida cuando están infectados por VEB. Esta característica es conocida como inmortalización y se puede aprovechar como marcador del aislamiento de VEB.
      Los linfocitos T crecen en presencia de una linfocina, IL-2, el descubrimiento de este fenómeno ha sido fundamental para el estudio de los retrovirus humanos (VIH y HTLV) que logran propagarse en cultivos celulares con la formación de células gigantes sincitiales.
    • Importancia
      La inoculación animal sigue siendo un método de gran valor para estudiar:
      La oncogénesis viral
      La patología de los padecimientos virales
      La respuesta inmune a los virus
      El efecto de los factores ambientales sobre infecciones virales
    • Cuerpo de Negri.
      Corpúsculos hallados por Negri en las células del sistema nervioso central de los animales muertos de rabia; son específicos de esta enfermedad. Se trata de reacciones de la célula contra el virus. No se hallan en los animales inoculados con la rabia experimental.
    • Cuerpos de Negri por Rabdovirus
      El virus de la Rabia en el cerebro de animales infectados produce Cuerpos de Negri de varias formas (menores de 1 micrómetro de diámetro, con masas redondas u ovales, y cintas de 2 a 10 micras de diámetro).
      Estos son inclusiones eosinofílicas intracitoplasmáticas formadas por agregados de nucleocápside en las neuronas de cerca de 50 a 80% de los humanos infectados.
    • Histopatología de la rabia, cerebro. Cuerpos de Negri característicos están presentes con una célula de Purkinje del cerebelo en este paciente que falleció por rabiaHistopatología de la rabia, cerebro. Cuerpos de Negri característicos están presentes con una célula de Purkinje del cerebelo en este paciente que falleció por rabiaVVV
    • Embrión de Pollo
    • EMBRIÓN DE POLLO
      Se reconoce el embrión que esta vivo porque en la transiluminación se ven como telaraña
      venas que forman la membrana corioalantoidea y se observa que se desplaza un punto negro intermitente (el ojo).
    • EMBRIÓN DE POLLO
      Al morir, los vasos se desintegran y este yace fijo al polo superior del huevo.
      A medida que aumenta de tamaño disminuye el volumen de los líquidos extraembrionarios
    • CULTIVO VIRAL EN HUEVO EMBRIONADO
      UTILIDAD: Es una fuente de tejido vivo conveniente y fácil de manipular que se utiliza en la propagación, titulación e identificación de virus, así como en la preparación de algunas vacunas virales.
      Se emplean huevos con 5 a 14 días de incubación, según la vía de inoculación:
      Membrana corioalantoidea
      Cavidades alantoidea y amniótica
      Saco vitelino
      Intracerebral
      Endovenosa.
    • TIPOS DE VIRUS QUE SE PUEDEN INOCULAR EN EMBRION DE POLLO
    • Embrión de pollo
    • EMBRIÓN DE POLLO
    • Vías de Inoculación
      Selectividad que tienen algunos virus por determinados tejidos
    • Inoculación por saco alantoideo
      Con colorante se observa: liquido alantoideo, albumina y cámara de aire teñidos
      Liquido alantoideo: virus hemaglutinantes o producción de hemaglutininas
      Embrión de 9-12 días, inoculo de 0.1-0.2ml
    • Inoculación por saco alantoideo
    • Inoculación en saco amniótico
      Con colorante: líquido amniótico, cámara de aire
      Primoaislamiento de cepas de influenza
      Embrión de 7-15 días, inoculo de 0.1-0.2ml
    • Inoculación en saco amniótico
    • Inoculación en saco vitelino
      Con colorante: Saco vitelino, Cámara de aire
      Cultivo de clamidias y ricketsias
      Embriones de 5-8días, inoculo de 0.2-1ml
    • Inoculación en saco vitelino
    • Inoculación de membrana corioalantoidea (MCA)
      Con colorante: membrana corioalantoidea
      Permite cuantificar aquellos grupos virales que producen lesiones localizadas
      Embrion de 10-12 días, inoculo de 0.1-0.5ml
    • Inoculación de membrana corioalantoidea (MCA)
    • Embrión de pollo
      La infección puede producir una lesión tisular local conocida como pústula (característico de virus)
      A veces se inyecta el virus directamente en el embrión en desarrollo: IV, intraperitoneal, o intracerebral.
      Tambien influye: la dilución, la cantidad del inóculo, la temperatura y tiempo de incubación tras la inoculación
    • Metodología
    • Metodología
    • Metodología(Membrana corioalantoidea)
    • Metodología
    • Metodología (saco vitelino)
    • Metodología ( cavidad alantoidea)
    • Metodología (cavidad amniotica)
    • Bibliografía
      Jean D. Acton. «Virología». Interamerica. Mexico. 1977 pp. 13-17