17. ESTABLECIMIENTO DE LOS
CULTIVOS:
a) Explante utilizado
§ § Bulbos procedentes de campo.
§ § Se corta el bulbo en 4 porciones y
luego se eliminan las catáfilas más
externas. Se siembra la porción basal (>1
cm) del bulbo conteniendo yemas
axilares.
§ § Variedades empleadas: Valcatorce
INTA, Refinta INTA.
18. B) DESINFECCIÓN DEL
EXPLANTE
1. Dos lavado con H20 corriente con 0.04
% Tween.
2. Alcohol 70º durante 1 minuto
3- Desinfección con ClONa (lavandina
comercial: 55,5 g.L-1) 30% 1 hora
adicionado con 0.04% de Tween 20 en
agitación.
4- En condiciones de asepsia, enjuagar
tres veces con agua destilada estéril, 2
minutos cada uno.
19. c) MEDIO DE CULTIVO PARA EL
ESTABLECIMIENTO: (EN TUBOS)
Macronutrientes de Murashige-Skoog
(1962):
(NO3)2NH4 1.650 mg.L-1,
NO3K 1.900 mg.L-1
SO4Mg. 7H20 370 mg.L-1
PO4H2K 170 mg.L-1
SO4Fe. 7H20 27,85 mg.L-1
EDTA Na2. 37,3 mg.L-1
20.
21. ACLIMATACIÓN:
Se lleva a cabo en condiciones de
invernáculo a 20- 25 ºC y 50 % humedad
relativa. Las plantas provenientes del
cultivo in vitro son sumergidas en una
solución de Captan 2 g.L-1 y Benomil 0,5
g.L-1. Con este procedimiento se elimina
el agar de las raíces y a su vez se somete
a las plantas a un tratamiento preventivo
de fungicidas. Posteriormente, se llenan
macetas con vermiculita o perlita estéril.
22. Separan las plantas en forma
individual y se plantan. Durante
los primeros 5 días las macetas se
ubican debajo de un túnel
plástico transparente con el
objeto de mantener la humedad
relativa cerca del 100%.
23.
24. Luego se va levantando el
plástico gradualmente para
lograr la aclimatación progresiva
a la humedad relativa del
ambiente Luego de 4- 5 semanas
las macetas se transfieren a
condiciones a campo con tela
media sombra por 1-2 semanas y
luego al suelo definitivo.
25.
26. RENDIMIENTO DE ESTE PROTOCOLO:
En 90 a 120 días de cultivo in vitro se
obtiene una tasa de multiplicación de 9-
12 plantas/explanto y 36 a 48
plantas/bulbo.
OBSERVACIONES:
La aclimatación de la cebolla a
condiciones ex vitro tiene un porcentaje
de éxito del orden del 90-95%.
