Inmunohematologia

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Inmunohematologia

  1. 1. FACULTAD DE BIOANALISIS LIC. QUIMICA CLINICA. NOMBRE: MIGUEL ANGEL ORTIZ GIL. INMUNOHEMATOLOGIA. CATEDRATICA: Q.C. RUTH ESTRADA MARQUEZ DIVULGACION CIENTIFICA DE LA QUIMICA CLINICA OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 1
  2. 2. www.quimicaclinicauv.blogspot. com CONTENIDO: 1. “DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO ABO Y RH” 2. DETERMUNACION DE SUBGRUPOS 3. DETERMINACION DE RH 4. DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO POR TECNICA DE GEL 5. PRUEBA DE COMPATIBILIDAD 6. PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGÍNEA (TÉCNICA SALINA) 7. PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUÍNEA (TÉCNICA ALBUMINA) 8. PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS. OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 2
  3. 3. 9. DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO 10.IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES Practica No. 1 “Determinación de grupo sanguíneo ABO y Rh” Introducción: Un grupo sanguíneo es una forma de agrupar ciertas características de la sangre que dependen de los antígenos presentes en la superficie de los glóbulos rojos y en el suero de la sangre. Esta ha sido la base para que se pueda clasificar a la sangre en cuatro grupos en cuanto al sistema ABO: grupo A, grupo AB, grupo B y grupo O; y en dos con respecto al sistema Rh: Rh negativo o Rh positivo. Lo que a la postre trae ocho grupos posibles por las combinaciones posibles entre ambos sistemas. Las transfusiones de sangre entre grupos incompatibles pueden provocar una reacción inmunológica que puede desembocar en muerte. Las personas con sangre del tipo A tienen glóbulos rojos que expresan antígenos de tipo A en su superficie y anticuerpos contra los antígenos B en el suero de su sangre. Las personas con sangre del tipo B tiene la combinación contraria, glóbulos rojos con antígenos de tipo B en su superficie y anticuerpos contra los antígenos A en el suero de su sangre. Los individuos con sangre del tipo O no expresan ninguna de los dos antígenos (A o B) en la superficie de sus glóbulos rojos pero pueden fabricar anticuerpos contra ambos tipos, mientras que las personas con tipo AB expresan ambos antígenos en su superficie y no fabrican ninguno de los dos anticuerpos. A causa de estas combinaciones, el tipo O puede ser transfundido sin ningún problema a cualquier persona con cualquier tipo ABO y el tipo AB puede recibir de cualquier tipo ABO. Los donantes de sangre y los receptores deben tener grupos compatibles. El grupo O- es compatible con todos, por lo que quien tiene dicho grupo se dice que es un donante universal. Por otro lado, una persona cuyo grupo sea AB+ podrá recibir sangre de cualquier grupo, y se dice que es un receptor universal. OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 3
  4. 4. Material y equipo: • 40 tubos de ensayo de 12 x 75 • 4 pipetas Pasteur • 1 gradilla de unicel • 3 tubos Vacutiner con muestra sanguínea anticoagulada con EDTA • 1 tubo Vacutainer con muestra sanguínea sin anticoagulante • Antisuero Anti-A, Anti-AB, Anti-B y Anti-D * • Eritrocitos con antígenos conocidos A1, A2, B y O • 1 centrifuga *Reactivos: Antisuero A monoclonal Lafon Antisuero AB monoclonal Lafon Lote:9662 Lote: 8764 Cad: 09NOV08 Cad: 31OCT08 Aspecto: transparente Aspecto:transparente Color: azul Color: incoloro Antisuero B monoclonal Lafon Antisuero D monoclonal NOVACLONE Lote: 9762A Lote: NDMG04305 Cad:09NOV08 Cad: 29MAR08 Aspecto: transperente Aspecto: transperente Color: amarillo Color: incoloro Técnica: Método directo 1. Centrifugar los 3 tubos Vacutiner con muestra sanguínea anticoagulada con EDTA y el tubo Vacutainer con muestra sanguínea sin anticoagulante, a una velocidad de 2500 r.p.m. por 10 minutos, pues se utilizaran plasma y eritrocitos por separado. 2. Rotular los tubos de ensayo de la siguiente manera: en cada tubo rotular dos números en la muestra, uno correspondiente del 1 al 4, el otro numero corresponde al que ya traía la muestra, y con el tipo de antisuero: Anti-A, Anti-AB, Anti-B ó Anti-D. Ejemplo: 1, 13, Anti-A; 1,13, Anti-AB, etc. El procedimiento se repite para las tres muestras restantes. 3. En cuatro tubos limpios hacer una dilución de 2-5 % de eritrocitos con agua destilada, de cada muestra. La dilución tomara un color rojo tenue, similar a la sangría. 4. Colocar en cada tubo rotulado una gota de la dilución de eritrocitos preparada y una gota de antisuero, según corresponda. 5. Al concluir lo anterior, llevar los tubos a la centrifuga y centrifugar por solo 15 segundos a una velocidad de 1000 r.p.m. para observar mejor la reacción antigeno-anticuerpo (formación de un botón). OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 4
  5. 5. 6. Por ultimo leer los tubos, observando si hubo reacción o no, y correlacionando los datos obtenidos con el método inverso para determinar el grupo sanguíneo. Metodo inverso 1. Centrifugar los 3 tubos Vacutiner con muestra sanguínea anticoagulada con EDTA y el tubo Vacutainer con muestra sanguínea sin anticoagulante, a una velocidad de 2500 r.p.m. por 10 minutos, pues se utilizaran plasma y eritrocitos por separado. 2. Rotular los tubos de ensayo de la siguiente manera: en cada tubo rotular dos números en la muestra, uno correspondiente del 1 al 4, el otro numero corresponde al que ya traía la muestra, y con el tipo de eritrocitos con antigeno conocido: A 1, A2, B y O. Ejemplo: 1,13, A1; 1,13, A2; etc. El procedimiento se repite para las tres muestras restantes. 3. Colocar en cada tubo rotulado dos gotas ya sea de plasma o suero según corresponda y una gota de los eritrocitos con antigeno conocido. 4. Al concluir lo anterior, llevar los tubos a la centrifuga y centrifugar por solo 15 segundos a una velocidad de 1000 r.p.m. para observar mejor la reacción antigeno-anticuerpo (formación de un botón). 5. Por ultimo leer los tubos, observando si hubo reacción o no, y correlacionando los datos obtenidos con el método inverso para determinar el grupo sanguíneo. Resultados: Muestra Método directo Método inverso Grupo y Rh Anti-A Anti-AB Anti-B Anti-D A1 A2 B O 1 - - - + + + + - O+ 2 - + + + + + - - B+ 3 + + - + - - + - A+ 4 + + + + + - - - AB + Interpretación: Para el método directo la lógica fue: si en un tubo hay formación de botón (reacción antigeno- anticuerpo) quiere decir que los eritrocitos ensayados tienen el antigeno que reacciona con los anticuerpos presentes en el antisuero para ese tubo; y si no presentan aglutinación querrá decir que no corresponde el antigeno del eritrocito con el anticuerpo del antisuero, o que el antigeno esta ausente en esos eritrocitos. De ahí que pueda observarse que una muestra sanguínea muestre un solo tipo de antígenos del sistema ABO sobre su membrana (A o B), ambos antígenos (AB), o ninguno de ellos (O). lo mismo sucede para el sistema Rh ; al presentarlo (Rh +) o no (Rh -). Para el método inverso el razonamiento fue: si en un tubo hay formación del botón (reacción antigeno-anticuerpo) quiere decir que el plasma del paciente ensayado tiene los anticuerpos que reaccionan con los eritrocitos con antigeno conocido, los cuales sirven de reactivo para esta prueba. Por lo tanto una reacción positiva en este método definitivamente indica que el paciente no tiene eritrocitos con antígenos que reaccionarían con los anticuerpos de su plasma. De ahí que el método se le nombre inverso. OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 5
  6. 6. Conclusión: Concluyo que Para realizar una transfusión sanguínea se debe tomar en cuenta la sangre del donante y la del receptor. Los individuos pertenecientes al grupo O pueden donar sangre a cualquier otro grupo sanguíneo, porque sus eritrocitos carecen de antigeno que puedan ser reconocidos por la sangre del receptor. Las personas del grupo AB pueden recibir sangre de cualquier grupo, ya que carecen de anticuerpos PRACTICA Nº 2 DETERMUNACION DE SUBGRUPOS Anti- A1Lectina (Dolichos biflorus) Lectina de grupo sanguíneo INTRODUCCION: El sistema de grupos sanguíneos ABO sigue siendo el primero a tener en cuenta en el momento de realizar una transfusión de sangre. Los antígenos A y B son productos génicos fácilmente detectables y constituyen marcadores genéticos de gran valor. Entre los individuos A, se distinguen 2 categorías: A1y A2. La diferenciación entre ambas se realiza mediante la utilización de anticuerpos monoclonales y lectinas específicas de grupo sanguíneo Dolichos biflorus (anti A1) y Ulex europaeus (anti H). OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 6
  7. 7. Uso: Inmucor anti-A1 Lectin se utiliza para diferenciar células rojas A1 de otros subgrupos A en pruebas en tubo o en placa. MATERIAL Y EQUIPO: • Tubos de ensaye de 10/75 mm. • Cronometro • Marcador • Centrifuga serológica MUESTRA BIOLOGICA: • Células rojas de donador o paciente REACTIVO: • Inmucor anti-A1 Lectin en gotero MARCA: INMUCOR. INC LOTE: SN2132 CADUCIDAD: 2007-12-14 TECNICA: 1. Adicione una gota de anti-A1 a tubos adecuadamente marcados. 2. Adicione una gota de una suspensión de eritrocitos bajo prueba del 3-5% en salina. Mezcle completamente el contenido del tubo. 3. Centrifugar de 15-30 minutos de 900-1000 rpm. 4. Agite suavemente el tubo y resuspenda el botón celular. Examine las reacciones resultantes macroscópicamente. Registre resultados. RESULTADOS ESPERADOS DE TIPIFICACION GRUPO Anti-A Anti-A1 Porciento SANGUINEO A1 + + 80% DE TODOS LOS GRUPOS A A1b + + 80% DE TODOS LOS GRUPOS AB A2 + 0 20% DE TODOS LOS GRUPOS A A2B + 0 20% DE TODOS LOS GRUPOS AB A1NT + +DEBIL NO COMUN A3AM1AX1 + DEBIL 0 NO CUMUN OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 7
  8. 8. ANTI-H (LECTINA) Ulex europeaus Para la determinación de del estado secretor y tipificación de las células rojas INTRODUCCION: La mayoría de los grupos sanguíneos ABO que se determinan en el banco de sangre cumplen con las leyes establecidas de antígenos y anticuerpos recíprocos para ese sistema. Los anticuerpos del sistema ABO existen en el individuo desde el momento en que son capaces de tener una respuesta inmunológica y se producen contra los antígenos A y B. Los subgrupos son fenotipos ABO que difieren en la cantidad de antígeno presente en los eritrocitos y en la saliva de los secretores. Se hallan con mayor frecuencia y tienen más relevancia clínica los de A, que los de B. Al utilizar lectinas se definen los subgrupos: A1 y A2: con el extracto de Dolichos biflorus se aglutinan los eritrocitos A1, pero no los de A2; y el anti H, semilla Ulex europeus, aglutina eritrocitos que tienen antígeno H. MATERIAL Y EQUIPO: • Tubos de ensaye de 10/75mm. • Cronometro • Marcador • Centrifuga serológica MUESTRA BIOLOGICA: • Células rojas de donador o paciente REACTIVO: • Inmucor anti-H (Lectina) en gotero MARCA: GANMA. LOTE: ML1581 CADUCIDAD: 2007-11-14 TECNICA: OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 8
  9. 9. 1. Adicione una gota de una suspensión de eritrocitos bajo prueba del 3-5% en salina en tubos adecuadamente marcados. 2. Adicione dos gotas de anti-H Lectina y mezcle completamente el contenido del tubo. 3. incube durante 5 minutos a temperatura ambiente. 4. Centrifugar de 15-30 minutos a 1000 rpm. 5. Agite suavemente el tubo y resuspenda el botón celular. Examine las reacciones resultantes macroscópicamente. Registre resultados. INTERPRETACIÓN: PROBLEMA: ANTI A1 ANTI H RESULTADO (ANTI A2) SUBGRUPO: PACIENTE 1 + - ANTI A1 PACIENTE 2 - + ANTI A2 • Prueba positiva: Aglutinación de las células rojas. Nota: La hemólisis no debe interpretarse como un resultado positivo ya que esto puede indetificarse como contaminación del reactivo. • Prueba negativa: Ausencia de aglutinación de las células rojas. CONCLUSIONES: Concluyo que para realizar una transfusión sanguínea se debe tomar en cuenta los subgrupos del donante y del receptor. Los subgrupo con mayor frecuencia y tienen más relevancia clínica los de A, que los de B. Y se identifican por medio de utilizar lectinas. Los subgrupos A más importantes son: A1 y A2. PRACTICA # 3 DETERMINACION DE Rh INTRODUCCIÓN: El factor Rh es una clase de proteína que se encuentra en los glóbulos rojos de la sangre, cuando alguien tiene esa proteína se le considera “Rh Positivo”. Cuando no la tiene es “Rh Negativo”. El factor Rh es hereditario y se transmite en dos genes. El Factor Rh positivo es dominante, es decir si una persona tiene un gen positivo y otro negativo, su factor Rh será positivo. Esta prueba es importante en el diagnostico y estudio de la eritroblastosis fetal, en la que los glóbulos rojos del niño se encuentran sensibilizados con OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 9
  10. 10. anticuerpo materno. Es útil también en el diagnostico de la anemia hemolítica adquirida (anticuerpos sobre los glóbulo rojos del mismo paciente), así como la determinación de eritrocitos sensibilizados en sangre usados para transfusión. Las dos clasificaciones más importantes para describir grupos sanguíneos en humanos son los antígenos y el factor Rh. Las transfusiones de sangre entre grupos incompatibles pueden provocar una reacción inmunológica que puede desembocar en hemólisis, anemia, fallo renal, shock, o muerte. MATERIAL: • Tubos de ensayo de 12 x 75 • Pipetas Pasteur • Gradilla EQUIPO: • Centrifuga MUESTRA BIOLÓGICA: • Eritrocitos lavados 3-5% del paciente REACTIVOS: • Antisuero Anti-D • Suero anti globulina humana. • Suero reactivo control Antisuero D monoclonal NOVACLONE Lote: NDMG04305 CAD: 29MAR08 Aspecto: transparente Color: incoloro Suero anti globulina Humana Lote: 405 CAD: 06-NOV-08 Aspecto: transparente Color: verde Reactivo control GAMMA-CLONE Lote: GCM115-3 CAD: 2008-12-08 Aspecto: transparente Color: incoloro TÉCNICA: Determinación de Rh OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 10
  11. 11. • Prepare una suspensión de glóbulos rojos al 3- 5 % en solución salina. Los glóbulos deben ser lavados previamente 5 veces con el objeto de eliminar las proteínas del plasma. • Rotular 3 tubos, para la previa identificación de Rh. • Ponga 1 gota de la suspensión lavada en cada tubo. • Añada una gota de anti suero D monoclonal. • Mezcle y centrifugue 15 seg. Y observe si hay aglutinación. Preparación del control negativo • Ponga una gota de eritrocitos lavados al 3-5 % • Añada una gota de reactivo control. • Centrifugue 15 seg. y observe si hay aglutinación Detección de sangre Du Nota: esta técnica se le realizo a los tubos problemas que no aglutinaron . • Los tubos que no tuvieron aglutinación en la determinación de Rh se incuban 15 min, y posteriormente se lavan 3 veces con sol. Salina • Previamente lavados se le agregan 2 gotas de suero de COOMBS. • Centrifugar 15 seg y observar, desprender boton ESQUEMAS: RESULTADOS: problemas Aglutinación resultado 2 positiva Rh + 10 negativa Rh - 11 negativa Rh - OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 11
  12. 12. Paciente 2 código 021612 plata Lugo Javier Paciente 10 código 021620 Hernández López Guillermo Paciente 11 código 021621 camarillo Sonia rebeca INTERPRETACIÓN: Para el primer método: Aglutinacion: Rh positivo No aglutinación: realizar prueba de detección de sangre Du. Detección de sangre Du Aglutinación. D débil (Du positivo) No aglutinación: Rh negativo CONCLUSIONES: Con el descubrimiento del sistema Rh, se denominan Rh positivos los hematíes que son aglutinados por este anticuerpo y tienen, por tanto, el antígeno Rh en la superficie. Se denominan Rh negativos los que no son aglutinados y que, por tanto, no poseen el antígeno Rh en su superficie. De la misma manera que en el sistema ABO, en el sistema Rh no se puede transfundir el antígeno Rh a las personas que no lo tienen, ya que podría originar la producción de anticuerpos Rh en el receptor. Los sujetos Rh negativos sólo podrán recibir sangre de donantes Rh negativos. PRACTICA 4 INMUNOHEMATOLOGIA DETERMINACION DE GRUPO SANGUINEO POR TECNICA DE GEL INTRODUCCION: El sistema utilizado en inmunohematología para investigar e identificar antígenos y anticuerpos antieritrocitarios. Es de tecnología de microtipificación en gel se basa en la separación por tamaño de los eritrocitos aglutinados, durante un proceso de centrifugación en un gel poroso. Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequeños quedan distribuidos a lo largo de la columna. OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 12
  13. 13. Esta técnica nos permite que estandaricemos la lectura de la reacción antígeno- anticuerpo con facilidad y repetitividad. Así como la estandariza del uso de reactivos, tiempos y lecturas disminuyendo sustancialmente la influencia de la mano de operador. OBJETIVO: determinación de los antigenos del sistema ABO,Rh (D) y determinacion del grupo serico , en tecnica de gel. FUNDAMENTOS: El principio del metdo se basa en la tecnica de gel descrita por Y. Lapierre para la deteccion de las reacciones de aglutinacion de los hematies. La aglutinacion se produce al entar en contacto los eritrocitos con los anticuerpos correspondientes. La tarjeta DG gel es un soporte de plastico constituidos por 8 microtubulos. Cada microtubulo esta formado por una columna y una camara de dispersion/incubacion. La tecnología de microtipificación en gel se basa en la separación por tamaño de los eritrocitos aglutinados, durante un proceso de centrifugación en un gel poroso. Los eritrocitos van perdiendo elasticidad en sus membranas de forma que los aglutinados grandes quedan atrapados en la zona superior y los pequeños quedan distribuidos a lo largo de la columna. MATERIAL  Pipeta automática 10 ul, 50ul, 1 ml.  Puntas de pipeta desechable  Tubos de vidrios  DEG sol  Centrifugas para tarjetas DG gel  Hematies de reactivos para grupo inverso. MUESTRA BIOLOGICA: Células rojas de donador o paciente REACTIVO: Placa de gel Reactivo de gel sol OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 13
  14. 14. TECNICA 1.- determinacion de los antigenos del sistema ABO/Rh. -preparar una suspension de hematies al 5 % de DG sol. Asegurar la resuspencion de lso hematies antes de utilizar. Anadir en cada microtubulos indicados 10 ul de una suspension de hematies al 5%. 2.- determinacion de l grupo serico. -homogenizar los hematies recativos A1/B - dispersar el microtubulo N /a1 50 ul de hematies reactivos A1 en un microtubulo N/b 50 ul de hematies reactivos B. -añadir suero o plasma. 3.- centrigugar en centrifuga para DG sol. Leer los resultados. RESULTADOS NEGATIVO - Banda de hematies al fondo de la columna, resto de la columna sin aglutinados +/- Escasoa glutinados de pequeño tamaña d ela columna. 1+ Algunos aglutinados pequeñso en la columna POSITIVO 2+ aglutinados pequeñso en la columna o mediano a lo largo de la columna 3+ Banda superior de aglutinado 4+ Banda de aglutinados en la parte superior de la columna. DP Doble poblacion (doble banda de hematies , en el fondo y en la parte superior. INTERPRETACION DE RESULTADOS. GRUPO HEMATICO GRUPO SERICO MICROTUBUBO MICROTUBUBO ABO microtubo microtubo microtubo microtubo N+ a1 N+ B GRUPO A B AB CTL 0 0 0 0 + + 0 + 0 + 0 0 + A 0 + + 0 + 0 B + + + 0 0 0 AB SISTEMA Rh Micrutubo D Micrutubo Micrutubo INTERPRETACION D” CTL + + 0 D positivo 0 0 0 D negativo 0 + 0 D débil parcial + 0 0 RESULTADO E INTERPRETACION DE LA PRACTICA OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 14
  15. 15. Resultado; A+ CONCLUSION Concluyo que esta técnica, es una forma de estabilizar las reacciones de aglutinación y reducir los resultados falsamente negativos a consecuencia de una técnica inapropiada, asi como crear un método de interpretaciones sencillas y constantes. Practica No. 5 “Prueba de compatibilidad” Introducción: Para requerir una óptima transfusión actualmente se requiere de aceptaciones inmunológicas receptor - donante, ya que la transfusión de sangre o la de sus componentes celulares de un donante a un receptor es una forma de transplante. OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 15
  16. 16. La prueba de Coombs se usa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en el suero de sujetos sensibilizados a uno o mas antígenos sanguíneos. Es útil en el estudio del suero de mujeres con isoinmunización materno-fetal y se emplea también en otro tipo de pruebas como identificación de anticuerpos autoinmunes, detección de algunos sistemas sanguíneos y pruebas de compatibilidad sanguínea. La prueba indirecta se realiza con eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudio. Durante este periodo, si existe un anticuerpo, este se fija sobre su respectivo determinante antigénico. Una vez fijados, los eritrocitos son igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs, produciendo aglutinación. Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que existen anticuerpos libres en el suero de la persona, los cuales puedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos. Material y equipo: • Pipetas automáticas de 10 µl, 25 µl, 50 µl y 1 ml. • Puntas de pipetas desechables • Tubos de vidrio. • Incubador para tarjetas DG Gel. • Centrifuga para tarjetas DG Gel. Material biológico: • Hematíes reactivo para investigación e identificación de anticuerpos irregulares de Diagnostic Grifols, S.A. • Suero de hemoclasificación. • Muestras de sangre de extracción reciente, recogida con anticoagulante o sin anticoagulante. Reactivos: • Tarjetas DG Gel. • DG Gel Sol. *Reactivos: Tarjetas DG Gel Coombs DG Gel Sol Rango de temperatura: entre 2 y 25 ºC Rango de temperatura: entre 2 y 8ºC Lote: 7049.01 Lote: 7003.701 Cad: 2008-03 Cad: 2008-06 Aspecto: transparente Aspecto: transparente Color: verde Color: incoloro Técnica: Método manual: OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 16
  17. 17. 1. Dejar atemperar (18-25ºC) muestras y reactivo. 2. Inspeccionar el estado de las tarjetas antes de utilizar. 3. Identificar las tarjetas y muestras a utilizar. 4. Despegar con precaución la lamina de metal que cubre los microtubos para prevenir contaminaciones cruzadas entre ellos. 5. Preparar una suspensión con hematíes al 1% en DG Gel Sol (10 µl de sedimento o concentrado de hematíes en 1 ml de DG Gel Sol). Utilizar los hematíes del donante para la PC mayor y hematíes del receptor para la PC menor. Asegurar la suspensión de los hematíes antes de utilizar. 6. Dispensar en el tubo correspondiente, 50 µl de suspensión de los hematíes al 1% del donante (PC mayor) o 50 µl de suspensión de los hematíes al 1% del receptor (PC menor). 7. Añadir 25 µl de suero o plasma del receptor (PC mayor) o 25 µl de suero o plasma del donante (PC menor). 8. Preparar auto control con 50 µl de suspensión de los hematíes al 1% del receptor y 25 µl de suero o plasma del receptor. 9. Incubar 15 minutos a 37 ºC. 10. Centrifugar en la centrifuga para tarjetas DG Gel. 11. Leer los resultados. Interpretación: Negativo: - Banda de hematíes en el fondo de la columna, resto de la columna sin aglutinados visibles. Positivo: +/- Escasos aglutinados de pequeño tamaño en la mitad inferior de la columna. 1+ Algunos aglutinados de pequeño tamaño en la columna. 2+ Aglutinados de tamaño pequeño o mediano a lo largo de la columna. 3+ Banda superior de aglutinados, de tamaño mediano en la mitad superior de la columna. 4+ Banda de hematíes aglutinados en la parte superior de la columna. DP: Doble población (doble banda de hematíes, en el fondo y en la parte superior de la columna. Resultados: Paciente: Lira Cabrera Carlos Alberto (AB+) Donador 1: Orea Valero Erasmo. (A+) Donador 2: Moreno Adolfo. (O+) M1 m1 M2 m2 Autocontrol GR de donador 1 + GR del paciente + GR de donador 2 + GR del paciente + GR del paciente + suero del paciente suero de donador 1 suero del paciente suero de donador 2 suero del paciente - + - + - Por lo antes expuesto se puede deducir que el donador 1 (A+) puede donar eritrocitos al paciente (AB+), lo mismo que el donador 2 (O+) puede donarle eritrocitos; no así plasma por parte de ambos donadores pues la prueba muestra que hubo reacción en ambas pruebas menores. OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 17
  18. 18. Conclusión: Concluyo que es esencial que toda la sangre sea estudiada antes de la transfusión para: Asegurar que todos los glóbulos rojos transfundidos son compatibles con los anticuerpos en el plasma del paciente. Evitar estimular la producción de nuevos anticuerpos contra los glóbulos rojos en el receptor, especialmente anti-Rh D. PRÁCTICA No. 6 PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGÍNEA (Técnica salina) INTRODUCCIÓN Landsteiner constató que cuando un aglutinógeno se pone en contacto con la aglutinina homóloga se produce una aglutinación. OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 18
  19. 19. La compatibilidad sanguínea es la posibilidad de mezcla de sangre sin que se produzcan trastornos, tales como los fenómenos de la lisis o de la aglutinación. A causa de este fenómeno biológico en las transfusiones de sangre no es suficiente con conocer que la sangre del donante y la del receptor son del mismo grupo, o bien que la del donante pertenezca al grupo O (cero), sino que es necesario conocer si la compatibilidad es perfecta, porque ningún otro fenómeno de inmunización interfiera. Es en este sentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas. Además de los 6 antígenos del sistema ABO en los eritrocitos humanos, existen numerosos sistemas de aglutinógenos que contienen muchos antígenos individuales en los eritrocitos (más de 500.000 millones posibles de fenotipos de grupos sanguíneos conocidos). Para evitar accidentes transfusionales es indispensable tener en cuenta el sistema Rh además del ABO. Del sistema de antígenos Rh es el D el más antigénico, y el término Rh positivo indica que el individuo presenta aglutinógeno D. El individuo Rh negativo no tiene antígeno D y forma la aglutinina anti-D en contacto con éste. Las reacciones antígeno-anticuerpo pueden observarse in vitro por: — Hemólisis: la unión antígeno-anticuerpo se traduce en lisis de los eritrocitos en presencia del complemento (siempre que el anticoagulante empleado no capture los iones Ca y Mg necesarios para la activación del complemento). — Aglutinación: los anticuerpos que reaccionan en medio salino se conocen como anticuerpos completos o aglutinantes (comúnmente tipo IgM). OBJETIVO: Determinación de los antigenos del sistema ABO, Rh (D) y su compatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor. EQUIPO MATERIAL Microcentrífuga. *5 Tubos de ensaye. Baño María ó Estufa. *6 Pipetas Pasteur. *1Gradilla. *1 Bulbo. OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 19
  20. 20. *Papel Parafilm. MUESTRA Muestra de sangre con Anticoagulante EDTA. REACTIVOS Antisuero RO-Antiglobulina humana (Poliespecífico Anti IgG C-d) Para prueba de Coombs. LABORATORIOS LAFON S.A de C. V. Fecha de Caducidad: 31-Ene-09 Lote: 406 Hecho en México Aspecto: Transparente: Color: Verde TÉCNICA Lavar los eritrocitos con solución salina (3 veces). SALINA RÁPIDA: 1. Agregar una gota de Eritrocitos Lavados. 2. Diluirlo al 3-5% con solución salina 0.9%. 3. Agregar 2 gotas de suero. 4. Centrifugar y observar, anotar desprendimiento del botón. PRUEBA MAYOR PRUEBA MENOR AUTOTESTIGO G. Rojos del DONADOR G. Rojos del RECEPTOR G. Rojos del RECEPTOR + (paciente) (paciente) Suero del RECEPTOR + + (paciente) Suero del DONADOR Suero del RECEPTOR (paciente) SALINA 37° BAÑO MARÍA: 1. Incubar tubos a Baño maría a 37°C durante 1 hora (o 20 min). 2. Centirfugar después de haber pasado el tiempo. 3. Desprender el botón de eritrocitos y observar. AGLUTINACIÓN– No es compatible. NO AGLUTINACIÓN - Lavar 3 veces. SALINA COOMBS: OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 20
  21. 21. 1. Con solución salina 0.9% lavar los eritrocitos de los tubos q no tuvieron aglutinación 3 veces. 2. Decantar y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs AGLUTINACIÓN – No es compatible. NO AGLUTINACIÓN - Lavar 3 veces. RESULTADOS Paciente: Madrigal Méndez Luis Eduardo (B+) Folio: 009164 Fecha:30/10/07 Donador 1: Torres Avilés José Ramón (O+) Folio: 022604 Fecha:31/10/07 Donador 2: Rodríguez Núñez José Angel (A+) Folio: 022605 Fecha:31/10/07 SALINA RÁPIDA: M1 m1 M2 m2 Autotestigo GR de donador 1 GR del paciente GR de donador 2 GR del paciente GR del paciente + suero del + suero de + suero del + suero de + suero del paciente donador 1 paciente donador 2 paciente - 4+ 4+ 4+ - SALINA 37° BAÑO MARÍA: M1 m1 M2 m2 Autotestigo - 4+ 4+ 4+ - Compatible No No No Compatible compatible compatible compatible SALINA COOMBS: M1 Autotestigo - - Compatibl Compatible e Por lo tanto se puede decir que el donador 1 (O+) puede donar suero al paciente (B+), debido a que en el suero no hay anticuerpos de ningún tipo que reaccionen con los antígenos de los eritrocios del Donador 1. Mientras tanto el Donador 2 no puede donar al Paciente ni suero ni eritrocitos. OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 21
  22. 22. INTERPRETACIÓN PRUEBA POSITIVA: Existe una aglutinación de las células sanguíneas que indica la presencia del antígeno A o B. En el suero de Coombs notamos si esta la precencia de Antígeno D en los eritrocitos. La hemólisis no se debe interpretar como resultado positivo ya que puede indicar contaminación del reactivo. PRUEBA NEGATIVA: La no aglutinación indica un resultado negativo e indica que las células son negativas para Antígenos del sisitema ABO y D CONCLUSIÓN He concluido que en las transfusiones de sangre no es suficiente con conocer que la sangre del donante y la del receptor son del mismo grupo, o bien que la del donante pertenezca al grupo O (cero), sino que es necesario conocer si la compatibilidad es perfecta, porque ningún otro fenómeno de inmunización interfiera. Es en este sentido por lo que son empleadas las pruebas cruzadas. Práctica No. 7 “Prueba de compatibilidad sanguínea (técnica albumina)” Introducción: La tipificación de sangre identifica el tipo sanguíneo determinando antígenos presentes en los eritrocitos, detecta aloanticuerpos en contra esos antígenos. Así los aloanticuerpos pueden aparecer naturalmente o ser inducidos y pueden ser dirigidos contra del grupo conocido o a los antígenos de superficie de los eritrocitos. La prueba de compatibilidad sanguínea o cross matching esta formada por la prueba mayor y menor.La prueba de cruzamiento mayor para los aloanticuerpos, consiste en probar el plasma del receptor contra los OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 22
  23. 23. glóbulos rojos del donante. Es incompatible cuando se genera una reacción hemolítica, los eritrocitos del donante se destruyen por los aloanticuerpos del plasma del receptor. La prueba menor es una prueba para los aloanticuerpos del plasma del donante en contra los glóbulos rojos del receptor. Una incompatibilidad menor es una causa menos frecuente para causar una reacción en contra una transfusión, porque el volumen de plasma del donante es menor y es diluido marcadamente en el receptor. Para llevar a cabo dicho procedimiento se utilizan diversos reactivos como potencializadores que mejoran la unión de eritrocitos con algún tipo de anticuerpo. Uno de esos potencializadores es la albúmina. La albumina bovina polimerizada es un reactivo muy utilizado en el laboratorio de inmunohematologia y en centros de bancos de sangre, funciona como un potencializador que facilita la reaccion de aglutinación de eritrocitos sensibilizados. Al final de la prueba se prueban los eritrocitos con el reactivo de Coombs. El principio de la prueba de Coombs fue descrito por Moreschi en 1908, pero Coombs, Mourant y Race, en 1946, la introdujeron en el estudio de los grupos sanguíneos y anticuerpos, cuando una parte de sangre (suero) fue usada para la inoculación de animales para inmunizarlos con proteína humana, utilizando el anticuerpo obtenido en la detección de los llamados anticuerpos incompletos. Esta prueba se usa para determinar la presencia de anticuerpos no aglutinantes en el suero de sujetos sensibilizados a uno o mas antígenos sanguíneos. Es útil en el estudio del suero de mujeres con isoinmunización materno- fetal y se emplea también en otro tipo de pruebas como identificación de anticuerpos autoinmunes, detección de algunos sistemas sanguíneos y pruebas de compatibilidad sanguínea. La prueba indirecta se realiza con eritrocitos normales incubados in Vitro con el suero de estudio. Durante este periodo, si existe un anticuerpo, este se fija sobre su respectivo determinante antigénico. Una vez fijados, los eritrocitos son igualmente lavados y se agrega el reactivo de Coombs, produciendo aglutinación. Una prueba de Coombs indirecta positiva significa que existen anticuerpos libres en el suero de la persona, los cuales puedan ser igualmente auto-anticuerpos o isoanticuerpos. Objetivo: Determinación de los antígenos del sistema ABO, Rh (D) y su compatibilidad entre un paciente Donador y un Paciente Receptor. Material y equipo:  5 Tubos de ensaye.  6 Pipetas Pasteur.  1Gradilla.  1 Bulbo.  Papel Parafilm.  Microcentrífuga.  Baño María ó Estufa. Material biológico:  Muestras de sangre de extracción reciente, recogida con anticoagulante o sin anticoagulante. Reactivos: Suero de Coombs* Albúmina bovina ° *Suero anti-globulina humana Lafon. Lote 406. Cad: 31/01/09. Color: verde. Aspecto: transparente. °Albumina de bovino polimerizada Interbiol. Lote APO107. Cad: 15/01/09. Color: incoloro. Aspecto: transparente. OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 23
  24. 24. Técnica: 1. Montar prueba mayor 1 y 2, prueba menor 1 y 2, y autotestigo, con el procedimiento ya anteriormente conocido. 2. Agregar 2 gotas de albúmina al 22%. 3. Centrifugar 20 segundos. 4. observar aglutinación o hemolisis, o no aglutinación. 5. A los tubos con lecturas negativas, incubar 20 minutos en baño María a 37 °C. 6. Centrifugar y observar: • Aglutinación o hemólisis: reportar incompatible. • No aglutinación: llevar a Coombs. 7. Lavar tres veces, decantar, y quitar el exceso de salina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20 segundos y observar: • Aglutinación o hemólisis: reportar incompatible. • No aglutinación: reportar compatible. Resultados: 1 PRUEBA MAYOR 1: 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de G.R. al 3-5% del donador 1. 2 PRUEBA MENOR 1: 2 Gotas de suero del donador 1 + 1 gota de G.R. al 3-5% del paciente. 3 PRUEBA MAYOR 2: 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de G.R. al 3-5% del donador 2. 4 PRUEBA MENOR 2: 2 Gotas de suero del donador 2 + 1 gota de G.R. al 3-5% del paciente. 5 AUTOTESTIGO: 2 Gotas de suero del paciente + 1 gota de G.R. al 3-5% del paciente. M1 m1 M2 m2 Autotestigo Con albúmina. - - - - - Después de incubación a 37 °C. - - - - - Después de Coombs. - - - - - Después de validación con glóbulos + + + + + positivos. Interpretación: Prueba positiva: Alutinación o hemolisis. Indica no compatibilidad. Prueba negativa:No aglutinación. Indica compatibilidad. Esquemas: OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 24
  25. 25. Conclusión: Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguínea en su modalidad con albúmina bovina ofrece mucha ventaja al ser, al igual que otros reactivos, un potencializador de la reacción antígeno-anticuerpo. Esto permite que el operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certeza en los resultados que obtenga. PRACTICA No. 8 PRUEBA DE COMPATIBILIDAD SANGUINEA PRUEBA DE LISS. OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 25
  26. 26. FUNDAMENTO: LISS es utilizado para reducir la fuerza iónica del medio de reacción en los procedimientos de detección e identificación de anticuerpos y en las pruebas de compatibilidad. La presencia de este reactivo refuerza la interacción antígeno - anticuerpo durante la incubación. GENERALIDADES: El uso de solución salina de baja fuerza iónica fue descrito inicialmente en 1964 por Hughes-Jones y col. y Elliot y col., pero en ese tiempo su uso era limitado ya que la concentración molar obtenida provocaba la hemólisis de los eritrocitos suspendidos. En 1974, Low y Messeter describieron el uso rutinario de la solución Liss de 0,03 M que lograba reducir el tiempo de incubación y no presentaba tendencia a la hemólisis al ser suspendidos en salina a baja fuerza iónica, restableciendo la presión osmótica de la solución mediante la adición de glicina. Las soluciones de baja fuerza iónica son actualmente las más utilizadas en inmunohematología, provocando un aumento en la velocidad de asociación entre antígenos y anticuerpos permitiendo así acortar el tiempo de incubación de 60 minutos a 10-15 minutos, sin sacrificar la sensibilidad de las mismas y sin costos elevados.Se ha observado que las reacciones antígeno-anticuerpo se ven potenciadas al reducir la fuerza iónica del medio de reacción. La fuerza iónica es uno de los factores más importantes que determinan la tasa y la cantidad de captación de anticuerpos por parte de los eritrocitos. El uso de medios de reacción de baja fuerza iónica permite disminuir el tiempo de incubación y potenciar las reacciones de los anticuerpos sin incrementar las reacciones inespecíficas. Los iones Na+ y Cl-, presentes en la solución salina fisiológica, se agrupan alrededor de las moléculas de antígeno y anticuerpo neutralizando sus cargas opuestas, lo cual dificulta la unión entre ellos. Este efecto se reduce utilizando soluciones de baja fuerza iónica y disminuyendo de esta manera la incubación de las pruebas. OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 26
  27. 27. En esta etapa de sensibilización, las posibilidades de asociación pueden incrementarse mediante agitación, centrifugación y/o variación de la concentración del anticuerpo. Después de que el anticuerpo se ha fijado al antígeno, los eritrocitos sensibilizados deben unirse para dar lugar a la aglutinación visible; esta red también solidifica y estabiliza la reacción. En esta etapa la reacción depende de factores como las características del anticuerpo, localización en la membrana y número de sitios antigénicos, fuerzas que mantienen la distancia entre los eritrocitos. Las características del anticuerpo que deben considerarse son el tamaño del anticuerpo involucrado y el número de sitios de combinación con el antígeno. Los anticuerpos IgM pueden establecer puentes entre los eritrocitos y aglutinarlos espontáneamente en solución salina, mientras que los IgG no, ya que las IgM, pentaméricas poseen 10 sitios de combinación con el antígeno y las IgG dímeros sólo dos sitios. Los eritrocitos tienen una carga neta negativa en su superficie, su interacción con los iones del medio altera esta carga y producen una carga neta crítica denominada potencial zeta, y la reducción de dicha carga permite que los eritrocitos se aproximen lo suficiente para que sean aglutinados por medio de los IgG que los sensibilizaron. Las soluciones de baja fuerza ionica empleadas en banco de sangre tienen un pH entre 6.5 – 7.0, se recomienda una osmolalidad de 270 – 305 mosm/kg y una conductividad de 3.7 mm/cm. El control diario implica el examen de su apariencia física: ausencia de turbidez, particulas o sedimento, así como, corroborar la capacidad para generar hemólisis, crenacion o prueba de coombs positiva en eritrocitos normales. Cada lote nuevo se valora mediante el rastreo de un anticuerpo ya sea un anti- D, un anti- jk, anti- fy o anti- kell diluido; se compara su capacidad de detección contra un medio salino normal incubando 10min a 37ºC, en LISS debe poder rastrearse un anticuerpo, en tanto que en medio salino no. MATERIAL Y EQUIPO: Material Cantidad 10 Tubos de ensayo de 12 x 75 1 Gradilla 10 Pipetas pasteur OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 27
  28. 28. 1 Bulbo 1 Marcador 1 Microcentrífuga 1 Baño María MATERIAL BIOLOGICO: Glóbulos rojos lavados al 3 - 5% Suero REACTIVOS: Reactivo de LISS Reactivo de Coombs TECNICA: 1.- Lavar los eritrocitos:  Separar el suero del paquete de glóbulos rojos.  Agregar cierta cantidad de eritrocitos a un tubo de ensayo y agregarle solución salina  Centrifugar y decantar  Repetir este proceso 3 veces 2.- Realizar la Prueba de LISS:  Enumerar los tubos  Poner dos gotas de LISS en cada tubo, agregar una gota de eritrocitos lavados y al 3 - 5%, según el número de tubo correspondiente,  Mezclar y centrifugar un minuto, decantar el sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar el exceso del reactivo.  Poner nuevamente 2 gota de LISS, resuspender por agitación, agregar 2 gotas de suero problema, mezclar, incubar 15 minutos a 37º C. centrifugar 30 seg. A 1000 R.P.M.  Anotar los resultados. 3.- A las pruebas negativas realizar Coombs:  Lavar 3 veces las células, agregar suero de Coombs, centrifugar 30 seg.  Leer aglutinaciones y anotar resultados. REACTIVOS UTILIZADOS: REACTIVO MARCA FECHA DE ASPECTO COLOR LOTE CADUCIDAD OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 28
  29. 29. Suero Lafon 31/ 01/ 2009 Transparente Verde 406 Antiglobuina humana LISS Casero 1 año Transparente Transp realiza arente do en ------ CMN ---- SIGLO XXI PACIENTE: ASCANIO MENDEZ JOSUE O (+) DONADOR 1: GARCIA CARBAJAL OSCAR O (+) DONADOR 2: GARCIA SUAREZ ORLANDO A (+) RESULTADOS: Tubo Resultado M1 NEGATIVO m1 NEGATIVO M2 POSITIVO M2 NEGATIVO AUTOTES. NEGATIVO INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS La hemólisis o la aglutinación representan un resultado positivo e indican la presencia de una reacción antígeno-anticuerpo. Los resultados negativos no se vera aglutinación o hemolisis. ESQUEMAS: CONCLUSIONES: Concluyo que la prueba de compatibilidad sanguínea en su modalidad con liss ofrece mucha ventaja al ser, al igual que otros reactivos, un potencializador de la reacción antígeno-anticuerpo. Esto permite que el operador o realizador de la prueba tenga mayor confianza y certeza en los resultados que obtenga. OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 29
  30. 30. PRACTICA 9 INMUNOHEMATOLOGIA DETERMINACION DE COOMBS DIRECTO INTRODUCCION: PRUEBA DE COOMBS DIRECTA El examen de Coombs directo se utiliza para detectar autoanticuerpos contra los propios glóbulos rojos (GR) de un individuo. Es una prueba que sirve para demostrar el revestimiento de los eritrocitos in vivo, (mientras los eritrocitos están circulando en el individuo). La prueba se realiza agregando directamente el reactivo de Coombs a los eritrocitos, previamente lavados para eliminar otras proteínas no fijadas a el; una prueba directa positiva significa que la relación antígeno-anticuerpo ocurrió in vivo, es decir que la fijación del anticuerpo sobre el antígeno se realizo en el organismo del individuo en estudio. Las indicaciones principales de esta prueba son: diagnostico de enfermedades hemolíticas, ictericia o anomalías en la apariencia de los glóbulos rojos bajo el microscopio, ya que estos anticuerpos algunas veces destruyen los glóbulos rojos y causan anemia; para investigar reacciones en transfusiones. Para investigar la inducción de drogas en células rojas sensibilizadas, medicamentos (por ejemplo, quinidina, metildopa, procainamida y otros) que pueden llevar a la producción de estos anticuerpos. OBJETIVO: Determinar la presencia de anticuerpos en la superficie de los glóbulos rojos del individuo. MATERIAL • 10 Tubos de 12/75 • 10 Pipetas Pasteur • 1 Gradilla. • 1 Bulbo. • Papel Parafilm. • Microcentrífuga. • Baño María a 37°C. MUESTRA BIOLOGICA: Eritrocitos lavados de (3-5%) del donador o paciente. REACTIVO: Suero de Coombs* *Suero anti-globulina humana Lafon. Lote 406 Cad: 31/01/09. Color: verde. Aspecto: transparente. TECNICA: OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 30
  31. 31. Colocar en un tubo de ensaye dos gotas de suero de Coombs mas una gota de globulos rojos (3-5%). Centrifugar a 1000 rpm durante 20 seg. Desprender el boton suavemente y buscar la presencia de aglutinacion. Rotular y enumerar 8 tubos de ensayes con las diferentes diluciones (½,¼,1/8...) Enumerar 8 tubos mas del 1 al 8. Agregar a cada tubo de las diluciones 10 gotas de solucion salina mas 10 gotas de suero de Coombs. Colocar Al primer tubo de la dilucion 1 gota de globulos rojos (3-5%), mezclar completamente y agregar al tubo #1 Centrifugar todos los tubos a 1000 rpm durante 20 seg. LECTURA: Aglutina.- Prueba de Coombs directa es positiva. No aglutina.- Prueba de Coombs directa es negativa. ESQUEMAS y RESULTADOS: DILUCIONES ½ positiva ¼ positiva 1/8 positiva 1/16 negativa 1/32 negativa 1/64 negativa 1/128 negativa 1/256 negativa CONCLUCION: He concluido que la prueba de Coombs directa es una prueba que se utiliza para medir la presencia de anticuerpos en la superficie de los glóbulos rojos que se encuentran circulando en el paciente y se realiza para investigar reacciones en transfusiones además sirve para la determinación de anemia hemolítica autoinmune entre otras afecciones. Practica 10 IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS IRREGULARES Fundamento: OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 31
  32. 32. Los anticuerpos del sistema ABO aparecen una vez que el individuo entra en contacto con el medio ambiente y en el cual se encuentran microorganismos como algunas bacterias coliformes que contienen sustancias químicas en su estructura parecidas a las de este sistema. Por anticuerpos regulares debemos identificar a los que existen en todos los individuos y que éstos tendrán durante toda su vida. Los anticuerpos irregulares son los que no están de esa manera, aunque en el caso de los naturales no se conoce a ciencia cierta qué o cómo se induce su producción. Los adquiridos se conocen también como inmunes y son el resultado de la exposición a antígenos desconocidos por el individuo al momento de la transfusión o en las mujeres por el embarazo; estos anticuerpos son dirigidos contra antígenos de sistemas diferentes al ABO. Los anticuerpos naturales regulares son preferentemente inmunoglobulinas M, las cuales fijan de manera tan eficiente el complemento que pueden provocar lisis intravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso la muerte del paciente. Los anticuerpos adquiridos o inmunes son generalmente inmunoglobulinas G, las cuales producen hemólisis extravascular en el bazo o en el hígado mediante fagocitosis del complejo eritrocito más anticuerpo. Los aloanticuerpos irregulares (adquiridos) más comunes en nuestra población son los que involucran a los sistemas MNSs, P1, Kidd (Jka, Jkb), Duffy (Fya, Fyb), Kell, Lewis y Diego. OBJETIVO: identificación del anticuerpo irregular a través de las diferentes técnicas. • EQUIPO MATERIAL 1. Microcentrífuga. • 10 Tubos de ensaye. 2. Baño María ó Estufa. • 10 Pipetas Pasteur. • 1Gradilla. • 1 Bulbo. • Papel Parafim. MATERIAL BIOLOGICO: • Glóbulos rojos lavados al 3 - 5% • Suero • REACTIVOS Reactivos: 1. Suero de Coombs* 2. Albúmina bovina OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 32
  33. 33. 3. SOLUCION SALINA 4. SOLUCION DE LISS TÉCNICA SOLUCION SALINA Lavar los eritrocitos con solución salina (3 veces). SALINA RÁPIDA: Agregar una gota de Eritrocitos Lavados. Diluírlo al 3-5% con solución salina 0.9%. Agregar 2 gotas de suero. Centrifugar y observar, anotar desprendimiento del botón. SALINA 37° BAÑO MARÍA: 1) Incubar tubos a Baño maría a 37°C durante 1 hora (o 20 min). 2) Centirfugar después de haber pasado el tiempo. 3) Desprender el botón de eritrocitos y observar. AGLUTINACIÓN– No es compatible. NO AGLUTINACIÓN - Lavar 3 veces. SALINA COOMBS: 1) Con solución salina 0.9% lavar los eritrocitos de los tubos q no tuvieron aglutinación 3 veces. 2) Decantar y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs AGLUTINACIÓN – No es compatible. NO AGLUTINACIÓN - Lavar 3 veces. TECNICA LISS 1. Poner dos gotas de LISS en cada tubo, agregar una gota de eritrocitos lavados y al 3 - 5%, según el número de tubo correspondiente, 2. Mezclar y centrifugar un minuto, decantar el sobrenadante y con la ayuda de una gasa limpiar el exceso del reactivo. 3. Poner nuevamente 2 gota de LISS, resuspender por agitación, agregar 2 gotas de suero problema, mezclar, incubar 15 minutos a 37º C. centrifugar 30 seg. A 1000 R.P.M. 4. Anotar los resultados. A las pruebas negativas realizar Coombs: 1. Lavar 3 veces las células, agregar suero de Coombs, centrifugar 30 seg. 2. Leer aglutinaciones y anotar resultados. OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 33
  34. 34. TECNICA ALBUMINA BOVINA 8. Agregar 2 gotas de albúmina al 22%. 9. Centrifugar 20 segundos. 10.observar aglutinación o hemolisis, o no aglutinación. 11.A los tubos con lecturas negativas, incubar 20 minutos en baño María a 37 °C. 12.Centrifugar y observar: • Aglutinación o hemólisis: reportar incompatible. • No aglutinación: llevar a Coombs. 13.Lavar tres veces, decantar, y quitar el exceso de salina con gasa y agregar 2 gotas de reactivo de Coombs y centrifugar 20 segundos y observar: • Aglutinación o hemólisis: reportar incompatible. • No aglutinación: reportar compatible. Resultados ANTICUERPO IRREGULAR: Anticuerpo c. Interpretación Estos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo M y ocasionalmente tipo G, y debido a esa temperatura de reacción carecen de importancia clínica salvo que su reacción ocurra también a 37 °C, su importancia radica en pacientes que serán intervenido a 22 ºc como es el caso de operación de corazón. Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura óptima de reacción a 37 °C, a Estos anticuerpos tienen una relevante importancia clínica ya que se les asocia con reacciones transfusionales de intensidad moderada a severa, que pueden ocasionar la muerte. Esquemas: CONCLUSION: He concluido que es importante determinar los anticuerpos irregulares ya que estos anticuerpos tienen una relevante importancia clínica ya que se les asocia con reacciones transfusionales de intensidad moderada a severa. OBTENIDO DE: www.quimicaclinicauv.blogspot.com 34

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