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ESTUDIO MICROSCOPICO DE CÉLULAS Y TEJIDOS
 Las células pueden ser observadas en estado vivo
  En cultivos in Vitro
  Preparación de cortes histologicos
        Se realizan rebanadas finisimas (cortes)
   Técnica a la parafina.-
       1.- Obtención del tejido.- biopsia
       2.- Fijación.- formaldehído al 4 %
        3.- Deshidratación.- En alcohol
         4.- Aclaración.- Con Xilol
          5.- Inclusión.- Inclusión en parafina
          6.- Corte.- con microtomo
         7.- Tinción y montaje.- se sustituye la
         parafina por agua
Partes de un microscopio óptico
OCULAR
                   OBJETIVO:

SISTEMA ÓPTICO     CONDENSADOR
                   DIAFRAGMA:

                   FOCO:




                               SOPORTE
                               PLATINA
SISTEMA MECANICO               CABEZAL

                               REVÓLVER

                               TORNILLOS DE ENFOQUE
MICROSCOPIO ELECTRONICO.-
   * Uso de haz de electrones
  * Resolución de 1 nm.



MICROSCOPIO ELECTRONICO POR TRANSMISIÓN

PREPARACIÓN DE CORTES CON ME.
Fijación.- con glutaraldeido y post fijación con acido osmico (+A.Tánico)
Inclusión.-Usando resinas (Epson, Araldite o Spur) a 60 º C
Corte.- 60 a 80 nm de espesor
Tinción.- con acido osmico, sales de Uranio y Plomo
Microfotográficas electrónicas.- Electrones
invisibles pasan por pantalla fluoroscópica
que proporciona macrofotografía electrónica.

MICROSCOPIA
ELECTRONICA DE
BARRIDO.-  (tridimencional)


     Rastrea la muestra

     Generan imagen en
     televisión llamada
     microfotografia
     electronica
PLANOS DE CORTES HISTOLOGICOS.-
– Longitudinal
– Transversal
– Oblicuo rasante o
  tangencial
– Imágenes de
  tubos (vasos
  sanguíneos)
– Tabiques o
  septos
  (Hepatocitos)
TINCIÓN HISTOLÓGICA.-
     Hematoxilina
     Eosina
Coloración basófila y acidófila
Sustancia basofila afinidad por colorantes
basicos o alcalinos
Sustancia acidofila afinidad por colorantes
ácidos

 Reacción de ácido periódico de Schiff (PAS).- para
 teñir polisacaridos
 Demostrar presencia de glúcogeno
 Color violeta o magenda.
   Colorantes de grasa.- se usa cortes por congelación.
   Escarlata R. Sudan III o Sudan IV
ARTEFACTOS.-
   Degeneración post morten

    + Contracción
    + Precipitado
    + Pliegues y arrugas
    + Muescas de la cuchilla
    + Manejo burdo de los tejidos
MICROSCOPIO ELECTRONICO.-
 * Uso de haz de electrones
* Resolución de 1 nm.
MICROSCOPIO ELECTRONICO POR TRANSMISIÓN
PREPARACIÓN DE CORTES CON ME.
Fijación.- con glutaraldeido y post fijación con acido osmico (+A.Tánico)
Inclusión.-Usando resinas (Epson, Araldite o Spur) a 60 º C
Corte.- 60 a 80 nm de espesor
Tinción.- con acido osmico, sales de Uranio y Plomo
Microscopio comun (o de luz) y sus aplicaciones.
                                 Amplifica la imagen
             Permite identificar el objeto con mayor detalle (resolución)
Microscopio por contraste de fase.-permite observación de células vivas
Microscópio por fluorosencia.- Señala sitios de localización especifica
Tinción por inmunofluorescencia.- con colorantes fluorescentes
(fluoresceína)
Tinción inmunoaurica.- con oro coloidal
EMPLEO DEL MICROSCOPIO DE LUZ
Objetivo de poca potencia (objetivo de rastreo)
Objetivo de gran amplificación
Objetivo de inmersión en aceite.
Necesidad de conservar limpias las
lentes.-
Suciedad en el cubre objetos
Aceite en el objetivo
Suciedad en el ocular
Suciedad en el condensador.
Tecnica histologica

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Tecnica histologica

  • 1. ESTUDIO MICROSCOPICO DE CÉLULAS Y TEJIDOS Las células pueden ser observadas en estado vivo En cultivos in Vitro Preparación de cortes histologicos Se realizan rebanadas finisimas (cortes) Técnica a la parafina.- 1.- Obtención del tejido.- biopsia 2.- Fijación.- formaldehído al 4 % 3.- Deshidratación.- En alcohol 4.- Aclaración.- Con Xilol 5.- Inclusión.- Inclusión en parafina 6.- Corte.- con microtomo 7.- Tinción y montaje.- se sustituye la parafina por agua
  • 2.
  • 3.
  • 4.
  • 5.
  • 6.
  • 7.
  • 8.
  • 9.
  • 10.
  • 11.
  • 12.
  • 13.
  • 14.
  • 15. Partes de un microscopio óptico
  • 16. OCULAR OBJETIVO: SISTEMA ÓPTICO CONDENSADOR DIAFRAGMA: FOCO: SOPORTE PLATINA SISTEMA MECANICO CABEZAL REVÓLVER TORNILLOS DE ENFOQUE
  • 17.
  • 18.
  • 19.
  • 20.
  • 21.
  • 22.
  • 23.
  • 24.
  • 25. MICROSCOPIO ELECTRONICO.- * Uso de haz de electrones * Resolución de 1 nm. MICROSCOPIO ELECTRONICO POR TRANSMISIÓN PREPARACIÓN DE CORTES CON ME. Fijación.- con glutaraldeido y post fijación con acido osmico (+A.Tánico) Inclusión.-Usando resinas (Epson, Araldite o Spur) a 60 º C Corte.- 60 a 80 nm de espesor Tinción.- con acido osmico, sales de Uranio y Plomo
  • 26.
  • 27. Microfotográficas electrónicas.- Electrones invisibles pasan por pantalla fluoroscópica que proporciona macrofotografía electrónica. MICROSCOPIA ELECTRONICA DE BARRIDO.- (tridimencional) Rastrea la muestra Generan imagen en televisión llamada microfotografia electronica
  • 28. PLANOS DE CORTES HISTOLOGICOS.- – Longitudinal – Transversal – Oblicuo rasante o tangencial – Imágenes de tubos (vasos sanguíneos) – Tabiques o septos (Hepatocitos)
  • 29. TINCIÓN HISTOLÓGICA.- Hematoxilina Eosina Coloración basófila y acidófila Sustancia basofila afinidad por colorantes basicos o alcalinos Sustancia acidofila afinidad por colorantes ácidos Reacción de ácido periódico de Schiff (PAS).- para teñir polisacaridos Demostrar presencia de glúcogeno Color violeta o magenda. Colorantes de grasa.- se usa cortes por congelación. Escarlata R. Sudan III o Sudan IV
  • 30. ARTEFACTOS.- Degeneración post morten + Contracción + Precipitado + Pliegues y arrugas + Muescas de la cuchilla + Manejo burdo de los tejidos MICROSCOPIO ELECTRONICO.- * Uso de haz de electrones * Resolución de 1 nm. MICROSCOPIO ELECTRONICO POR TRANSMISIÓN PREPARACIÓN DE CORTES CON ME. Fijación.- con glutaraldeido y post fijación con acido osmico (+A.Tánico) Inclusión.-Usando resinas (Epson, Araldite o Spur) a 60 º C Corte.- 60 a 80 nm de espesor Tinción.- con acido osmico, sales de Uranio y Plomo
  • 31. Microscopio comun (o de luz) y sus aplicaciones. Amplifica la imagen Permite identificar el objeto con mayor detalle (resolución) Microscopio por contraste de fase.-permite observación de células vivas Microscópio por fluorosencia.- Señala sitios de localización especifica Tinción por inmunofluorescencia.- con colorantes fluorescentes (fluoresceína) Tinción inmunoaurica.- con oro coloidal EMPLEO DEL MICROSCOPIO DE LUZ Objetivo de poca potencia (objetivo de rastreo) Objetivo de gran amplificación Objetivo de inmersión en aceite. Necesidad de conservar limpias las lentes.- Suciedad en el cubre objetos Aceite en el objetivo Suciedad en el ocular Suciedad en el condensador.